액체크로마토그래피 (HPLC) 대한 이해 ㈜ 휴텍스.

Presentation on theme: "액체크로마토그래피 (HPLC) 대한 이해 ㈜ 휴텍스."— Presentation transcript:

1 액체크로마토그래피 (HPLC) 대한 이해 ㈜ 휴텍스

2 Contents HPLC 의 기본원리 Chromatography 의 분류 Liquid Chromatography 의 분리방법
Solvent PUMP Injecter Column Detector Prep-LC 의 응용 Prep-LC 의 구성 Scale Up Analytical & Prep 의 비교 Auto Prep

3 HPLC 의 기본원리

4 Chromatography 의 분류 Ion Exchange Gel Filteration Gel Permeation
Gas Chromatography Liquid Chromato. Supherical Fluide Ch. Adsorption Partition Size Exclusion Ion Exchange Gel Filteration Gel Permeation

5 Chromatography 분리방법의 종류
Adsorption [흡착] Chromatography Partition [분배] Chromatography Size Exclusion [크기배제] Chromatography Ion Exchange [이온교환] Chromatography

6 Adsorption [흡착] Chromatography
가장 오래된 Chromatography Type 고정상으로 사용되는 고체 흡착체의 표면과 이동상으로 사용되는 액체에 대한 친화력의 차이로 분리가 이루어진다.

7 Partition [분배] Chromatography
고정상으로 사용되는 고체 지지체의 표면 액상과 이동상으로 사용되는 액체에 대한 분배력의 차이에 의해서 분리가 이루어 집니다. 정상법은 정지상이 극성이고 이동상은 비극성 용매이며, 반대로 역상법은 정지상은 비극성이고 이동상은 극성이다. c Detector Response b a Retention Time (min)

8 Size Exclusion [크기배제] Chromatography
크기배제크로마토그래피는 시료의 물리적 특성(크기)에 따른 분리이다. 분자량이 큰 분자가 먼저 빠져나오고, 분자량이 작은 분자는 나중에 빠져 나오게 된다. 충진제의 세공의 크기에 따라서 분리 할수 있는 분자량의 범위가 변할수 있다.

9 Ion Exchange [이온교환] Chromatography
이온성 화합물 및 무기이온의 분리에 사용 음이온 교환체는 용질의 음이온과 인력이 상호 작용하며 양이온 교환체는 용질의 양이온과 상호작용한다. 시료의 분리는 pH , 이온세기 , 이동상에 포함된 이온 종류의 영향을 받는다. 이동상으로 완충액 사용 . - - + + - -

10 Hugh Variety of Selectivity

11 HPLC 의 분류 Molecular Weight Increasing Polarity Water-Insoluble
Water-Soluble NonPolar Ioic 102 Partition Reversed Phase Partition Adsorption Ion Exchange Normal Partition Molecular Weight 103 104 Exclusion Gel Permeation Gel Filtration 105 106

12 시료의 특성에 따라 정량, 정성 및 분취 가 가능 하다.
HPLC로 할 수 있는 일은 무엇인가요? 시료의 특성에 따라 정량, 정성 및 분취 가 가능 하다. 정량은 크로마토그램의 Peak 면적을 이용하여 가능 하다. 정성은 그로마토그램의 Peak Retention time을 통하여 가능하다. 많은 량의 시료를 고 순도의 단일 물질의 분리에도 많이 사용되며, 각각 활용 방법에 따라 이름이 다르다. 분석용 : Analytical HPLC 분취용 : Preparative HPLC 라고 구분한다 . Voltage 시료가 분리되어 나오는 시간(retention time =RT)

13 HPLC 의 기본구성

14 HPLC의 모식도

15 HPLC의 각 부분의 역할 1. 용매 이송 장치 ( Eluent Delivery Pump)
- 시료 이송 및 분리를 위한 Solvent 를 이송 하는 역할 2. 시료 주입 장치 ( Injector) - 시료를 분리 관으로 보낼 수 있도록 하는 역할 3. 분리 관 ( Separation Column) - 혼합된 시료들을 단일 물질들로 분리 하는 역할 4. 검출기 ( Sample Detector) - 분리된 단일 시료들의 존재 여부를 확인하는 역할 5. 데이터 수집장치(Data system ) - 검출기에서 확인된 시료를 전기적인 신호로 전환하여 크로마토그램을 표시하는 역할