Needle-free vaccination through mucosal routes

Presentation on theme: "Needle-free vaccination through mucosal routes"— Presentation transcript:

1 Needle-free vaccination through mucosal routes
Mol.bio.lab Boram Song Superviser : Dae youn Hwang

2 Vaccination Vaccination is the administration of antigenic material (a vaccine) to stimulate an individual's immune system to develop adaptive immunity to a pathogen. Vaccines can prevent or ameliorate morbidity from infection. When a sufficiently large percentage of a population has been vaccinated, this results in herd immunity. The World Health Organization (WHO) reports that licensed vaccines are currently available to prevent or contribute to the prevention and control of twenty-five preventable infections. 백신이란, 병원체에 대한 적응면역을 발달시키기 위해 항원물질을 투여하여 면역체계를 자극시키는 것으로 효과적으로 질병을 예방할 수 있는 방법입니다. 현재 여러 종류의 백신이 허가되어 있으며 25가지 질병을 예방할 수 있습니다. 이러한 백신은 주로 주사기로 근육주사하는 방식으로 전달하며, 이로인해 고통, 두려움, 주사기 재사용에 의한 감염의 위험이 있으며, 바늘을 처리하는 과정에서 부상자가 발생할 수 있으며, 전문적인 기술이 필요하다는 단점이 있습니다. 이러한 단점을 보완하기 위해 needle free 백신이 많이 연구되고 있으며, device를 이용하는 방법, 피부를 통해 전달하는방법, 점막을 통해 전달하는 방법이 있습니다. 그 중 저는 점막 면역방법에 대해 소개하겠습니다. 1) Needle-free injection devices 2) Transcutaneous immunization 3) Mucosal immunization Pain, Fear, Infection, Sharp waste, Needle-stick injuries, Burden on the healthcare professionals

3 Mucosa Majority of the pathogens invade via the mucosal surfaces such as those of the respiratory, reproductive and the gastrointestinal tracts. This is because these surfaces come in direct contact with the air, water, food, and the environment, and thus form an opportunistic portal for bacterial and viral infections. 점막이란 외부와 직접 맞닿아 있는 신체기관들의 내벽을 덮고있는 부드러운 조직으로, 보이는 것과 같이 입안이나 비강, 장, 호흡기에 위치하여 음식물을 섭취하거나 호흡할 때 병원체가 들어와 1차적으로 감염되는 조직이다. 이렇게 항상 병원체에 노출되어 있는만큼, 노출되는 항원에 대해 여러 방어체계를 가지고 있으며, 2차면역기관으로 분류된다. 2차면역기관에 대해 잠시 설명하자면, 1차면역기관은 다들 아시는 골수, 흉선으로 여러 면역세포들이 생성, 성숙되는 곳이다. 여기서 만들어진 면역세포들은 2차면역기관으로 이동하여 작용하며, 림프절, 비장, 점막 등이 있다. 점막에서 이루어지는 방어체계는 여러가지가 있다. 일단 표면에 끈적이는 점막이 존재하여 병원체의 침입을 막고, 침입 후에도 면역세포들에 의해 포식작용, 옵소니제이션 등 여러 면역반응이 이루어진다. These organs maintain mature naive lymphocytes and initiate an adaptive immune response through antigen presentation.

4 Mucosa-associated lymphoid tissue (MALT)
Mucosal tissues comprise of a highly compartmentalized and specialized immune system in the form of MALT. MALT helps to induce pathogen-specific immune responses, and in the secretion of immunoglobulin A (IgA) at mucosal surfaces to protect against infection. Gut-associated lymphoid tissue (GALT), Nasal-associated lymphoid tissue (NALT), bronchus-associated lymphoid tissue (BALT), skin-associated lymphoid tissue (SALT) Intramuscular vaccination - Infection - Pain - Inducing only systemic immune system Needle-free mucosal vaccination - Safe - Easy - Inducing mucosal & systemic 이렇게 여러 면역반응이 일어나는 점막을 점막관련림프기관 즉 MALT라고 부른다. 종류에는 장과 관련된 GALT, 비강관련 NALT, 기관지관련인 BALT, 피부관련인 SALT가 있다. MALT의 가장 중요한 특징은 IgA를 분비하여 점막 표면에서부터 면역반응을 일으킬 수 있다는 것이다. 기존의 방식인 근육주사 방법은 면역세포들이 혈액에서 돌아다니며 혈중에서 면역반응을 일으키는 전신성 면역만을 유도하지만, 점막백신은 전신성 면역 뿐 아니라 점막면역 또한 유도할 수 있어 효율적인 면역유도 방법이다. 주사 백신은 일반적으로 점막 면역을 유도하지 못하므로 점막 표면의 감염에 덜 효과적. 주사 백신을 사용하는 이유 : 항원을 체내로 전달하고 혈액에서 쉽게 측정할 수 있는 특정 항체와 림프구 세포를 생성하기 때문에.

