혈액은행 실무의 이해 (ABO 불일치 및 항체 선별검사)

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1 혈액은행 실무의 이해 (ABO 불일치 및 항체 선별검사)
아산재단 서울 아산병원 진단검사의학과 박 태 화

2 목 차 ABO식 혈액형 및 검사 방법 ABO discrepancy 항체 선별 검사 결 론

3 ABO식 혈액형 및 검사방법

4 ABO System Initially described by Karl Landsteiner in 1901.
ABO antigens are found on red cells, platelets, and many circulating proteins. The ABO system contains four major ABO phenotypes:A,B,O and AB. [Karl Landsteiner]

5 ISBT 분류에 의한 Blood Group System
ISBT No. System Ag No Ag example Structure Possible function 001 ABO 4 A, B, O, AB Carbohydrate Glycocalyx 002 MNS 37 M, N, S, s, U Sialoglycoproteins 003 P 1 P1 Unknown, E.coli receptor 004 Rh 49 D, C, c, E, e, f, G Polytopic proteins NH4+ transporter, O2/CO2 gas channel 005 Lutheran 18 Lua, Lub IgSF glycoprotein Adhesion- binds laminin 006 Kell 21 K, k, Kpa, Kpb, Jsa, Jsb Enzyme Endopeptidase – process endothelin 3 007 Lewis 3 Lea, Leb Unknown 008 Duffy 6 Fya, Fyb G protein-coupled Superfamily Chemokine (IL-8) receptor, P. vivax receptor 009 Kidd Jka, Jkb Polytopic glycoprotein Urea transporter 010 Diego Dia, Dib Anion exchanger, O2/CO2 gas channel, anchor to cytoskeleton 011 Yt 2 Yta, Ytb Acetylcholinesterase 012 Xg Xga Receptors 013 Scianna Sc1, Sc2 Adhesion/receptor 014 Dombrock 5 Doa, Dob ADP-ribosyltransferase 015 Coa, Cob Water channel 016 LW LWa, LWb Adhesion- binds integrins 017 Ch/Rd 9 Ch1, Ch2, Rg1, Rg2 Complement protein C4 018 Hh H 019 Kx Polytopic protein Neurotransmitter transporter 020 Gerbich 7 Ge2, Ge3, Ge4, Wb, Lsa Anchor to cytoskeleton 021 Cromer 10 Cra, Tca, Tcb, Dra Complement control protein DAF 022 Knops Kna, Knb, McCa, SIa CR1 023 Indian Ina, Inb Glycoprotein Adhesion- binds hyaluronan 024 Ok 025 Raph MER2 Tetraspanin Complexes with integrins in the membrane 026 JMH Semaphorin Adhesion / receptor 027 I 028 Globoside 029 Gill GIL Water / glycerol channel 29 Blood Group System 34 Gene loci Antigens (2005)

6 ABO Blood Groups Plasma

7 Biochemical Bases of Blood Groups
The H antigen is precursor to the ABO blood group antigens. The H locus is located on chromosome 19. The A and B antigens are defined by three-sugar-terminal epitopes on glycolipids and glycoproteins that require the synthesis of H antigen for their expression.

8 Biochemical Bases of Blood Groups
Humans with A-type blood also contain an additional enzyme which adds N-Acetylgalactosamine to the H antigen.  Humans with B-type blood contain another enzyme which adds Galactose to the H antigen.  Group O individuals express only H antigen.

9 Secret of ABO Blood Groups

10 Antibodies of ABO Antigens
자연 항체 면역 항체 면역 글로불린 종류 IgM(5%) IgG(80%) 항체 구분 완전 항체 불완전 항체 발생기전 자연 발생 임신,수혈 등 온도 반응 한냉 항체 온난 항체

11 Mechanism of Red Cell Agglutination

12 Results in Tube method

13 ABO 검사 방법 1. 검체 Type 2. 주의사항 3. 검사방법 Plain Tube로 검체 채취
환자의 생명에 치명적인 결과를 초래할 수 있으므로 환자 및 검체의 확인이 매우 중요하다. 3. 검사방법 Cell typing Serum typing Rh typing 바코드 부착 혈액은행용 스티커

14 + + ABO Typing &Result 1. Cell typing 2. Serum typing ABO A 4+ - B O
Cell reaction Serum reaction Anti-A Anti-B A cell B cell A 4+ - B O AB

15 ABO discrepancy

16 극히 적은수의 미세한 응집, 배경은 붉은색이며 혼탁
ABO discrepancy? Cell typing 과 Serum typing의 결과가 각각 일치하지 않는 경우 Cell typing과 Serum typing의 결과 판독 결과중 4+보다 작은 응집을 보이는 경우 4+ 하나의 큰 응집, 배경은 투명 3+ 2~3개의 큰 응집, 배경은 투명 2+ 아주 작은 응집, 배경은 붉은색이며 혼탁 1+ 극히 적은수의 미세한 응집, 배경은 붉은색이며 혼탁 - 혈구의 응집이 보이지 않는다 이렇게 앞전 실험에서 Cell typing, Serum typing의 혈액형 결과가 일치하게 되면 해당 혈액형으로 판정하여 결과전송하게 됩니다. 그러나

17 Problem sheet NT: Not Test

18 Technical reasons 시약을 잘못 넣은 경우 검사자가 잘못 읽은 경우 혈구, 혈청 비율이 맞지 않은 경우
가장 많이 발생하며, 재 검사 후discrepancy 나타나면 환자의 혈구나 혈청 측 원인 때문에 일어나는 Real discrepancy 이다.

