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Restriction enzyme Ⅰ
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Introduction 제한효소(Restriction Enzyme)
Nuclease는 DNA를 자르는 모든 효소를 말하고 nucleotide 간의 phosphodiester 결합을 끊을 때 DNA 사슬 바깥쪽부터 자르는가 안쪽을 자르느냐에 따라 각각 exonuclease와 endonuclease로 나뉜다. Endonuclease의 대표적인 것이 제한효소인데 DNA의 특정 염기서열을 인식하고 인식한 서열 부위 또는 그 근처를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해 들어온 바이러스와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전에서 발견되어 바이러스의 증식을 제한한다는 의미로 이름 지어졌다. 이 때 자신의 DNA에 잇는 절단부위의 염기를 methylation시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호한다.
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Introduction Blunt end Sticky end palindrome
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Introduction EcoRI 제한효소 이중 가닥 DNA 특정 제한효소(EcoRI)가 GAATTC 염기서열에 결합하고
DNA를 절단하여 “sticky end”을 지닌 DNA 조각을 형성한다. “sticky end”의 단일가닥 이중 가닥 DNA
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Introduction ►Supercoiling functions to reduce the space required for DNA packaging, allowing for more efficient storage of DNA
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Introduction
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Introduction supercoiled plasmid linear plasmid marker
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Materials & Methods pcr tube에 다음과 같이 넣는다 30min, 37℃ incubation
Gel electrophoresis를 통해 band를 확인한다. Plasmid DNA, restriction enzyme, Gel, Gel box, Power supply, uv transilluminator, 1kb DNA marker, TAE buffer… DNA 5.2μl Hind lll 1μl 10X buffer 3μl DW 20.8μl Total 30μl
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Result Gel 사진 Ex) marker Size 표시 linear plasmid supercoiled plasmid
8kb Size 표시
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Discussion 6주차 + 7주차 report ->4월 20일 시험 시작 전에 제출
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