5 Immune system of MALT Function of s-IgA - Immune exclusion
- Intracellular neutralization - Antigen excretion Microfold cell - Uptake antigen - Do not have mucus - Including immunocytes MALT의 면역체계에 대해 설명하겠습니다. MALT는 기본적으로 항원이 들어오는 inductive site와 면역반응을 수행하는 effector site가 존재합니다. 먼저, 항원은 microfold cell인 M cell을 통해 들어옵니다. 이 M cell은 점액 면역세포들을 많이 포함하는 pocket을 가지고 있으며, 항원을 uptake 하여 바로 밑의 dendritic cell로 전달하는 역할을 합니다. 이 때, M cell의 윗부분에는 점액이 없어 더욱 효과적으로 항원을 uptak할 수 있습니다. 이렇게 활성화된 dentritic cell에 의해 T cell을 활성화 시키고, B cell을 활성화시켜 혈액을 통해 Effector site로 이동하여 IgA를 점막표면을 통해 방출합니다. IgA는 일반적으로 단량체, 다량체 형태로 존재하지만, 점막 표면으로 방출되는 IgA는 J chain으로 연결된 이량체 형태이며, 방출 시 secretory component가 부착되어 secretory IgA가 된다. 이 secretory component는 위장관 환경에서 단백질 분해효소와 분비물에서 증식하는 미생물로부터 보호하는 역할을 한다. 이 sIgA가 방출되면 표면의 병원체나 독소에 부착하여 중화시키고, 점막으로의 침입을 막는 역할을 합니다.

6 Immune system of MALT LPS Salmonella Cholera toxin
DC2 Naïve T cell DC1 MHC class Ⅱ IL-2 TNF-a IFN-r IL-4 IL-5 IL-6 IL-10 IL-13 T helper 1 cell T helper 2 cell LPS Salmonella Cholera toxin Treg TGF-b IL-12 MALT에서는 들어오는 항원의 종류에 따라 활성화되는 dentritic cell이 달라집니다. 예를 들어, LPS나 salmonella 와 같은 균이 들어오면 DC1 type cell이 활성화 되고, MHC class 2 에 항원을 제시합니다. 이 것이 IL-12를 분비하여 t cell을 활성화시켜 Th1 cell로 유도하며, IL-2, TNF-a, IFN-r 와 같은 cytokine을 분비하게 되어 cytotoxic T cell에 의한 세포성 면역이 활성화됩니다. 반면에, Cholera 독소가 들어오게되면, DC2 type cell이 활성화되고 Th2 cell로 유도하여 IL-4, IL-5,6,10,13 과 같은 cytokine을 분비하여 항체를 생산하는 체액성 면역이 활성화 됩니다. 이 때, 분비되는 cytokine 중 IL-2,5,6,10은 IgA의 생성을 촉진하는 IgA-enhancing cytokine의 역할을 하며, IFN-r, IL-4는 sIgA 생성 시 부착하는 secretory componen를 생산하는 역할을 합니다. IgA-enhancing cytokine Producting secretory component cytokine

7 Homing of lymphocytes Lymphocyte "homing" process disperses the immunologic repertoire, directs lymphocyte subsets to the specialized microenvironments that control their differentiation and regulate their survival, and targets immune effector cells to sites of antigenic or microbial invasion. Lymphocyte HEV Homing receptor Addressin 이렇게 활성화된 림프구들은 각각 들어가는 림프조직이 다르며 이렇게 특정한 2차림프조직으로 들어가는 현상을 homing system 이라고 한다. 어느 림프조직으로 들어가는가 하는 패턴은 림프구 표면에 있는 Homing receptor와 특정한 림프조직의 혈관벽의 HEV에 발현되고 있는 Addressin 의 결합에 의하여 결정된다. 비활성화된 림프구는 림프관을 따라 혈관으로 이동하며, 특정 이차림프기관의 혈관벽인 HEV 에서 분비하는 chemokine에 의해 Homing receptor가 발현되고, 이것이 HEV와 결합하게되어 조직으로 들어가게 된다. 이차림프조직으로 들어간 림프구는 항원을 만나 effector cell로 전환되고, 다시 혈관으로 들어가 재순환하게된다. 이 활성화된 림프구에는 이미 Homing receptor가 발현되어있어 특정 림프조직으로 들어가서 작용할 수 있게된다. 장점막 관련 림프구에서는 CCL25 cytokine에 의해 a4b7 integrin이 발현되어 장점막으로 특이적으로 들어갈 수 있게된다. 장점막 뿐 아니라 호흡기, 피부 등에도 각각의 homing receptor와 addressin이 존재하여 homing system을 가진다. HEV – 림프조직의 혈관벽 에 발현되고 있는 세포접합분자 (addressin) 림프구 표면에 있는 세포접합분자

