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Salting Out 원리를 이용한 두부 만들기

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Presentation on theme: "Salting Out 원리를 이용한 두부 만들기"— Presentation transcript:

1 Salting Out 원리를 이용한 두부 만들기
생화학 연구실 김 현 우

2 간수, 그리고 염(salt)이란? 간수 염(salt) : 바닷물에서 소금을 석출하고 남은 용액, 염화마그네슘,
황산마그네슘 등으로 이루어짐. 염(salt) : 산과 염기의 중화반응으로 생긴 ionic compounds

3 Salting in, Salting out의 뜻과 원리

4 Salting In Salting Out - 저농도의 염이 물에 녹아 있을 때
- 염이 첨가됨으로써 단백질의 용해도가 더 높아짐 - 이온이 단백질과 인력을 형성함으로써 단백질과 단백질 사이의 인력이 감소, 엉김 현상 감소 Salting Out - 수용액에 아주 많은 이온이 존재할 때 - 염이 첨가됨으로써 단백질의 용해도가 떨어짐 - 물에 녹는 것에 대해 이온과 단백질이 경쟁함으로써 단백질끼리의 인력이 증가, 엉김 현상 생김

5 단백질 정제 과정에서의 salting out
어떤 단백질을 연구하기 위해서는 세포 내에서 해당 단백질만을 선별하는 과정이 필요  단백질 정제(protein purification) 단백질들은 서로 다른 염의 농도에서 침전되므로 염의 농도를 이용해서 단백질을 분리할 수 있다. (즉, salting out을 이용해서)

6 단백질 정제 과정 전반

7 단백질 정제 과정 -Chromatography
Chromatography 이후에 SDS-PAGE로 확인한 사진 얻고자 했던 Purified protein

8 단백질 정제 과정에서의 salting out
두부를 만들 때는 간수를 염으로 사용하지만, 단백질 정제 과정에서의 염은 ammonium sulfate가 주로 쓰인다. 1. 물에 잘 녹는다. 2. 온도에 따른 결과 차이가 크지 않다. 3. 대부분의 단백질의 안정성(stability)에 영향을 주지 않는다.

9 Dialysis(투석) 반투과성 막을 이용해 salt와 같은 작은 분자들을 단백질로부터 분리해 내는 과정
(일반적으로 salting out 다음 과정)

10 Dialysis(투석) Dialysis의 속도에 영향을 미치는 요소: 반투과성 막 사이의 작은 분자들의 농도 차이
반투과성 막의 pore size Dialysis되는 작은 분자들의 크기

11

12 실험 재료 콩 160g 물 1L 믹서기 두부보 핫 플레이트 간수 두부틀

13 실험 방법 콩 160g을 9시간 정도 물에 담구어 불린다. 약 400mL의 물과 함께 콩을 믹서기에 간다.
갈린 콩과 콩물을 두부보에 부어 비지를 걸러낸다. 핫 플레이트에서 콩물을 끓인다. 두유가 끓으면 상온에 5분 정도 식힌다. 그 동안, 간수 한 포를 물 130mL(종이컵 1컵)에 녹인다. 간수를 두유에 넣고 가만히 놔 둔다.(두부가 엉기는 것이 보인다.) 그 동안, 두부틀에 두부보를 펴서 콩물을 부을 준비를 한다. 두부틀에 콩물과 두부 알갱이를 붓고 두부보로 꽉 짜준 후 약 10분을 기다린다.

14 예비 실험 결과

15 예비보고서, 결과보고서 결과보고서: 만들어진 두부의 모양을 다른 조와 비교해 작성해 보고 (알갱이의 크기 등) 그 이유에 대해 추론해 보세요. 토의: 1. Isoelectric point(pI)란 무엇인지, pI와 protein solubility 간의 관계를 조사해 보고, 레몬즙을 이용해서 두부를 만드는 원리와의 상관관계를 유추해보세요. (힌트: 대부분의 콩 단백질의 pI는 4.5입니다.) 2. Protein purification에 사용되는 실험기법을 조사하고 그 과정과 원리를 상세히 설명하시오 (최소 3가지). - 예비보고서: 1. UV 조사에 의한 동물세포에서의 세포사멸 기작 동물세포배양이 무엇인지 알아보고 그 방법 조사

16 참고자료 1) 2) 3) 4) 5) 6)


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