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Published byPhillip Hoover Modified 6년 전
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3M 페트리필름 이란 ? 식품 및 환경에 존재하는 각종 미생물 (일반세균, 장내세균, 대장균 및 대장균군, 진균, 황색포도상구균 등)을 검사하기 위한 건조필름배지(Dry rehydratable film media)는 얇은 필름에 영양성분, 수용성 겔 및 균 indicator(TTC 등)을 3M社의 특수한 기술로 코팅하여 미생물이 수용성겔 안에서 증식하게 함. 시료 1mL를 페트리필름에 접종, 배양시키면 각 미생물의 특성에 따른 지시약의 색 변화로 균수를 판단
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전통적인 미생물 실험과 비교 ♣ 배지의 보관 기간 및 제조 시 시간비용 효과 ♣ 배지 제조자 숙련도에 따라 품질 변화 고려
초자준비 배지제조 (1시간~) 배지 멸균 (2시간) 한천배지 접종 배양 페트리필름 준비 한천배지 접종 배양 ♣ 배지의 보관 기간 및 제조 시 시간비용 효과 ♣ 배지 제조자 숙련도에 따라 품질 변화 고려 ♣ 멸균기, 실험 장비 및 도구 준비, 설거지 등 노동비, 에너지비 ♣ 실험량이 늘어나는 경우 매번 배지 제조의 번거로움 ♣ 배지 준비 보다 가치있는 일 중심으로 업무 변화 • HACCP 준비 및 수행 • 작업자 교육 • 현장 검사
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3M 페트리필름의 구성 폴리프로필렌 커버 접착제+지시약 수용성 겔 영양성분 접착제 풀리에틸렌 커버
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일반세균용 페트리필름 배지 조성 및 그 기능 Pancreatic digest of casein Yeast Extract
Sodium Pyruvate Dextrose Potassium Phosphate, Dibasic Potassium Phosphate, Monobasic Guar Gum 2,3,5-TriphenylTetrazolium Chloride 성장에 필요한 아미노산과 질소원 성장 자극제인 B-complex 비타민 제공 생리기능 강화 에너지원 버퍼 작용 Water soluble gelling agent 붉은 색 염색 dye
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2. 3M 페트리필름을 이용한 실험법 1. 시료채취 (A) (B) (C) (D) (E) (F) : 멸균글러브를 착용한다.
: 샘플 수거백에 레이블을 해 놓은 후 : 미리 저울에 달아 영점을 잡는다. : 멸균도마에 식품 샘플을 놓고 일회용 칼과 핀셋을 이용하여 검사 대상을 자른다. (E) : 준비한 멸균백에 넣는다. (F) : 시료의 무게를 잰다. ( 약 10~25 g을 취한다.) (E) (F)
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2. 3M 페트리필름을 이용한 실험법 2. 시료 전처리 및 희석 (A) (B) (C) (D) (E)
: 시료무게의 약 10배(90 ㎖) 해당하는 멸균 생리식염수를 넣는다 (10배). : 멸균백의 와이어를 이용해 두 번 접고 전처리 stomacher를 이용해 균질 화한다. (C) : 멸균백 스탠드에 옮긴 후 입구를 벌려 멸균 일회용 스포이드를 이용해 1 ㎖를 취한다. (D) : 멸균희석액(9 ㎖)에 1 ㎖을 옮긴다(100배). (E) : 진탕 혼합하여 희석한다. (vortex mixer이용) (E)
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2. 3M 페트리필름을 이용한 실험법 3. 접종 및 배양 (A) (B) (C) (D) : 페트리필름에 레이블을 한다.
: 페트리필름에 레이블을 한다. : 멸균희석액에서 1 ㎖를 멸균 스포이드를 이용하여 페트리필름 에 접종한다. (e•swab의 경우 1 ㎖을 바로 떨어뜨린다) : 배양기 (35 ℃)에 배양한 후 : 배양된 결과를 판독한다.
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3. 3M 일반세균용 페트리필름 계수: 0 계수: 143 계수: TNTC ▶ 25~250 cfu
▶ 시료에 고추가루같은 빨간 색 이 있을 경우는 멸균필터백 이용 ▶ 순수분리배양 유산균 배양 가능
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3. 3M 일반세균용 페트리필름 ▶ 일반세균용 페트리필름(AC) 사용시 수화현상이 일어날 때
♣ 수화현상의 원인 : 일부 미생물 중 페트리필름에 포함된 Guar gum을 분해하여 gel 이 액상으로 바뀌게 됩니다. Guar gum ♣ 조치 방법 ① 기존 희석배수에 10배정도를 더 희석합니다. ② 수화현상이 일어나기 전에 콜로니를 계수합니다. ③ 페트리필름을 20장 이내로 쌓아서 배양합니다. (5~10장 추천) ④ 낮은 온도에서 배양합니다. (30~32℃) ⑤ 일반세균용 누름판(20㎠)보다 넓은 효모곰팡이용 누름판(30㎠) 으로 눌러서 넓게 펴 줍니다. ♧ 주로 나타나는 식품 샘플은 전분, 쵸코렛, 야채류 등에서 잘 나타남
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3. 3M 대장균/군용 페트리필름 배지 : Violet Red Bile nutrients + β-glucuronidase indicator+ TTC 가스포집 푸른색 colony, 15~150 cfu 전통적 방법 : MPN(most probable number) Method 한번 접종으로 확정실험 총 실험시간 24~48 hr E.Coli Coliform Coliform E. coli count = 17 Estimated total coliform count = 150 E. coli = 49 (blue colonies with gas) Total coliform = 87 (red and blue colonies with gas)
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3. 3M 대장균/군용 페트리필름 ◈ 대장균/군의 기포발생 패턴 대장균군이란?