8 Mucosal vaccine delivery – routes and barriers
이러한 점막백신의 전달경로는 경구, 비강, 입안점막이 있습니다. 경구백신은 가장 간편하고, 거부감이 없어 점막백신 중 가장 활발히 연구되고 있는 경로로 장점막에서 면역반응을 유도할 수 있습니다. 하지만 장점막으로 도달하기까지 많은 장벽이 존재합니다. 우선 위에서 산성인 enzyme을 분비하여 항원이 분해될 위험이 있으며, 장의 점막에 끈적끈적한 점액이 존재해서 장 점막에 쉽게 도달하지 못하도록 하며, 장의 상피세포는 tight junction으로 이루어져 있어 쉽게 통과하지 못하게합니다. 이를 극복하기 위해서는 M cell을 targeting 하거나, 장까지 안전하게 도달하게하기 위해 capsulation 시키는 방법이 있습니다. 비강을 통한 백신의 전달방법에 대해 설명하겠습니다. 코를 보시면 코의 앞쪽부분에는 털이 존재하고,각질화된 표피로 이루어져 있어 백신 전달에는 적합하지 않은 곳 입니다. 그 뒤의 artrium 의 뒷부분은 미세융모로 덮인 원주상피세포로 이루어져있어 백신전달에 적합한 곳입니다. Artrium과 이어진 호흡기관의 부분은 tight junction으로 이루어져 있어 전달에 적합하지 않습니다. 따라서 극복방안은 항원을 외부환경으로부터 보호하고, 점막을 잘 침투하게 하거나 inductive site에 targeting 하는 방법이 있습니다. 또한, 최근에 연구되기 시작한 방법으로 입안의 점막에 전달하는 방법이 있습니다. 입안을 보시면 잇몸, 혀밑, 볼 쪽 점막이 존재하며 이 중 잇몸은 각질화된 상피세포로 이루어져 있으며, 혀밑이나 볼안쪽은 각질화되지않은 상피세포로 이루어져 있습니다. 입안을 통한 전달은 비록 침에 단백질 분해효소가 존재하기는 하지만, 경구를 통한 전달방법에 비해서는 영향을 적게 받으며, 각질화되지 않은 점막부분에 백신을 직접 투여할 수 있어 최근에 많이 연구되고있는 방법입니다. M cell targeting Microbial based carrier system Encapsulating in particles mucosa adhesiveness, antigen protection, permeation and penetration enhancement, specific inductive-site targeting Targeting non-keratinized epithelium

