분자생물학실험 SUBJECT DNA extraction.

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1 분자생물학실험 SUBJECT DNA extraction

2 분자생물학실험 DNA EXTRACTION PCR TA Ligation E.coli transformation Mini-prep
Sequence blast Restriction enzyme Mini-prep E.coli transformation TA Ligation PCR DNA EXTRACTION

3 분자생물학실험

4 분자생물학실험 Arabidopsis thaliana Materials & Method
식물체가 작아 Plant biology분야에서 model organism으로 쓰임 유전학과 분자생물학의 기본 연구들에 주요한 장점을 제공 Genome sequence가 다 밝혀짐 5개의 chromosome을 가짐 Life cycle이 매우 짧음 (seed germination에서부터 seed harvest까지 6주 소요) 식물체가 작아서 제한된 공간에서도 식물을 재배하기 쉽고 이동 또한 간편 Transformation이 간편하며 효율이 좋다. 많은 종류의 mutant line들과 genomic resource가 존재.

5 분자생물학실험 Samples(Arabidopsis)
Materials & Method Samples(Arabidopsis) Extraction buffer, Isopropanol, 70% Ethanol, 3rd D.W. pipette, tip, E-tube, rack, micro pestle, centrifuge

6 분자생물학실험 Materials & Method DNA isolation DNA extraction buffer
1. Grind samples and add 500ul DNA extraction buffer. 2. Centrifuge at 13,000 rpm for 5min. 3. Mix Supernatant 400ul + isopropanol 400ul (1:1) 4. Centrifuge at 13,000 rpm for 20min. 5. Discard supernatant and add 70% Ethanol 500ul 6. Centrifuge at 13,000 rpm for 5min. 7. Dry the DNA pellet 8. Dissolve DNA in D.W. DNA extraction buffer 200mM Tris-Cl (pH7.5) 250mM NaCl 25mM EDTA 0.5% SDS

7 분자생물학실험 Result & Discussion
DNA extraction buffer에 들어가는 시약의 역할, 왜 필요한지? 원리 DNA extraction buffer ( 아래 표 완성, 답만 작성하지 말것 ) Reagent Final conc. Stock conc. Volume Tris-Cl(pH 7.5) 200mM 1M ㎖ NaCl 250mM 5M EDTA 25mM 0.5M SDS 0.5% 10% D.W - Total 250㎖ 표 아래에 계산과정 논리적으로 정리 할 것

8 분자생물학실험 다음 실험 예비 레포트 -Primer design 조건 -PCR 원리 및 방법