Contents 1. 실험 목적 2. 실험 배경 이론 3. 실험 원리 및 방법 4. 실험 결과 및 분석

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1 Contents 1. 실험 목적 2. 실험 배경 이론 3. 실험 원리 및 방법 4. 실험 결과 및 분석
5. 실험 오류 원인 분석 6. 참고문헌

2 1. 실험 목적 염색체 DNA 분리 및 정제 과정 이해 실험에서의 시약과 Enzyme작용 이해
PCR과 전기영동법에 대한 이해와 장치의 조작 방법 습득

3 2. 실험 배경 이론 DNA란 ? RNA란 ? Deoxyribonucleic acid 유전형질을 전달하는 유기화학적 분자구조
단위체: 뉴클레오티드 A-T, G-C의 상보적 결합 RNA란 ? Ribonucleic acid의 약자 세포내 단백질의 합성에 관여

4 2. 실험 배경 이론 _DNA 분자구조 Hydrogen bonding DNA 3차원구조 RNA3차원구조

5 3. 실험 원리 및 방법 PCR 이용한 DNA 증폭 전기 영동 통해 증폭 DNA 확인

6 3. 실험 원리 및 방법 피펫 사용에 주의를 기울인다. ->실험 결과에 직접적인 영향을 미칠 수 있기 때문.
실험 시 주의사항 피펫 사용에 주의를 기울인다. ->실험 결과에 직접적인 영향을 미칠 수 있기 때문. 특히, 추출과정에서 sample에 시약을 첨가할때 나 gel에 DNA를 주입할때 주의한다. 전기 영동시 EtBr은 발암물질이므로 주의한다. UV광학기 사용시 자외선을 눈으로 직접 쬐지 않도록 주의한다.

7 그람 양성/ 음성 세포벽 두껍다 세 균 세포벽 얇다 실험에서 사용한 세균 : 대장균 그람 양성균 (자주색) (분홍색)
그람 음성균 세포벽 두껍다 그람 양성균 (자주색) 그람 염색 세 균 실험에서 사용한 세균 세포벽 얇다 그람 음성균 (분홍색)

8 ●그람 양성균 ●색소나 약재에 대한 감수성이 높음 ●대사작용에 아미노산과 비타민을 필요로함
<바실러스균> <비브리오균> <포도상구균> ●색소나 약재에 대한 감수성이 높음 ●대사작용에 아미노산과 비타민을 필요로함

9 ●그람 음성균 ●색소에 대한 저항력이 강함 ●생존에 필요한 영양요구가 간단하여 단순한 구성의 배양액에서도 잘 자람
<대장균> <살모넬라균> <이질균> ●색소에 대한 저항력이 강함 ●생존에 필요한 영양요구가 간단하여 단순한 구성의 배양액에서도 잘 자람

10 원리: primer를 이용하여 원하는 DNA부분
3. 실험 원리 및 방법 PCR (Polymerase chain reaction)개요 원리: primer를 이용하여 원하는 DNA부분 을 짧은 시간 동안에 수십만 배로 증폭. 과정(3단계) 열변성 Primer의 단일사슬 결합 DNA합성 신장 반응

11 결합온도(Tm) = (4 × [G+C]) + (2 × [A+T])℃
3. 실험 원리 및 방법 DNA이중 나선 구조가 풀림 Primer가 주형 DNA에 상보적으로 결합 Taq 중합효소에 의해 DNA합성 시작 결합온도(Tm) = (4 × [G+C]) + (2 × [A+T])℃

12 3. 실험 원리 및 방법

13 3. 실험 원리 및 방법 PCR 이용한 DNA 증폭 이상의 3단계 과정을 통해 원하는 부분을 수만배 증폭
100 90 80 70 60 50 Denaturation 5분 온 도 ℃ Polymerization 5분 이상의 3단계 과정을 통해 원하는 부분을 수만배 증폭 annealing 1분 시간 (분)

14 3. 실험 원리 및 방법 에이즈 유발하는 HIV유전물질 감별할때 유전이 원인이 되는 질병을 진단할때 미라의 DNA를 감별할 때
PCR 이 쓰이는 분야 에이즈 유발하는 HIV유전물질 감별할때 유전이 원인이 되는 질병을 진단할때 미라의 DNA를 감별할 때 식품에 서식하는 병원성 미생물의 검출때 바이러스 감염의 초기 식별때 기타 범죄수사나 법의학, 의학, 유전공학, 분자생물학 등에도 쓰임.

