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폐암 진단을 위한 Anti-p53 검사의 유용성 평가

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Presentation on theme: "폐암 진단을 위한 Anti-p53 검사의 유용성 평가"— Presentation transcript:

1 폐암 진단을 위한 Anti-p53 검사의 유용성 평가
연세의료원 면역혈청파트 김명숙

2 배 경 p53 유전자는 암세포를 억제하는 기능 p53 유전자의 변이로 인한 기능이 상실 → 암 발생 (전체 암의 약 50%) p53 유전자의 변이 → p53 단백질 구조 변형 → 반감기가 20분에서 수시간으로 연장 → 체내에 p53 단백질이 축적 축적된 p53 단백질 → 체액성 면역반응 → anti-p53 항체 생성

3 P53 단백질 구조 Mutation hot spot N-terminal Core domain C-terminal 1 100
323 393 N-terminal Core domain C-terminal Transcriptional control region Sequence-specific DNA-binding Tetramer region

4 암 장기별 혈청 anti-p53 항체 양성률

5 폐암 종양표지자검사로 Anti-p53 적용한 배경
폐암 환자의 5년 생존률: <20% 병리학적 병기 I (수술 시 조직에 전이소견이 없는 경우): 5년 생존률60-90%로 상대적으로 높음 폐암의 조기 진단 및 재발 감시가 중요 폐암진단을 위한 종양 표지자: CEA, CYFRA 21-1, SCC Ag, NSE 등 민감도가 25-66% 정도로 낮아 새로운 종양 표지자가 필요 폐암 진단을 위한 anti-p53 검사의 유용성을 평가해보고자 함.

6 축적된 p53 이상 단백질에 대한 면역염색 (tissue)
ELISA Anti-p53 항체검사 염기서열분석법 p53 유전자의 결손 및 변이를 검출 면역조직화학염색법 축적된 p53 이상 단백질에 대한 면역염색 (tissue)

7 Anti-p53 검사 소개 사용 kit: MESACUP Anti-p53 TEST (MBL)
검사원리: ELISA, 단위: U/mL 소요시간: 약 3시간 시약구성 : 96-well plate(41 tests), 5 point calibrators, +/- control 특징 : 비특이적 항원항체 결합의 영향을 줄이기 위하여 p53 항원 coated well과 control protein coated well에 각각 검체를 검사한 후 p53 well의 OD값에서 control protein well의 OD 값을 뺀 값으로 농도계산

8 Sample incubation Conjugate incubation Substrate incubation
P53 protein Sample incubation Serum anti-p53-IgG abs Add 100µl of diluted sample(1:101)to each well of microwell plate(20-30℃)60min. With 250rpm shaking Conjugate incubation Wash (6) anti human IgG-POD abs Add 100 µl of conjugate solution each well(20-30 ℃)60min. With 250rpm shaking Substrate incubation Wash (6) The color development Add 100µl of substrate to each well (20-30℃) 30min Add 100µl of stop solution to each well Read absorbance (450nm, 620nm)

9 평가 대상 및 기간 폐암이 의심되어 종양표지자 검사가 의뢰된 299명의 환자의 검체를 모은 후 아래 환자를 선별 총 120명
폐암 환자 82명 선암 47, 편평세포암 18, 소세포암 14, 기타 3 양성 폐질환 19명 폐결핵 9, 폐렴 7, 고립성 폐결절 3 폐질환이 없는 기타 환자 19명 총 120명 평가기간: 2010년 6월-8월 검사항목: anti-p53, CEA, CYFRA 21-1

10 평가 결과 – ROC curve 분석 곡선하 면적(AUC) 95% 특이도에서의 민감도 95% 특이도에서의 cutoff 농도
CYFRA 21-1 : 0.83 , CEA : 0.81 , anti-p53 : 0.70 95% 특이도에서의 민감도 CYFRA 21-1 : 62.2% , CEA : 53.7% , anti-p53 : 40.2% 95% 특이도에서의 cutoff 농도 CYFRA 21-1 : 3.1 ng/mL , CEA : 5.5 ng/mL, anti-p53 : 2.2 U/mL

