혈액 ,수혈 실습 계획서 14102946 김동윤.

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1 혈액 ,수혈 실습 계획서 김동윤

2 진공채혈 (Vacutainer) ,EDAT tube
0. 환자의 이름 /인적사항 / 바코드 확인 손 소독하기 / 장갑착용 터니켓 (압박대) 묶기 /혈관확인 준비한 vacutainer에 neddle 장착 천자부위 소독하기 피부면 10~15도 채혈 진공관 고정 후 EDTA Tube 삽입 (2개) 필요량 채혈후 tube 제거후 /니들제거 알코올솜 대준후 5분 지혈 실시

3 CBC 검사 하기 /ESR , PBS 검사 항목 WBC (백혈구) RBC (적혈구)
Hb (hemogolbin , 헤모글로빈 혈색소) Hct (hamatocrit ,적혈구용적률) MCV (평균적혈구 용적) MCH (평균적혈구 혈색소량) MCHC (평균 적혈구) RDW (적혈구 크기분포) Platelet (지혈,응고 역할) ESR (적혈구 침강속도) PBS (말초혈액 도말)

4 항목 참고치 임상적 의의 WBC 4.0~10.0 x103/㎛ RBC 4.2~6.3 x 백만/㎛ Hb 13~17 g/dL Hct
▲급성감염 , 홍역, 외상 , 백일해 , 악성종양 , 순환 장애 ▼세균감염, 약이나 급성 백혈병 등에 의한 골수 기능저하 RBC 4.2~6.3 x 백만/㎛ ▲ 심한 설사,탈수,다혈구혈증, 급성 약 중독, 폐 섬유증 ▼ 용혈성빈혈,빈혈, 출혈 , 에디슨병, 류머티스열, 백혈병 Hb 13~17 g/dL ▲만성 폐색성폐질환, 울혈성 심부전 , 다혈구혈증 ,탈수증 ▼ 갑상선항진증, 빈혈 , 간경화 , 심한출혈, 혈액희석 Hct 39~52 % ▲ Erythocytosis, 탈수 , 다혈구혈증, 체액손실 ▼ 갑상선 기능 항진증 , hemolysis anemia of pregnancy ,acue massiveblood loss 빈혈 ,백혈, 실혈 MCV 81~ 96 fL (평균적혈구용적) Macrocytic, Normocytic , Microcytic의 구별 MCH 26 – 33 pg (평균 적혈구 혈색소량) MCHC 32 – 36 % (평균 적혈구 혈색소 농도) RDW 11.5 ~ 14.5 적혈구 크기분포 Platelet 130~400 x103 /㎛ 지혈작용, 혈액응고역할 ▲ 외상 , 심장병, 만서췌장염, 비장절제술 , 결핵 ▼ 바이러스감염, 폐렴, 알러지 ,급성백혈병 , 재생불량성 빈혈 , 용혈장애 , DIC , 특발성혈소판감소성자반증 , AIDS PCT 0.15 ~ 0.32 Pletelet crit : 특발성 PLT감소성 자반증 등 출혈질환 감별 MPV 7.4 ~ 10.4 fL 평균 혈소판 용적 : 증감시 골수이상 ,백혈병 , 재생불량성 빈혈 , 혈소판이상 , 비장이상

5 ESR 측정 임상에서 흔히 사용하는 지표 항응고제를 첨가한 시험관에 혈액을 넣고 세워두면 적혈구의 비중이 무겁기 때문에 가라앉는다.이를 “ESR 적혈구 침강속도” 라고 한다. 남성 2~10 mm/hr 여성 3~15 mm/hr 어린이 0.5~20 mm/hr 임신 35mm/hr까지 증가 (임신아닌데 20~35면 병적 증세) 결핵 ,패혈증, 암같은 병적상태에서 혈구가 잘뭉치기 때문에 침강속도가 65~100mm/hr 까지 상승  항진 → 악성종양, 혈액질환(다발성골수종, 악성림프종, 재생불량성빈혈, 급성백혈병), 급성/만성감엽증, 교원병, 간질환   지연 → 다혈증, 파종성혈관내응고(DIC) 저섬유소원혈증

6 PBS Slide / wright stain
말초혈액을 채혈하여 유리슬라이드에 도말한 후 염색하여 현미경으로 혈구의 수적. 형태학적 이상을 관찰하는 검사 Wright Giemsa stain 1. Wrigh염색을 한다. (3~5분) 2. 완충액을 올려놓고 (2~3분) or 곧바로 세척 3. Giemsa 염색으로 10~20분 염색후 세척 후 건조 준비물 :   Wright stain   - 생리식염수   - Glacial Acetic Acid   - Crystal