15 3. 실험 원리 및 방법 _전기 영동 -> 증폭 DNA 확인 Agarose-gel을 만들고 EtBr 가함
홈에 ladder와 DNA(+dye) 삽입 전기 영동 실시 UV광학기 통해 확인 *EtBr(Etidium Bromide) : 평면구조, 발암물질 ->DNA의 이중나선 사이에 끼어들어, 자외선을 쬐면 DNA에서 형광이 나와 가시적으로 확인 가능하게 해줌 *EtBr : Etidium Bromide, 평면구조, 발암물질 ->DNA의 이중나선 사이에 끼어들어,UV 비추면 형광 발산

16 3. 실험 원리 및 방법 전기 영동법(Agarose-gel) 전기 영동에 필요한 세가지 성분
① 전하를 띤 입자(charged particle) ② 전장(electric field) ③ 이동이 일어날 수 있는 medium->Agarose gel DNA 분자 : 음전하, linear => 전기장에서 양극으로 이동

17 상대적인 분자량의 크기와 정량을 파악할 수 있다!
4. 실험 결과 및 분석 전기 영동으로 확인할 수 있는 것 상대적인 분자량의 크기와 정량을 파악할 수 있다! 띠가 나온 위치를 분석 띠의 선명도를 분석

18 4. 실험 결과 및 분석 glda mgsa

19 3. 실험 원리 및 방법 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들 1) DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동
①DNA 분자의 net electric charge가 증가 -> 이동속도 증가 ②DNA 분자(linear)와 Agarose-gel 과의 마찰력이 증가 -> 이동속도 감소 => ①<②이므로 이동속도 감소 2) Agarose-gel 농도가 높을수록 느리게 이동 3) 부하되는 전압이 높을수록 빠르게 이동 Agarose-gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들 ① DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동 ※ DNA분자의 크기 증가 DNA 분자의 net electric charge가 증가 -> 이동속도 증가 DNA 분자(linear)와 Agarose-gel 과의 마찰력이 증가 -> 이동속도 감소 =>이동속도 감소 효과 더 크다 ② Agarose-gel 농도가 높을수록 느리게 이동 (Agarose-gel은 농도가 높을수록 기공의 크기 작아짐) ③ 부하되는 전압이 높을수록 빠르게 이동

20 4. 실험 결과 및 분석 전기영동에서 분자량이 작을수록 이동도가 더 크다.
gldA보다 mgsA의 band가 더 아래쪽에 위치해 있다. mgsA의 분자량이 gldA보다 더 작다.

21 4. 실험 결과 및 분석 띠의 선명도 비교 Band가 더 밝다 DNA의 양이 많다.

22 4. 실험 결과 및 분석 □실험오류

23 5. 실험오류원인 분석 오류 원인 순수한 agarose 가 아닐 가능성. Taq 효소나 Primer 가 잘못되었을 가능성
젤의 홈 안으로 들어 가는 액체의 부족 피펫 사용에서 실수 하였을 가능성

24 5. 참고문헌 Biochemistry, Campbell Farrell, Fifth edition, p215~326
Gene cloning, T.A Brown 2001 p28~51 /biotechcyberlab 유전공학, Watson, 탐구당, 1994, p87~91 Gene cloning, T.A Brown, 2001, p185~186 분자생물학 박상대외 6명 로욜라도서관 w 363 K

25 Thank you!!