Gene Cloning.

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1 Gene Cloning

2 아토피 가계적(家系的) 또는 유전적으로 나타나는 알레르기성 질환
아토피 연구회의 최근 연구에 따르면 우리나라 어린이 5명 중 1명은 아토피 성인도 3% 이상이 아토피 환자로 추정 아토피 피부염의 발생원인은 보편적으로 유전적, 면역학적 요인이 관여하는 것으로 추정 기타 환경적, 정신적 요인 등이 악화요인으로 작용 이후 알러지 체질 가족의 약 70%에서 아토피 피부염이 발견되고 있는 것으로 보아 유전적 요인에 중점을 두어 발병 유전자를 찾아보기로 함

3 발병유전자 아토피 피부염 환자의 공통적 증상 2 가지 따라서, 면역 글로블린 IgE와 관련된 유전자를 찾고자 함
세포매개성 면역기능 저하 따라서, 면역 글로블린 IgE와 관련된 유전자를 찾고자 함 아토피가 Human Genome Project 상에서 11번 유전자와 연관있다는 연구자료 발견 NCBI를 이용해 11번 유전자의 q arm의 12~13 band에 걸쳐 있는 MS4A gene을 찾음 MS4A(membrane-spanning 4-domains, subfamily A) MS4A2 = FcεRⅠβ

4 MS4A2 Start : 59,612,713 bp from pter End : 59,622,593 bp from pter
Size : 9,880 bases Orientation :  plus strand

5 MS4A2 Gene Sequence …

6 (1) Vector A replicator : pENTR™221 A selectable marker : Kanamycin
A multiple cloning site (MCS) : restriction sites

7 Restriction Mapping

8 (2) PCR 1. Select a gene to be cloned : MS4A2
2. Determine gene source : ncbi 3. Get full-length sequence : get the ORF sequence (CDS) ATGGACACAGAAAGTAATAGGAGAGCAAATCTTGCTCTCCCACAGGAGCCTTCCAGTGTG CCTGCATTTGAAGTCTTGGAAATATCTCCCCAGGAAGTATCTTCAGGCAGACTATTGAAG TCGGCCTCATCCCCACCACTGCATACATGGCTGACAGTTTTGAAAAAAGAGCAGGAGTTC CTGGGGGTAACACAAATTCTGACTGCTATGATATGCCTTTGTTTTGGAACAGTTGTCTGC TCTGTACTTGATATTTCACACATTGAGGGAGACATTTTTTCATCATTTAAAGCAGGTTAT CCATTCTGGGGAGCCATATTTTTTTCTATTTCTGGAATGTTGTCAATTATATCTGAAAGG AGAAATGCAACATATCTGGTGAGAGGAAGCCTGGGAGCAAACACTGCCAGCAGCATAGCT GGGGGAACGGGAATTACCATCCTGATCATCAACCTGAAGAAGAGCTTGGCCTATATCCAC ATCCACAGTTGCCAGAAATTTTTTGAGACCAAGTGCTTTATGGCTTCCTTTTCCACTGAA ATTGTAGTGATGATGCTGTTTCTCACCATTCTGGGACTTGGTAGTGCTGTGTCACTCACA ATCTGTGGAGCTGGGGAAGAACTCAAAGGAAACAAGGTTCCAGAGGATCGTGTTTATGAA GAATTAAACATATATTCAGCTACTTACAGTGAGTTGGAAGACCCAGGGGAAATGTCTCCT CCCATTGATTTATAG

9 PCR Primer

10 PCR 4. Pick primer

11 PCR 4. Pick primer No mapping information

12 PCR 4. Pick primer

13 Reference