11 평가 결과 –환자특성 및 표지자농도 Values 폐암 (n=82)a 양성폐질환 (n=19)b 기타질환 (n=19)
p-values 나이 (years)c 63.5 ( ) 68.0 ( ) 58.0 ( ) 0.251 성별 (male, %) 61, 74.4% 11, 57.9% 0.191 CYFRA 21-1 (ng/mL)c 3.4 ( ) 1.6 ( ) 1.9 ( ) <0.001d CEA (ng/mL)c 6.1 ( ) 1.8 ( ) 1.6 ( ) <0.001e Anti-p53 (U/mL)c 1.3 ( ) 0.5 ( ) 0.7 ( ) 0.002f 각 군의 비교: Kruskal-Wallis test (Bonferroni correction 적용) a, 선암 47, 편평세포암 18, 소세포암 14, 기타 3 b, 폐결핵 9, 폐렴 7, 고립성 폐결절 3 c, 중앙값 (25-75 percentile) d, 폐암 vs 양성폐질환 또는 기타질환 p<0.001, 양성폐질환 vs 기타질환 p=0.962 e, 폐암 vs 양성폐질환 또는 기타질환 p<0.001, 양성폐질환 vs 기타질환 p=1.000 f, 폐암 vs 양성폐질환 p=0.003, 폐암 vs 기타질환 p=0.061, 양성폐질환 vs 기타질환 p=1.000

12 평가 결과 –질환군별 양성률 양성인 표지자 폐암 폐암이 아닌 환자 양성폐질환 기타질환 Subtotal CYFRA 21-1
51 (62.2%) 1 (5.3%) 1 (5.3%) 2 (5.3%) CEA 44 (53.7%) 0 (0.0%) 2 (10.5%) Anti-p53 33 (40.2%) 없음 12 (14.6%) 17 (89.5%) 16 (84.2%) 33 (86.8%) CYFRA 21-1만 15 (18.3%) 1 (2.6%) CEA만 6 (7.3%) Anti-p53만 8 (9.8%) CYFRA 21-1 및 CEA 16 (19.5%) CYFRA 21-1 및 anti-p53 3 (3.7%) CEA 및 anti-p53 5 (6.1%) CYFRA 21-1, CEA 및 anti-p53 17 (20.7%) Total 82 (100.0%) 19 (100.0%) 38 (100.0%)

13 평가 결과 –폐암의 조직학적 분류별 양성률 양성인 표지자 폐암의 조직학적 분류 선암 편평세포암 소세포암 기타 Total
CYFRA 21-1 29 (61.7%) 13 (72.2%) 7 (50.0%) 2 (66.7%) 51 (62.2%) CEA 35 (74.5%) 4 (22.2%) 4 (28.6%) 1 (33.3%) 44 (53.7%) Anti-p53 20 (42.6%) 7 (38.9%) 5 (35.7%) 33 (40.2%) 없음 4 (8.5%) 2 (11.1%) 12 (14.6%) CYFRA 21-1만 3 (21.4%) 15 (18.3%) CEA만 6 (12.8%) 0 (0.0%) 6 (7.3%) Anti-p53만 3 (6.4%) 3 (16.7%) 2 (14.3%) 8 (9.8%) CYFRA 21-1 및 CEA 13 (27.7%) 1 (7.1%) 16 (19.5%) CYFRA 21-1 및 anti-p53 1 (2.1%) 3 (3.7%) CEA 및 anti-p53 5 (10.6%) 5 (6.1%) CYFRA 21-1, CEA 및 anti-p53 11 (23.4%) 17 (20.7%) 47 (100.0%) 18 (100.0%) 14 (100.0%) 3 (100.0%) 82 (100.0%)

14 요 약 Anti-p53의 폐암에서의 양성률은 약 40%
요 약 Anti-p53의 폐암에서의 양성률은 약 40% Anti-p53의 진단 성능은 CYFRA 21-1 및 CEA 보다 떨어지나 세가지 종양표지자를 모두 검사하는 경우 민감도를 85.4%, 특이도를 97.4%로 높일 수 있음 Anti-p53 검사를 통하여 CEA 및 CYFRA 21-1로 진단하지 못한 폐암을 약 10% 더 진단할 수 있었음 Anti-p53 검사의 장점 혈청을 검체로 사용하므로 유전자 검사에 비하여 편리하다. 폐암 뿐 아니라 다양한 암에 대한 종양표지자로 사용할 수 있다. Anti-p53 검사의 단점 CYFRA 21-1 및 CEA에 비하여 진단성능 및 양성률이 낮다. ELISA 검사방법만 개발되어 있어 검사소요 시간이 길다.

15 감사합니다.


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