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Western blot
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지난 주 실험 개요 Western blot Cell harvest Gel electrophoresis (SDS PAGE)
Cell lysis 단백질 정량 (Sampling) Gel electrophoresis (SDS PAGE) Transfer Blocking
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실험 개요 Primary, secondary antibody incubation Developing (using film)
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Introduction Membrane으로 transfer한 단백질을 Film 또는 chemi-doc를 통해 단백질의 양을 상대적으로 측정하는 과정
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Introduction
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Introduction Primary antibody Secondary antibody
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Materials & Methods Primary incubation TBS-T wash 5min, 3 times A B
Secondary antibody incubation for 1hour 30mins ECL A, B 를 각각 200ul를 E-tube에 섞는다. 랩에 membrane을 올려 놓고 ECL을 뿌려 놓는다. Chemi-doc으로 측정 A B Shaking incubator
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Result ① ② ??kDa → →CPT1 ??kDa → →β-actin marker control WY 1.083
dosage 실험 결과 SDS-PAGE OD (y값) ug/ul (x값) X = (y )/0.0583 로딩량 (uL) /30ug 30/x값 5X loding dye DW (or RIPA) 총볼륨 =20uL A 1.083 1.7 4 14.3 20 B 0.689 2.8 13.2 ② marker control WY ??kDa → →CPT1 Bradford 용액 ??kDa → →β-actin
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Discussion Q. Lowry method, Bradford method에 대해 알아보세요 실험결과 해석 및 고찰
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Report 12/7 5시 까지 제출
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