: Gram 음성, 무아포성 간균으로 유당을 분해하고 가스를 발생하는 모든 호기성, 통성혐기성 세균을 말한다.
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3. 3M 장내세균용 페트리필름 붉은색 균체 + 가스/ 붉은색 균체+노란색 산 지역/ 붉은색 균체+가스방울+노란색 산지역
Official MethodsSM number by AOAC INTERNATIONAL 3. 3M 장내세균용 페트리필름 붉은색 균체 + 가스/ 붉은색 균체+노란색 산 지역/ 붉은색 균체+가스방울+노란색 산지역 한번 접종으로 확정실험 총배양시간 : 24 hr 붉은색 균체 + 가스+노란색 산 지역 붉은색 균체 + 가스 붉은색 균체 + 노란색 산 지역 배지 배양조건 측정 비고 VRBG 24시간 Black red colony SMEDP BGGB(MPN) 48시간 Gas ISO7402 Petrifilm(modified VRBG) Red, 산생성, Gas 확정실험
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4. 페트리필름을 이용한 환경검사 표면검사 1. 샘플링킷트 준비(표시) 2. 샘플링킷트 개봉 3. 표면샘플링방법
4. 페트리필름을 이용한 환경검사 표면검사 1. 샘플링킷트 준비(표시) 2. 샘플링킷트 개봉 3. 표면샘플링방법 4. 손 검사 준비 5. 칼, 도마 검사준비(보관중) 6. 행주 검사준비(보관중) 7. 검사 킷트 준비 (표시) 8. 접종 후 누름판으로 누름. 9. 35℃에서 24시간 배양
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4. 페트리필름을 이용한 환경검사 낙하균 검사 cfu/60분/petrifilm(60 ㎠)
4. 페트리필름을 이용한 환경검사 낙하균 검사 페트리필름 전처리 : 사용하기 최소 1시간 전에 멸균액 1 ㎖을 미리 분주하고 필름덮개를 덮어 둔다. 2. 페트리필름 위치 : 벽에서 30 ㎝ 떨어진 곳, 바닥에서 30 ㎝ 떨어진 곳 3. 15분간 노출 4. 배양 : 일반세균 (35 ℃, 24시간), 효모곰팡이(25 ℃, 3~5일) 5. 계산 : 일반세균 (colony 수/40 ㎠), 효모곰팡이 (colony 수/60 ㎠) cfu/60분/petrifilm(60 ㎠) 87mm petridish 면적: 59.4 ㎠
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4. 페트리필름을 이용한 환경검사 낙하균 검사 관리 예 - 오염작업구역 : 낙하세균수(생균수) 100개 이하
4. 페트리필름을 이용한 환경검사 낙하균 검사 관리 예 - 오염작업구역 : 낙하세균수(생균수) 100개 이하 - 청결작업구역 : 낙하세균수(생균수) 30개 이하, 낙하진균수(곰팡이, 효모의 생균수) 10개 이하 ♣ KGMP와 NASA의 청정도와 공중균 (예) 청정도 등급(한국) Class(NASA) 관리기준 1A 100 낙하균: 1개/hr/9㎝Φ이내 1B 10,000 낙하균: 5개/hr/9㎝Φ이내 부유균: 20개/㎥ 이내 2 100,000 낙하균: 20개/hr/9㎝Φ이내 3 없음 기준 없음, 청결유지
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5. 기타 건조필름배지 보관 건조필름배지 폐기 - 페트리필름은 감염성폐기물중 병리계폐기물로 분류된다.
5. 기타 건조필름배지 보관 페트리필름 보관 방법 개봉 전 : 냉장실 보관 (4~8 ℃) 개봉 후 : 일반 테이프나 집게로 봉인보관 (실온, 보존기간 1개월) 건조필름배지 폐기 - 페트리필름은 감염성폐기물중 병리계폐기물로 분류된다. (단 감염성폐기물 발생기관에 한함) - 감염성폐기물 발생기관: 병원, 보건소, 장례식장, 동물병원 등 기타 기관(식품회사 등)은 사업장 일반폐기물로 관리하며 바이오 헤저드백에 넣고 멸균 후 폐기하면 됩니다.
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