7 - Wright powder 3g, Glycerin 30mL
유발에 넣고 갈아준다. 37℃ 배양기에 수일간 방치한다. 가끔 꺼내서 갈아준다. Acetone free methanol 1,000mL를 가하고 혼합 후 갈색병에 넣어 2주정도 보관하였다가 사용하나 사용직전 반드시 여과를 한 후 사용 제조회사에 따라 Wright powder에 포함되는 염료들의 구성성분이 달라 염색성에 차이가 있으므로 선택에 유의 하여야 한다. 최근에는 상품화된 것을 많이 사용하고 있으며 미국과 유럽 등 선진국에서는 May-Grundwald-Giemsa satian 혹은 Wright-Giemsa stain액을 더 많이 사용하고 있다. (2) 완충액의 조제( Sorensen buffer pH (6.4~6.6) 1/15M 인산완충액 조제: A액: Potassium phosphate monobasic(KH₂HPO₄): 9.07g을 증류수(CO₂를 제거하기 위해 끓여서 사용하면 좋다)를 넣어서 용해시키고 1L 로 만듬 B액: Sodium phosphate dibasic(Na₂HPO₄): Na₂HPO₄ 9.47g을 증류수(끓여서 사용하면 좋다)를 넣어서 용해시킨 다음 1L로 만든다. A액과 B액을 다음과 같이 혼합하면 구하는 pH를 얻을 수 있다. PH (A) KH2Hp4(1/15M) (B) Na2Hp4 (1/15M) 6.4 75.4 ml 24.6 ml 6.6 65.3 34.7 6.8 53.4 46.6

8 WBC, RBC , platelet count WBC count ( 11− x 10 x WBC값 𝑋 1 4 ) RBC count ( 101− x 10 x RBC값 X5)

9 Newbauer chamber 대구획 중구획 소구획

10 ABO, Rh 혈액형 검사(혈구형, 혈청형) 혈 구 형 (Cell type) 혈 청 형 (serum type) 혈액형
0. 환자의 이름 /인적사항 / 바코드 확인 손 소독하기 / 장갑착용 터니켓 (압박대) 묶기 /혈관확인 준비한 vacutainer에 neddle 장착 천자부위 소독하기 피부면 10~15도 채혈 진공관 고정 후 EDTA Tube 삽입 (2개) 필요량 채혈후 tube 제거후 /니들제거 알코올솜 대준후 5분 지혈 실시 혈 구 형 (Cell type) 혈 청 형 (serum type) 혈액형 Anti-a Ant-b Anti-d A-cell B-cell A O X Rh(+,-) B AB

11 Cell typing / Front typing (혈구형)
0.채혈 후 검체를 3400rpm 혈구형,혈청형 분리 (5분) 1. Slide법 ① Slide glass에 A와 B를 구분 ② anti-A, anti-B 혈청을 각각 1 drop씩 적하시킨다. ③ 피검혈액을 항혈청에 적하 후 로 섞는다. ④ Slide를 전후좌우로 기울여 반응을 촉진시킨 후 2분 이내에 판독한다. 2. Tube법 ① tube에 anti-A, anti-B 혈청을 1 drop씩 적하 ② 2~5% 혈구부유액을 각각 1 drop씩 적하 ③ 응집력을 높이기 위해 3400rpm에서 15초간 원심분리

12 Serum typing / Back typing (혈청형)
1) 검체를 혈구와 혈청(혈장)으로 분리하기 위해 3400rpm으로 5분 동안 원심분리 2.생리식염수와 검체 혈구를 가하여 혼합 (1:9 비율) (ex 혈구 10ml , 생리식염수 90ml) 3) 슬라이드에 항 A혈청, 항 B혈청을 1~2방울을 떨어뜨리고 만든 10% 혈구 부유액을 1방울 가한다. (가장 좋은 항원 항체의 비율 // 항원 : 항체 = 1 : 2 ) 4) 항혈청과 피검혈구를 나무봉 (wood applicator)등으로 혼합하고 2분 이내에 판정 (serofuge시 3400rpm 15초)

13 아형 만들기 (항원,항체 조절) 1)weak A 또는 weak B 적혈구에는 A형 또는 B형 항원이 약 100만개 정도 있는데 이보다 항원수가 적은 적혈구를 갖는 경우 weak A 또는 weak B 로 표현 A형 또는 B형은 O형으로 판정될 수 있게 만들어볼 예정입니다.