Media.

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1 Media

2 Classical Media 종류별 성분 비교

3 Classical Media 성분

4 Classical Media 성분 비타민(vitamins) - vitamin B-group (folic acid, biotin, pantothenate 등)이 가장 많이 이용 - 일부배지에는 ascorbic acid (vitamin C)와 a-tocopherol (vitamin E)이 포함 - 배지에 첨가되는 혈청은 주요한 비타민 원으로 작용 - 비타민은 대사과정의 보조 인자로 작용하기 때문에 저농도의 비타민은 대사과정을 제한하여 세포 생존과 증식 속도에 영향을 미침

5 이온(ions) - 이온은 배지의 삼투압을 결정 - Na+, K+, Mg2+, Ca2+, Cl-, SO42-, PO43-, HCO3- 등이 배지에 이용 - Ca2+와 Mg2+는 부착과 cell aggregation의 보조 인자로 작용하기 때문에 부유 세포 배양에서는 감량 - 부유 세포를 위해서 개발된 RPMI 1640 media에는 Ca2+, Mg2+ 성분이 다른 배지들에 비해 감량되어 있음.

6 탄수화물(carbohydrate) - 대부분의 배지에서는 D-glucose가 L-glutamine과 함께 에너지원으로 작용 - D-glucose : glycolysis를 통해서 pyruvate로 전환되고 pyruvate는 Krebs 회로를 통해서 에너지를 생산 - 일부 세포주에서는 Krebs 회로가 불완전하여 다른 대체 에너지원을 요구하는데, 이때 제일 많이 사용되는 것이 L-glutamine - D-glucose는 D-galactose, D-fructose, D-mannose와 같은 다른 탄수화물로 대체될 수 있는데, 대체된 탄수화물의 사용은 배지 내 젖산(lactic acid)의 축적을 방지하여 배지의 산성화를 막을 수 있음.

7 Phenol Red - pH 지시제로 사용 - 산성 pH에서는 황색, 중성 pH에서는 적색, 염기성 pH에서는 자색을 나타냄 - phenol red는 스테로이드 호르몬(steroid hormone)과 유사하여 스테로이드 호르몬과 유사한 반응(steroid-like response)을 유발할 수 있음| - mammary tissue 배양시 이러한 스테로이드 호르몬 유사 반응(steroid-like response)를 방지하기 위해서 phenol red가 제거된 배지를 사용

8 기타 - nucleoside, pyruvate, lipid와 같은 성분들이 첨가될 수 있음 - 이 성분들은 혈청 농도가 낮아질 때 특히 필요한 성분들이며, 동물 세포의 클로닝을 도와줌

9 혈청 혈청(serum)은 여러 물질이 혼합된 아주 복잡한 복합 산물
세포 배양 실험에서 혈청은 기본 배양 배지에 주요한 첨가제로 사용 혈청은 매우 광범위한 고분자 단백질, 저분자 영양분, 그리고 불용성 물질들에 대한 운반체 등을 함유하고 있으며    호르몬과 부착 인자와 같은 세포의 in vitro 성장에 필요한 기타 성분들을 함유 배양 배지에 완충력을    MCDB media 등의 배지를 사용하여 혈청의 첨가 없이 세포의 성장을 유지할 수 있으며 대부분 이들 배지에 insulin, EGF제공하기도 하며 증식 환경에 있는 독성 성분에 부착 및 중화시키는 역할을 하기도 함.

10 혈청의 종류 우태혈청(Fetal Bovine Serum, FBS)과 우아혈청(Bovine Calf Serum, BCS)
투석우태혈청(dialyzed fetal bovine serum) 신생우아혈청(newborn calf serum, NCS) Iron supplemented bovine calf serum Charcoal stripped serum De-lipidated serum 사람 혈청(human serum)과 말혈청(horse serum, HS)

11 혈청의 구성 단백질(protein) 호르몬 각종 대사물질 억제인자 각종 무기물질