4.Mendelian segregation

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SUBJECT 7.DNA isolation 특성화학부 생명공학과 식물분자생물학 실험실

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Objective Plasmid DNA isolation Lysozyme boiling mini-prep DNA quantification 특성화학부 생명공학과 식물분자생물학 실험실

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Solutions STET 8% sucrose 5% Triton X-100 50 mM Tris-HCl, pH 8.0 50 mM EDTA, pH 8.0 DW  Lysozyme Solution (10 mg/ml) 150 mg lysozyme 3.75 ml 1M Tris-HCl, pH ml H2O store at -20°C 특성화학부 생명공학과 식물분자생물학 실험실

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DNA isolation ① Overnight 배양한 세포배양액을 1.5ml Cetrifuge tube에 옮기고, centrifuge에서 3000rpm으로 3분 동안 돌려준다. ② 상층액을 버리고, tube당 300 ul의 STET 용액과 20 ul Lysozyme(0.5mg/ml)을 넣어 vortexing 등으로 잘 섞는다. ③ tube를 100℃ heat block이나 water bath 등에서 2분간 중탕한다. ④ 중탕한 tube를 13000rpm에서 10분간 centrifuge한다. ⑤ pellet이 따라나오지 않도록 주의하여 상층액만 새 tube로 옮긴다. ⑥ 옮긴 상층액과 같은 양의 isopropanol을 넣고, inverting 후 -20℃에서 10분간 놓아둔다. ⑦ 13000rpm에서 10분간 centrifuge하고, 상층액을 버린다. ⑧ 70% EtOH을 넣고 washing하고, centrifuge 후 EtOH만 다시 따라버린다. ⑨ 60도 dry oven 에 넣어 여분의 EtOH 을 제거하고, 건조된 pellet 에 ddH2O 를50ul 넣고 녹인다. 특성화학부 생명공학과 식물분자생물학 실험실

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DNA Quantification ① 측정하고자 하는 DNA 용액을 일부를 채취하여 원하는 농도로 희석한다. ② 희석한 DNA용액을 UV Spectrophotometer에서 260nm에서 absorbance를 측정한다. ③ 측정한 absorbance를 이용 DNA농도와 양을 계산한다. UV Absorbance x DNA concentration factor x dilution factor = ? ng/ul Ex) x 50 x 100 = 4825ng/ul = 4.825ug/ul 4.825ug/ul x 40ul = 193ug 특성화학부 생명공학과 식물분자생물학 실험실

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Result Problem 이번 miniPrep과정에서 Boiling하는 이유는? STET 와 lysozyme 이 cell 에서 plasmid DNA 를 분리하는 원리는? 3. UV를 이용한 DNA 정량과 RNA정량 방법의 차이와 그 이유는? ☺ 문제만 ‘달랑’ 풀지 말고 고찰도 간단히 쓰세요☺ Sample # Concentration Quantity 1 2 특성화학부 생명공학과 식물분자생물학 실험실

7 9. Anatomy of mouse 다음주 예비레포트 ● Restriction enzyme digestion
- Electrophoresis의 원리 특성화학부 생명공학과 식물분자생물학 실험실

8 특성화학부 생명공학과 식물분자생물학 실험실
조 White (ng/ul) Blue (ng/ul) 1 2 953.29 3 335.30 46.16 4 550.04 5 768.34 6 7 8 9 426.87 특성화학부 생명공학과 식물분자생물학 실험실