실험 전 체크해야 할 기구 및 시약 전자저울 & weighing dish 전자저울 & weighing dish Howard Mold Counting 전용 Eye-piece Howard Mold Counting 전용 Eye-piece 시약 : 팩틴 또는 CMC, 1% NaOH,

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2 실험 전 체크해야 할 기구 및 시약 전자저울 & weighing dish 전자저울 & weighing dish Howard Mold Counting 전용 Eye-piece Howard Mold Counting 전용 Eye-piece 시약 : 팩틴 또는 CMC, 1% NaOH, 2-Octanol 시약 : 팩틴 또는 CMC, 1% NaOH, 2-Octanol Hot plate &stirrer 또는 burner Hot plate &stirrer 또는 burner 1 ㎖ 마이크로 피펫, 피펫팁 1 ㎖ 마이크로 피펫, 피펫팁 실험용 티슈 실험용 티슈 증류수 증류수 렌즈페이퍼 렌즈페이퍼 메스실린더 : 100 ㎖ 또는 200 ㎖ - 2ea 메스실린더 : 100 ㎖ 또는 200 ㎖ - 2ea 시약스푼 : 5ea 시약스푼 : 5ea 뷰렛에이드, 뷰렛 (2ea) 뷰렛에이드, 뷰렛 (2ea) 현미경 Monitoring, 쌍안 또는 일안의 mechanical 현미경 Monitoring, 쌍안 또는 일안의 mechanical stage 와 40~200 배율 조절이 가능한 현미경 stage 와 40~200 배율 조절이 가능한 현미경 Homogenizer Homogenizer 4~8 개의 칼날과 최소 200 ㎖ 이상의 전용 컵 4~8 개의 칼날과 최소 200 ㎖ 이상의 전용 컵 (2 개 이상 권장 ) (2 개 이상 권장 ) Howard Mold Chamber & cover glass Howard Mold Chamber & cover glass 비커 : 500 ㎖ – 3ea 비커 : 500 ㎖ – 3ea 70% 알코올

3 HOWARD MOLD Counting Chamber 1/10 ㎜ Hausser Scientific HUKO FS - 5% 안정액 : 고속 교반기에서 85 ℃ 물 475 ㎖을 넣고 25g 의 팩틴을 조금씩 넣으며 용해시켜 만든 다.( 미리 만들어 놓아야 준비시간을 단축시킬 수 있 다.) 고추가루 시료 5g 10,000rpm 에서 5 초간 혼합 + 1%NaOH 70 ㎖로 혼합기 내벽의 부착물을 씻어 내리고 10,000rpm 에서 3 분간 혼합한다. Silicagel 또는 2-octanol3~4 방울을 첨가해 거품을 제거한다. 5% 안정액 25ml 적당량의 시료를 하워드 곰팡 이계수 슬라이드에 점적 하여 관찰한다.. 10,000rpm Sampling 1% NaOH 30 ㎖ 1% NaOH 70 ㎖ - 1% NaOH : ready to use - Silica gel 소포제 또는 2-octanol : ready to use 시 약

4 HOWARD MOLD Counting Chamber 1/10 ㎜ Hausser Scientific HUKO FS X10 Covering

5 Principle of Howard Mold Counting Method  HMC 는 1 단위부피 (0.15 ㎣ ) 당 들어있는 곰팡이 균사체의 양성 / 음성을 판정한다.  HMC 는 일정 개수 (50) 의 필드 ( 또는 단위부피 ) 를 검경하여 전체 시료의 품 질을 평균값에 따라 평가하는 원리로 고안되었다.

6 X10 시야의 1 부피 = 넓이 X 높이 = 1.5 ㎟ X 0.1 ㎜ = 0.15 ㎣ 1.382 ㎜ 0.1 ㎜ ¼πd 2 0.7854 X d 2 원의 넓이 = πr 2 = ¼πd 2 = 0.7854 X d 2 계수측정 시 시야의 넓이 = 직경 2 X 0.7854 = 1.3822 ㎜ X 0.7854 = 1.5 ㎟ 현미경시야의 넓이 = 1.5 ㎟ HMC 에서 단위부피란 ?