9 Licensed mucosal vaccines approved for human use
<Dukoral®> - A mixture of inactivated Vibrio cholera and cholera toxin B subunit (CTB). - CTB allows the vaccine to provide short term protection against enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC). - CTB in the stomach's acidic environment the vaccine is mixed with a basic solution. <FluMistᵀᴹ> - live attenuated influenza virus (LAIV), and is delivered by spraying as a mist in the nasal cavity. - The virus is capable of replicating in the cooler environment of the nasal cavity. - This vaccine is not recommended for children under the age of 2 years due to increased risk of wheezing. <Oral polio vaccines (OPVs)> - live attenuated polioviruses obtained by the passage of wild-type strains in non-human cells. - OPV is administered as two drops (about 0.1 ml) into the mouth. In general, the approved mucosal vaccines are not recommended for use in infants, except the rotavirus vaccine, which can be administered at the age of 6 weeks, and the oral polio vaccine, which can be given at birth. Other vaccines are recommended for humans above the age of 2 years. 현재 5가지 질병에 대해 예방하는 점막백신이 허가되어있으며, 콜레라, 인플루엔자, 소아마비, 장염, 장티푸스가 있습니다. 먼저, 콜레라를 예방하는 백신 중 dukoral 은 비활성화시킨 비브리오 콜레라와 콜레라독소B subunit을 결합하여 만든 것으로, 콜레라독소B는 장 내 균의 독소에 대해 보호하는 능력을 가지며 pH에 민감하여 염기성의 탄산수소나트륨과 함께 섭취해야합니다. 비활성화된 균을 이용하여 감염의 위험이 적습니다. 인플루엔자를 예방하는 백신으로는 flumist가 있으며, 비강에 뿌림으로써 전달합니다. 약화시켰다 하더라도 감염의 위험이있어 2세이하의 아이에게는 사용할 수 없습니다. 그 외 소아마비, 장염, 장티푸스를 예방하는 백신은 경구로 투여하며, 살아있는 균을 사용합니다. 여기서, 장염백신이나 생후 6주부터 투여할 수 있다고 알려진 oral polio vaccine을 제외한 나머지 백신들은 2세 이상의 아이에게만 사용할 수 있으며, 이것은 생백신을 사용함으로써 감염의 위험이 있기 때문입니다.

10 Mucosal vaccine deliver – bacteria and viruses
Live, attenuated bacteria / viruses - Strong cellular and antibody responses - Vaccines could revert to a virulent form and cause disease. Inactivated vaccine - More stable and safer than live vaccines - Weaker immune system response Subunit Vaccine - including only the antigens (epitope) - lower side effects DNA vaccine - DNA is administered directly into the body. Recombinant vector vaccine - They use an attenuated virus or bacterium to introduce microbial DNA to cells of the body. - Vaccines closely mimic a natural infection. 백신의 종류에는 대표적으로 생백신과 사백신이 있습니다. 생백신은 박테리아나 바이러스를 약독화시켜 주입하여 면역반응을 유도하는 것으로 적은 양으로도 강한 반응을 유도할 수 있으나, 감염의 위험이 있습니다. 사백신은 박테리아나 바이러스를 죽이고 투여하는 형태로 생백신에 비해 안전하지만 반응을 약하게 유도한다는 단점이 있습니다. 다른방법으로는 인식되는 항원부위만 투여하는 subunit 백신이 있으며, DNA만 투여하는 DNA 백신의 형태도 있습니다. 또한 재조합백신이 있는데 이것은 무해한 바이러스나 박테리아에 DNA를 주입하여 투여하는 것으로 약화된 박테리아나 바이러스가 인체에서 벡터의 역할을 하며 DNA를 복제하여 병원체의 유전자를 발현하는 것으로 이 때 병원체의 항원이 면역반응을 유도하여 백신의 역할을 합니다.

11 Mucosal vaccine deliver – Polymeric particles
Synthetic polymers - Particles with a diameter of 1–2 μm have been shown to induce an effective immune response because the particles can be selectively taken up by the M cells and can be actively transported across the epithelium. - PLGA, PLA, PLA-PEG, Natural polymers - Chitosan, Alginate, r-PGA, Hyaluronic acid - r-PGA : stimulation of TNF-a Inorganic particles - Using silica, platinum, silver, gold 이러한 항원이 점막으로 도달하기까지 단백질 분해효소, pH, 물리적 장벽 등 많은 외부환경에 노출되게 됩니다. 이러한 외부환경의 영향을 최소화 하기 위해 capsulation 하기 위한 polymeric particl이 많이 연구되고 있습니다. 구강점막백신은 크기와 상관이 있다고 연구된 바 있으며, 1-2 마이크로미터의 직경에서 효율적인 면역반응을 나타냈다.

