Chapter 7. 흡광광도법 - Absorption spectrophotometry using spectrophotometer 기본 원리, 기기사용법 및 측정법 개요 및 원리 : 분광광도법 투광도 및 흡광도 Beer-Lambert Law Standard curve 1.

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1 Chapter 7. 흡광광도법 - Absorption spectrophotometry using spectrophotometer 기본 원리, 기기사용법 및 측정법 개요 및 원리 : 분광광도법 투광도 및 흡광도 Beer-Lambert Law Standard curve 1. 실험기기 : Spectrophotometer 기기사용법 및 주의사항 2. 경량, 내열 (파괴인성 크리프 강도(피로강도)) 실험재료 및 실험방법 3. 보고서 작성법 : 실험결과 및 Further study 4.

2 분광광도법 ( Absorption spectrophotometry )
1. 개요 및 원리 빛 - 반사 , 흡수, 통과 흡광도 - 시료에 의해 흡수되는 빛의 양 - 시료의 농도에 비례 흡광광도법 ( Absorption spectrophotometry ) - 일정 파장에서 시료용액의 흡광도를 측정 → 목적 성분의 정량 - 자외선(180nm~320nm) 및 가시광선(329nm~800nm) Light 분광광도법 ( Absorption spectrophotometry ) 경량, 내열 (파괴인성 크리프 강도(피로강도))

3 투광도 (T) 및 흡광도 (A) I0 I 흡광도 ( Absorbance )
1. 개요 및 원리 투광도 (T) 및 흡광도 (A) I0 I 흡광물질 비존재 흡광물질 존재 투광도 ( Transmittance ) T= I / I0 , %T= T X 100 - 시료를 통과한 입사광의 분율 - 투광도의 범위는 T <= 1 ex) %T=30 → 70%의 빛이 시료를 통과하지 못함 시료에 의해 빛이 전혀 흡수되지 않을 경우, T=1 모두 흡수되는 경우, T=0 - 투광도는 시료의 농도와 무관 흡광도 ( Absorbance ) A= log I0 /I = - log I/I0 = - logT 경량, 내열 (파괴인성 크리프 강도(피로강도)) I/I %T A

4 Cuvette의 직경이 빛의 투광율에 미치는 영향
1. 개요 및 원리 Beer-Lambert Law Cuvette의 직경이 빛의 투광율에 미치는 영향 I0 I 흡광물질 비존재 흡광물질 존재 투광도 ( Transmittance ) 와 흡광도 ( Absorbance ) T = I / I0 A = - logT = K x C ← Beer’s Law - 투광도는 시료의 농도와 무관하나, 그 로그함수 즉, - 흡광도는 , 1. 시료의 농도와 일정한 상관관계를 가짐 (c) 2. cuvette의 직경 또는 폭에 영향 받음 (l) 3. 물질 고유의 특성에 따라 달라짐 (e, 몰흡광계수 , molar absorptivity ) A = e l c A: absorbance, OD, 흡광도 c : molar concentration , 시료의 농도 (M) l : light path length, cuvette의 폭 (cm) e: molar absorption coefficient, 몰 흡광계수 ( M-1cm-1 ) 경량, 내열 (파괴인성 크리프 강도(피로강도))

5 Standard curve를 이용한 미지시료의 농도 정량
1. 개요 및 원리 Standard curve ? Standard curve를 이용한 미지시료의 농도 정량 흡광물질의 농도가 높은 경우 경량, 내열 (파괴인성 크리프 강도(피로강도)) 흡광도는 흡광물질의 농도에 비례 농도를 알고 있는 표준 시료의 용액에 대한 흡광도 → 미지농도 시료의 농도를 정량해냄 시료 중 흡광물질의 농도가 매우 높거나 낮은 경우, Beer’s law를 따르지 않게됨

6 Spectrophotometer 특정 파장의 빛이 화학물질에 의해 흡수되는 정도를 측정하는 기기
2. 실험기기 Spectrophotometer 특정 파장의 빛이 화학물질에 의해 흡수되는 정도를 측정하는 기기 큐벳(cuvette) 단색화 장치에서 나온 단색파장의 빛은 통로길이가 l 인 시료를 통과 시료는 큐벳(cuvette)이라고 하는 흡수용기에 넣음 * cuvette : 석영 (가시광선, 자외선 투과), 유리와 플라스틱 (자외선 흡수, 가시광선에서만 사용 가능) 흡광도를 측정할 때에는 대조액(blank)을 통해 base line을 잡음 * Blank : 흡광물질이 없는 용액 , 버퍼는 시료용액과 동일해야함 경량, 내열 (파괴인성 크리프 강도(피로강도))

7 Spectrophotometer 올바른 조작 방법 A= 0.2 ~0.9 범위의 값이 유의함
2. 실험기기 Spectrophotometer 올바른 조작 방법 큐벳(cuvette) A= 0.2 ~0.9 범위의 값이 유의함 각 시료의 최대 흡광도를 나타내는 파장에서 측정함 Cuvette은 표준화된 것을 사용함 시료중에 먼지가 포함되지 않도록 뚜껑을 닫거나 , 지문 흡착에 주의함 ( 먼지는 빛을 산란시켜 흡광도 증가를 유발할 수 있음 ) 경량, 내열 (파괴인성 크리프 강도(피로강도))

8 Materials and Methods Materials - Compound Y ( 410nm에서 최대흡광도의 물질)
3. 실험재료 및 실험방법 Materials and Methods Materials - Compound Y ( 410nm에서 최대흡광도의 물질) 10, 20, 40, 60 uM Y compound in 100mM Tris-Cl buffer and Blank - Spectrophotometer Methods 1) spectrophotometer의 wavelength를 410 nm로 설정 및 blank 측정 2) 농도가 주어진 4개의 compound Y 용액을 cuvette에 1mL 옮긴 후 spectrophotometer에서 O.D를 측정 3) 측정한 O.D 결과를 이용하여 Standard curve를 그림 4) compound Y의 몰 흡광계수를 구함 경량, 내열 (파괴인성 크리프 강도(피로강도))

9 Results e = 1. Absorbance & Standard curve 3. Molar absorptivity
4. 보고서 작성 Results 1. Absorbance & Standard curve Y (uM) OD 410nm 10 20 40 60 경량, 내열 (파괴인성 크리프 강도(피로강도)) 3. Molar absorptivity e =

10 4. 보고서 작성 Further study p.57 연습문제 경량, 내열 (파괴인성 크리프 강도(피로강도))

11 공지사항 보고서는 손글씨로 작성합니다. 2. 인터넷 등 각종 자료를 그대로 복사하는 경우 감점합니다
2. 인터넷 등 각종 자료를 그대로 복사하는 경우 감점합니다 3. Discussion 은 1-2페이지로 작성합니다 4. 자료 인용 시 반드시 Reference를 씁니다 5. 본인의 학번과 이름을 반드시 기재합니다 6. 미제출시 0점 처리합니다 * 기타 수업 및 레포트 관련 문의는 (S404호, 이종석, ) 경량, 내열 (파괴인성 크리프 강도(피로강도))