Progress Seminar ~2014.09.03 Ji Soo LEE

연구 진행 상황 보고서 P-chip AST & DST 영상의학과 기타 2주전 계획 연구 결과 문제점 및 대책 목표 및 계획 인슐린 data 얻기 8/25 분당 미팅 8/22 워크숍 진행 알고리즘 개선 영상의학과 답신 기다리기 9/1 양막칩 디자인 수정 미팅 9/5 인공심폐기 미팅 삼성과제 인수인계 P-chip 제작 및 실험과정 인수인계 연구 결과 Cell detachment 해결(?) Confocal imaging Revision : AST 퀀타 기준 에러율 개선 문제점 및 대책 - Confocal imaging - DST GUI가 최정일 연구원 컴퓨터에서 작동 안함 - 영상의학과 이수현 선생님 휴가 가심 목표 및 계획 Confocal imaging conditioning Intro. 작성 Revision : AST 퀀타 기준 에러율 점검 - 추석 후 미팅

Error rates (퀀타 vs. MDT) AST Bacteria Total no. of tests MDT Results Discrepancy no. Discrepancy rate S I R mE ME VME CA Gram negative total 1423 882 83 458 101 34 16 7.1% 3.9% 3.5% 89.4% Gram positive total 975 561 24 390 32 12 4 3.3% 2.1% 1.0% 95.1% Total 2398 1441 113 844 40 4.7% 2.7% 1.9% 93.0% Bacteria Total no. of tests MDT Results Discrepancy no. Discrepancy rate S I R mE ME VME CA Gram negative total 1423 862 83 478 108 28 9 7.6% 3.2% 1.9% 89.8% Gram positive total 975 546 30 399 37 4 3.8% 1.6% 1.0% 94.9% Total 2398 1408 113 877 148 13 6.2% 2.6% 1.5% 91.7%

Error rates (MDT) AST Bacteria Total no. of tests MDT Results Discrepancy no. Discrepancy rate S I R mE ME VME CA Gram negative total 1423 862 83 478 108 28 9 7.6% 3.2% 1.9% 89.8% Gram positive total 975 546 30 399 36 10 4 3.7% 1.8% 1.0% 93.7% Total 2398 1408 113 877 144 38 13 6.0% 2.7% 1.5% 91.9% Negative 에러 개수 유지, Positive 소폭 변동 Bacteria Total no. of tests MDT Results Discrepancy no. Discrepancy rate S I R mE ME VME CA Gram negative total 1423 862 83 478 108 28 9 7.6% 3.2% 1.9% 89.8% Gram positive total 975 546 30 399 37 4 3.8% 1.6% 1.0% 94.9% Total 2398 1408 113 877 148 13 6.2% 2.6% 1.5% 91.7%

Confocal imaging – 개선사항 없음 P-chip Confocal imaging – 개선사항 없음 immunostaining은 cell과 target protein에 따라 conditioning을 다르게 해야 함 현재까지 JEG-3의 zo-1 염색한 논문은 하나밖에 없는데, 해당 논문의 방법대로 염색하면 위와 같이 제대로 안 나옴.. 아산병원 공초점현미경실 선생님 도움받아 진행 중

Cell detachment 해결(?) P-chip Fibronectin coating protocol 대폭 변경 DPBS washing  40ul/ml FN injection within 24hr after plasma treatment  Overnight incubation  Media injection  At least 2hr incubation  Cell seeding (counting) Seeding density & waiting time 에 따라 실험 구성 Chip # Seeding density Waiting time ① 6x107 cells/ml 2hr ② 1.2x107 cells/ml ③ 4hr ④ Results Highest success rate since May But Cell stock이 바뀌었으므로 완전히 FN coating 덕분인지는 알 수 없음… ① ② ③ ④

인슐린 교환 실험 – 구성 P-chip Normal human blood insulin level : 5~25 μU/ml BUT in vitro insulin perfusion 실험 논문이 있으므로 이에 맞춰 진행할 예정 (아래 2가지 선택지 중 상의 후 결정) ① 100 or 200 농도만 ② 100, 1000 두 가지 농도

인슐린 교환 실험 time schedule P-chip [준비사항] Multi-syringe pump HUVEC stock Syringe pump x1 (가능하면 2) Multi-syringe pump Syringe pump x1 (가능하면 2) Multi-syringe pump Syringe pump x1 (가능하면 2) Multi-syringe pump Syringe pump x1 (가능하면 2) Multi-syringe pump Syringe pump x1 (가능하면 2)