7 Eye - Piece Micrometer( 보조유리원판 ) E.P.M  E.P.M 은 AOAC 와 식품공전에 명시되어있는 판정규정 * 에 따라 균사체의 길이를 측정하는데 보다 용이하도록 제작되어 있다. * 한 필드에서 균사체의 길이가 1.382 ㎜의 1/6 을 넘으면 그 필드는 양성으로 판정  E.P.M 은 가로 세로 각 6 칸으로 분할된 격자 가 그려진 유리원판으로 현미경의 접안렌즈에 장착하여 사용하는 보조기구이다. ※ E.P.M 은 길이를 재는 자 (ruler) 외에 어떤 의미도 없다.

8 HOWAR D MOLD Counting Chamber 1/10 ㎜ Hausser Scientific HUKO FS X10 1.382mm 검경 전 현미경 셋팅 방법

9 HOWARD MOLD Counting Chamber 1/10 ㎜ Hausser Scientific HUKO FS

10 X10 검경 패턴

11 동해물과 백두산이 마르고 닳도록 하느님이 보우하사 우 리나라 만세 무궁화 삼천리 화려 강산 대한 사람 대한으로 길 이 보전하세 남산 위에 저 소나무 철갑을 두른 듯 바람 서리 불변함은 우리 기상일세 무궁화 삼천리 화려강산 대한 사람 대한으로 길 이 보전하세 2 페이지 1 페이지 하나의 필드에서 다른 하나의 필드로 넘기는 방법

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14 --+-- +---+ --+-- +---+ ---+- 판정 기록표 Set 1-1= 7

15 +-+-- ++--+ --+-- +--++ ---+- Set 1-2 판정 기록표 = 10

16 1set 에서 양성필드의 합 1set 에서 양성필드의 합 1set 전체 필드의 합 (50) 1set 전체 필드의 합 (50) 100 = % 판정결과의 계산 17 50 100 =34%

17 곰팡이 균사의 실제 현미경 사진

18 X100

19 X200

20 X100

21 X200

22 X100

23 X200

24 X100

25 X200

26 X100

27 X200

28 X100

29 X200

30 면역형광 검사법을 이용한 곰팡이 관찰 Fusarium sp. Alternaria alternata Mucur circinelloides Penicillum frequentans Aspergillus niger

31 이물 사이에서 면역형광 검사법을 통해 본 곰팡이 균사 조각

32 History of MHC Troy, V.S. 1952. Mold Counting of Tomato Products Troy, V.S. 1952. Mold Counting of Tomato Products Fábr, V.K. etc. 1959. Factors Involved in the interpretation of Mold Counts of Tomato Products. Food Technology. 13:318-322 Fábr, V.K. etc. 1959. Factors Involved in the interpretation of Mold Counts of Tomato Products. Food Technology. 13:318-322 Parran, H.M. etc. 1972. Method for Preparing Garlic Powder(Ground Dehydrated Garlic Bulbs) for Examination by the Howard Mold Count Method. J. of AOAC. 55(1):78-79 Parran, H.M. etc. 1972. Method for Preparing Garlic Powder(Ground Dehydrated Garlic Bulbs) for Examination by the Howard Mold Count Method. J. of AOAC. 55(1):78-79 Mossel, D.A. etc. 1975. Further Studies on the Suitability of Various Media containing Antibacterial Antibiotics for the Enumeration of Mould in Food and Food Environments. J. of Appl. Bacteriol. 39(1):15-22 Mossel, D.A. etc. 1975. Further Studies on the Suitability of Various Media containing Antibacterial Antibiotics for the Enumeration of Mould in Food and Food Environments. J. of Appl. Bacteriol. 39(1):15-22 Cichowicz, S.M. 1978. Use of High-Speed Over-Head Mixer in Howard Mold Count Preparations. J. of AOAC. 61(4):992-994 Cichowicz, S.M. 1978. Use of High-Speed Over-Head Mixer in Howard Mold Count Preparations. J. of AOAC. 61(4):992-994 Blaser, P. 1978. Comparison of methods for the quantitative detection of Moulds in Food. Ⅰ. Communication : Selective Staining Procedures for the Directmicrosocopic Mould Count. Zentralbl. Bakteriol. 166(1):45- 62 Blaser, P. 1978. Comparison of methods for the quantitative detection of Moulds in Food. Ⅰ. Communication : Selective Staining Procedures for the Directmicrosocopic Mould Count. Zentralbl. Bakteriol. 166(1):45- 62 Robertson, A. etc. 1988. Immunofluorescence Detection of Mould-An Aid to the Howard Mould Counting Technique. Food Microbiology, 5:33- 42 Robertson, A. etc. 1988. Immunofluorescence Detection of Mould-An Aid to the Howard Mould Counting Technique. Food Microbiology, 5:33- 42