12 Mucosal vaccine deliver – nanoparticle (synthetic polymer)
4w 8w 9w administration collecting boosting <i.n administration> 4w 8w 12w administration collecting boosting <i.m administration> 13w Hydrophobicity PCL>PLGA-PCL co polymer> PLGA-PCL blend>PLGA a b 이러한 항원이 점막으로 도달하기까지 단백질 분해효소, pH, 물리적 장벽 등 많은 외부환경에 노출되게 됩니다. 이러한 외부환경의 영향을 최소화 하기 위해 polymer, liposome, 바이러스 유사 particle 등이 연구되고 있습니다. 그중 몇 개만 소개를 하고자 합니다. 이 것은 생분해성 합성 고분자라고 알려진 PCF, PLGA을 이용하여 nanoparticle을 제조하여 디프테리아 독소를 첨가하여 만든 백신입니다. 그룹은 PCL, PLGA, PCL,PLGA blend, PLC,PLGA co polymer, 디프테리아 독소 단독처리군 으로 진행하였습니다. Hydrophobicity 측정 결과 PCL, PLGA-PCL co polymer, PLGA-PCL blend, PLGA 순으로 높게 측정되었다. 백신 투여는 비강투여, 근육투여 하였으며, 항체의 양을 측정하기 위하여 투여 후 일주일 간격으로 혈액을 채취하였으며, boosting 하여 일주일 후 혈액을 채취하였다. 그 결과, 공통적으로 polymer에 적용된 백신이 디프테리아 독소를 단독투여 했을 때에 비해 항체의 양이 높게 나타나있음을 알 수 있고, 그 중 PCL 그룹에서 가장 높게 나타났다. 또한, 투여후 70일 후 spleen cell 에서의 IL-6, IFN-r 를 측정한 결과 앞의 경향과 같이 PCL에 적용한 백신에서 가장 높게 측정되었으며, 공통적으로 비강투여에서 더 높게 나타났다. ---결론 공부---- Fig.3 (a) Interleukin 6 (IL-6), (b) Interferon gamma (IFN-ɤ) production by mixed spleen cells during suspension culture with 20 or 0 ug/ml concentrations of soluble DT. 1, PCL; 2, PLGA; 3, PLGA–PCL (blend); 4, PLGA–PCL (co-polymer); 5, free DT; 6. naive. Fig1. DT specific serum IgG antibody (a) titres after 4 and 8 weeks following i.n. delivery (b) determined 1 week, day 63, following i.m. boosting. Fig2. DT specific serum IgG antibody (a) titres after 4, 8, and 12 weeks following i.m. delivery (b) determined 1 week, day 91, following i.m. boosting.

13 Mucosal vaccine deliver – nanoparticle (natural polymer)
Fig.1 Transmission electron micrograph of CS/TPP-HA nanoparticles produced at CS/ TPP ratio of 1:0.6 Fig.3 Numbers of influenza-specific IFN-γ-secreting splenocytes measured by ELISPOT assay. Data are the average number of spots in well containing 106 influenza virus stimulated spleen cells from three independent experiments. 다음은 Natural polymer인 키토산으로 제조된 나노파티클에 인플루엔자 바이러스를 적용한 논문입니다. 키토산과 sodium tripolyphosphate 를 이용해 nanoparticle을 제조하였고, 그 나노파티클에 인플루엔자 바이러스를 적용시킨 그룹, 인플루엔자 단독, 나노파티클 단독, 또 비교를 위해 PBS 를 투여한 그룹으로 나눠 진행하였다. 3주 간격으로 2번 투여 후 2주 뒤 혈액, 비강 세척액, BALF를 채취하여 각 항체의 양을 측정하였으며, 공통적으로 나노파티클에 인플루엔자 바이러스를 적용시킨 그룹에서 항체가 높게 나타났다. 이것은 전신성 면역, 점막면역 모두를 활성화 시켰다고 할 수 있다. 또한 spleen cell에서 IFN-r 를 측정한 결과 역시 나노파티클에 적용한 것이 가장 높게 나타났습니다. ----결론 Fig.2 Indirect ELISA antibody titers in sera, BALF, and NW of vaccinated and control mice. Reciprocal titers of HA-specific serum IgG (a), bronchoalveolar lavage fluids (BALF) specific IgA (b), and nasal wash (NW) specific IgA (c).

14 Mucosal vaccine deliver – Liposome
Fig.2 The levels of IgG in mouse sera detected at different time intervals after immunization. Fig.3 The levels of IgA in mouse different tissue mucosa detected 3 weeks after immunization. Fig.1 The molecular structure of MPC and schematic structure of an MLL. 리포솜은 지질이중층막과 수용성 중심으로 이루어져 있어 친수성, 소수성 물질을 다 수용할 수 있으며, 생체막과의 친화력을 이용하여 물질을 전달할 수 있어 점막백신전달 방법으로 많이 연구되고 있습니다. 본 연구에서는 liposome에 항원을 넣고, immune cell 을 타겟팅 할 수 있는 MPC를 표면에 부착하여 파티클을 만들었다. 이 리포솜을 경구투여한 후 혈액을 채취하여 IgG, IFN-r, IL-4를 측정하였고, 각 점액을 채취하여 IgA를 측정하였습니다. Fig.5 A schematic diagram for the formation of MLLs by PEL and of the o.m. immunization route. Fig.4 The levels of IFN-r (a) and IL-4 (b) in mouse sera and splenocyte cultures ssayed with ELISA (n = 3/group). The concentrations of IFN-c and the levels of IL-4 (indirectly indicated with OA at 450 nm) in mouse sera or in the culture supernatants of the splenocytes ( cells/well incubated with 2.5 mg/mL BSA for 72 h at 37 C) were assayed without further dilution.