19 ABO Discrepancy Cell grouping Reverse serum typing (false positive)
Acquired antigens (B, A) Poly-agglutination B (A) phenomenon Post-transfusion of different BG. DAT positive sample (false negative) Antigen expression decrease (e.g.:AML) A subgroups (A3, Ax) Due to technical or reagent error Reverse serum typing (false positive) Cold agglutinin / antibodies A1 antibodies, antibodies to used A1&B cells other than anti-A&B. Auto-antibody Fibrin (false negative) Babies Old age Hypo-agammaglobinaemia Due to technical or reagent error

20 A sub-groups

21 Confirming Test of A or B subgroup
Anti-A, Anti -B , Anti-A1(Dolichos biflorus), Anti-H(Ulex europaeus) 와 피검 혈구와의 반응 Adsorption & Elution Test Saliva Test Antibady Screening Test A & B 유전자 전이효소 검출 Genotyping Family Study 등

22 Subgroups of A & B Antigens
Subgroups of A antigens A2: A gene product 250,000/RBC vs. 1,000,000/RBC Anti-A1 (serum or Dolichos Biflorus Seed) A1: Positive, A2: Negative A2 B: 22-35%에서 검출 Subgroups weaker than A2: A3, Ax, Ael, Am Subgroups of B antigens Very rare, B3, Bx, Bm (Dolichos Biflorus )

23 A & B sub-groups 감별 Anti-H (Ulex europaeus seed)
A or B Subtypes: Positive A1: Negative Strength of agglutination : O > A2 >B > A1 (Ulex europaeus )

24 ABO 혈액형 아형들의 반응 양상 A1 Aint A2 A3 Abantu Am Aend Ax Ael Ay B Bint B3 Bm
혈구형 검사 혈청형 검사 타액 분비 물질 전이효소 Anti-A Anti-B Anti-A,B Anti-H Anti-A1 A1 Cells A2 Cells B Cells A1 4+ A, H A Aint 3+ 2+ A2 0/+ A (weak) A3 2+ mf 0/ Abantu 1+ H Am Aend  mf 2+/0 Ax 1+/2+ Ael Ay 0/1+ B B, H Bint B3 1+ mf B (weak) Bm Bx 0/2+ 0/± Bel mf = mixed-field agglutination

25 A & B sub-groups 감별 Mixed-field agglutination
1. Following out-of-group red cell transfusion(group O->group A) 2. Leukemia 3. ABO subgroups(A3 or B3) (Mixed-field agglutination)

26 항체 선별 검사

27 Type of Antibody 예기항체(Expected Antibody) - ABO 항체(Anti-A, Anti-B)
비예기항체(Unexpected Antibody) - 한국인의 빈도는 0.2~1.2% - 생성원인(Pregnancy, Transfusion, Event unknown) 자가항체(Auto Antibody)

28 Antibody Screening, WHY?
Indications: For detection of irregular antibodies (non-ABO) Pre-transfusion tests Antenatal screening Donor units HDN(hemolytic disease of the newborn)

29 Importance in transfusion
Antibody Screening Importance in transfusion This test detects if a recipient has a clinically significant antibody, so a donor unit that lacks the corresponding antigen would be selected for X-Matching and transfusion.

30 Antibody Screening

31 비예기 항체 선별 검사 및 동정 검사 선별 및 동정혈구를 Micro-Tube에 50㎕씩 분주
25㎕씩 분주 3. 37℃에서 15분 Incubation 4.Centrifugation 10분 (910rpm) 5. 결과판독

32 비예기 항체 선별 검사 및 동정 검사 Interpretation of reactivity with gel column agglutination assay  

33 Antibody Identification

34 주요 혈액형 항체의 빈도 Rh Kell Duffy Kidd Lewis Ab D C E c e Rh17 K k Fya Fyb
System Rh Kell Duffy Kidd Lewis Ab D C E c e Rh17 K k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb 한국인 적합혈 (%) 0.3 14 49 40 9 0.01 이하 99.5 0.5 4 56 33 23 81 46 MNS P Diego Lutheran Jr Xg M N S s P1 Dia Dib Lua Lub Jra Xga 적합혈 (%) 24 26 91 5 60 90 0.2 0.03 29

35 나의 작은 실수 하나도 환자에게는 치명적일 수 있다. 조심 또 조심
결론 나의 작은 실수 하나도 환자에게는 치명적일 수 있다. 조심 또 조심