33 Modified Method Jarvis, B. 1977. A Chemical Method for the Estimation of Mould in Tomato Products. J. of Food Tech. 12:581-591 Jarvis, B. 1977. A Chemical Method for the Estimation of Mould in Tomato Products. J. of Food Tech. 12:581-591 Bishop, R.H. etc. 1982. Estimation of Fungal Contamination in Tomato Products by a Chemical Assay for Chitin. J. of Food Sci. 47:437-439 Bishop, R.H. etc. 1982. Estimation of Fungal Contamination in Tomato Products by a Chemical Assay for Chitin. J. of Food Sci. 47:437-439 Cousin, M.A. etc. 1984. Chemical Detection of Mold in Processed Foods. J. of Food Sci. 49:439-445 Cousin, M.A. etc. 1984. Chemical Detection of Mold in Processed Foods. J. of Food Sci. 49:439-445 Lin, H.H. etc. 1985. Detection of Mold in Processed Foods by High Performance Liquid Chromatography. J. of Food Protec. 48(8):671-678 Lin, H.H. etc. 1985. Detection of Mold in Processed Foods by High Performance Liquid Chromatography. J. of Food Protec. 48(8):671-678 Lin, H.H. etc. 1986. Enzyme Linked Immunosorbent Assay for Detection of Mold Tomato Puree. J. of Food Sci. 51(1):180-183 Lin, H.H. etc. 1986. Enzyme Linked Immunosorbent Assay for Detection of Mold Tomato Puree. J. of Food Sci. 51(1):180-183 Kamphuis, H.J. etc. 1989. A Rapid and Reliable Method for the Detection of Molds in Foods: Using the Latex Aglutination Assay. J. of Food Protec. 52(4):244-247 Kamphuis, H.J. etc. 1989. A Rapid and Reliable Method for the Detection of Molds in Foods: Using the Latex Aglutination Assay. J. of Food Protec. 52(4):244-247 Li, S.etc. 2000. Immunochemical Detection of Molds. J. of Food Protec. 63(2):281-291 Li, S.etc. 2000. Immunochemical Detection of Molds. J. of Food Protec. 63(2):281-291

34 제작 : FSA KOREA Co. 제작 : FSA KOREA Co. 감수 : 연세대학교 생명공학산업화연구소장 - Dr. 박지용 감수 : 연세대학교 생명공학산업화연구소장 - Dr. 박지용 중앙대학교 식품공학과 - Dr. 하상도 중앙대학교 식품공학과 - Dr. 하상도 한국보건산업진흥원 - 김용수 책임연구원 한국보건산업진흥원 - 김용수 책임연구원 Hausser Scientific LTD. - Mr. Chip Behr Hausser Scientific LTD. - Mr. Chip Behr 감사합니다.