MICRO-ARRAY 화공생명공학과 20041199 이수진
목차 1. 이론 2. 실험 목적 3. 실험 순서 4. 실험 결과 및 분석 5. 토의
이론 이론 Nucleic Acid DNA RNA 단백질의 아미노산 순서와 배열 결정 아미노산의 조립에 직접 참가하는 핵산
이론 PCR (Polymerase Chain Reaction) Step1 Denaturation 950C Step2 Annealing 540C Step3 Elongation 720C
이론 Hybridization
이론 Fluorescent Dye N-hydroxysuccinimide Reactive group Cy3(550~670nm), Green Cy5(649~670nm), Red Aminoallyl group Carbon 5 of U or C
실험 목적 Detection of DNA and RNA of bacteria RNA detection : Gene Expression 을 통한 병의 원인 규명 DNA detection : 잠복 균의 확인 Positive Control Ribosomal RNA 1 2 3 4 5 6 7 8 Negative Control PolyA, DMSO DNA 5 Replicates
실험 순서 1.micro-array 제작 6개의 균 배양 S.typhi / S.flexneri / E.coli H7:O157 V.choleae / V.parahaemolyticus / V.vulnificus Extract DNA Gel Electrophoresis PCR 정량 Micro-array Chip 제작
실험 순서 2. Hybridization and Detection S.flexneri 의 Genomic DNA 추출 V.vulnificus 의 RNA 추출 Reverse Transcription PCR Gel Electrophoresis Gel Electrophoresis Cy5 labeling Cy3 labeling Mix hybridization
실험 결과 및 분석 Positive Control S.Flexneri DNA Cy3 V.vulnificus RNA Cy5
실험 결과 및 분석 <Positive Control > <S.Flexneri DNA , Cy3> Damaged Substrate : slide 상의 개체들이 손상을 입은 경우 hybridization 시 cover glass의 움직임
실험 결과 및 분석 <V.vulnificus RNA , Cy5> <Positive Control > Comets : spot에 꼬리가 생긴 경우 Micro-array spotting 시 DNA의 양이 일정하지 않았음
토의 DNA와 RNA의 detection 확인 DNA : 잠복 균 RNA: 병을 일으키는 균의 발현 한계 : Genomic DNA 이용 실제 적용 : 균에 감염된 동물(ex.쥐) 실험 수행 실제 RNA의 발현 확인 안됨 RNA의 발현 확인
감사합니다. Reference 생물학:생명의 과학/을유문화사 1993년/이광웅, 구혜영, 김원, 양재섭, 윤권 상, 이종섭, 최청일, 홍영남/248~277 분자생물학(2판)/라이프사이언스 2003년/Robert F. Weaver/29~30, 66~71, 701~703 미생물학(제 5판)/라이프사이언스 2003년/Lansing M. Prescott, Jhon P. Harley, Donald A. Klein/292~297, 576 http://www.answers.com/topic/microarray http://www.answers.com/topic/cyanine-1