15 Adjuvants for mucosal routes
An adjuvant is an ingredient of a vaccine that helps create a stronger immune response in the patient’s body. In other words, adjuvants help vaccines work better. Some vaccines made from weakened or dead germs contain naturally occurring adjuvants and help the body produce a strong protective immune response. microbe-based adjuvants Cytokines / Chemokines Cholera toxin (CT) Heat labile enterotoxin (LT) Diphtheria toxin (DT) Cytokine : IL-1 superfamily(IL-1a/b, IL-18, IL-33) Pro-inflammatory (IL-6, IL-12, IL-15) Chemokine : MCP-1, MIP-1a, MIP-1b, SLC/CCL19, SLC/CCL21, MIP-2 앞서 말씀드린 병원체나 항원이 점막에 도달하여 면역반응을 잘 일으키기 위해서는 보조제가 필요합니다. 보조제는 백신이 일으키는 면역반응을 더 크게하며 더 잘 작용할 수 있게 도와주는 것을 말합니다. 먼저, 미생물 기반 adjuvant가 있습니다. 콜레라독소, 이열성독소, 디프테리아 독소 등이 있으며, 대표적으로 콜레라는 장에 들어가서 g protein을 활성화 시켜 cAMP를 계속 생성하게 유도하고, Na+ 를 흡수하지 못하게하고, Cl- 배설을 촉진함으로써 설사를 유발합니다. 하지만 이 콜레라균을 약간만 변형시켜 독성을 없애고 adjuvant로 사용할 경우 항원이 더 잘 침투할수 있게해주며, 여러 면역세포들의 활성을 촉진시켜주고 항체생산을 촉진시켜주는 역할을 한다고 알려져있습니다. 또다른 방법으로는 cytokine과 chemokine을 함께 투여하는 방법이 있습니다. IL-1 superfamiliy는 IgG, IgA를 증가시키며, pro inflammatory cytokine은 IgA를 증가시키며, 독성 T cell의 반응을 촉진시킵니다. 다음과 같은 여러 chemokine은 점막표면의 IgA분비를 증가시키며, 독성 T cell의 반응을 촉진시킨다고 알려져있습니다.

16 Adjuvants for mucosal routes
TLR-based aduvant Toll-like receptors (TLRs) are a class of proteins that play a key role in the innate immune system. They are single, membrane-spanning, non-catalytic receptors usually expressed in sentinel cells such as macrophages and dendritic cells, that recognize structurally conserved molecules derived from microbes. Alum, MPL-A (TLR4 agonist) CpG (TLR9 agonist) Poly(I:C) (TLR3 ligand) Flagellin (TLR5 ligand) Imidazoquinoline (TLR7/8 agonist) 또 다른 방법으로는 TLR을 기반으로한 adjuvant가 있습니다. 먼저, TLR이란 대표적인 패턴인식 수용체입니다. 패턴인식 수용체는 우리 몸에 없으며, 병원체에서만 존재하는 분자패턴을 인식하여 대식세포 활성화, 사이토카인 분비 촉진 등 각종 면역작용을 활성화 시키는 것입니다. 현재, 인간에서는 10개의 TLR이 발견되었으며, 이 TLR의 agonist, ligand 를 이용하여 백신의 면역반응을 강하게 유도하게끔 합니다. 다음과 같은 것들이 있으며, 특히 TLR4 agonist인 MPL-A 는 FDA 승인을 받았으며, LPS와 거의 유사한 면역활성을 유도하나 독성이 없습니다.

17 Conclusion Existing vaccine delivery method which is intramuscular injection have problems such as pain, fear and risk of infection. Unlike i.m injection, Mucosal vaccination is safe, no pain and do not have to need professional techniques. Additionally mucosal immune system as well as systemic immune system is induced. We should develop proper adjuvant for mucosa system because mucosa vaccination is difficult to deliver.

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