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genotyping P M1 M2 F1 F2 N Primer 바꾸기전 : hetero일 경우 175, 280에서 2개의
P M1 M2 M3 M4 F1 F2 F3 F4 F5 N Primer 바꾸기전 : hetero일 경우 175, 280에서 2개의 band가 나타남 (P) PCR condition 94℃ 3' 1 30" ╗ 66.8℃ 1' 35 cycle 72℃ ╝ 2' 4℃ forever P M1 M2 F1 F2 N PCR condition Primer 바꾸고 난후1 Hetero(P)에서 175, 280에서 2개의 band가 나타나야 하는데 아래쪽 175위치 band가 나타나지 않음 94℃ 3' 1 30" ╗ 66.8℃ 1' 35 cycle 72℃ ╝ 2' 4℃ forever PCR condition P N 94℃ 3' 1 30" ╗ 65℃ 1' 30 cycle 72℃ ╝ 2' 4℃ forever Primer 바꾸고 난후2 Cycle 수를 바꾸고, 온도를 바꾸는 조건을 바꾸어 해 보아도 아래쪽 band는 나타나지 않았음
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Primer sequence PCR product size PCR mixture information ddH2O 5.38
company working conc. Final conc Vol. (ul) ddH2O 5.38 dNTP Takara 2.5mM 0.2mM 0.96 Rh-90F 20 pmol/ul 1 pmol/mcL 0.6 Rh-91R Rh-92F Rh-93R 10× buffer solgent 1X 1.2 Taq polymerase 5 units/ul 0.03U/ul 0.06 gDNA 15ng/ul 200ng 2 total vol. 12 PCR general information primer code : CD44 PCR production size : KO = 280 bp Hetero = 175, 280 bp Wild type = 175 bp PCR vol. : 12ul Primer sequence Rh-90F 5'-GGC GAC TAG ATC CCT CCG TT -3' Rh-91R 5'- ACC CAG AGG CAT ACC AGC TG -3' Rh-92F 5'- CTT GGG TGG AGA GGC TAT TC- 3' Rh-93R 5'- AGG TGA GAT GAC AGG AGA TC -3' PCR product size KO = 280 bp Hetero = 175, 280 bp Wild type = 175 bp
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