화학적 고정 관류고정(perfusion fixation) 고정의 형태.

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1 화학적 고정 관류고정(perfusion fixation) 고정의 형태

2 고정의 형태 화학적 고정 주입고정 (infusion fixation) 폐와 같이 공기가 들어 있는 장기를 고정
커다란 병변 관찰에는 적합하나 기도 내의 창출성 변화는 관찰할 수 없는 것이 단점 증기고정 (vapor fixation) 신선한 조직 속의 가용성 물질이 물 또는 유기용매 등에 접촉하기 전에 그것을 불용성 산물로 변화시켜 존재위치가 이동되지 않도록 고정하기 위해 휘발성 고정제를 증기 형태로 조직에 작용시켜 고정하는 방법 고정의 형태

3 고정의 형태 화학적 고정 증기고정 (vapor fixation)
formaldehyde, glutaraldehyde, acrolein, osmic acid, ethanol 등 Formaldehyde와 paraformaldehyde를 50~80℃ 에서 고정, acrolein은 50~60℃, 오스뮴산은 37℃, 에탄올은 50~60℃에서 2~5시간 고정의 형태

4 고정의 형태 물리적 고정 약품을 사용하지 않고 단백질을 불활성화 시키는 방식 가열법 자가융해를 촉진시키기 때문에 사용되지 않음
자가융해를 촉진시키기 때문에 사용되지 않음 동결법 일시적인 단백질의 활성을 정지시켜 조직의 사후변성을 방지하고, 포매효과는 물론 조직을 가능한 생체 상태에 가장 가깝게 보존하는 효과 고정의 형태

5 고정의 형태 물리적 고정 극초단파법 (microwave fixation) 고정액이 조직이나 세포에 신속히 침투
면역항원성의 유지에 좋아 면역조직화학 염색에 좋다. 수술 시 신속표본 제작에도 활용 한번에 커다란 조직을 단시간에 고정 조직의 등전점의 변화로 인해 eosin이 과염되며, 표준화하기가 쉽지 않다 고정의 형태

6 고정에 영향을 미치는 요소 Penetration(고정액의 침투율)
열에 의해 영향을 미치나 고정액의 농도에 의해서는 영향을 미치지 않는다. Size(조직의 크기(두께)) 광학현미경용 조직의 두께는 4mm 이하, 전자현미경용 조직의 두께는 0.5~1mm 또는 그 이하 Temperature(고정 시 온도) 고정액에서 조직의 morphology에 영향 일반 조직검체의 경우 실온(18~24℃)에서 고정, 전자현미경 검사와 조직화학적 검사, 조직내 효소의 증명 시 생체와 거의 흡사한 상태를 유지하기 위해 4℃에서 고정 고정에 영향을 미치는 요소

7 Improper fixation –liver(autolysis)
Improper fixation -spleen Improper fixation –liver(autolysis) Hematoxylin & eosin staining

8 고정에 영향을 미치는 요소 Time(고정 시간) 고정액의 pH Osmolality(고정액의 삼투압)
짧으면 고정이 불충분하여 고정 이후 과정에서 조직세포 구조가 손상 또는 파괴되고 조직화학적 반응도 약화 고정액의 pH 광학현미경에서는 중요하지 않다. 전자현미경에서는 매우 중요 조직은 일반적으로 pH6~8의 중성 상태에서 가장 안전하게 고정 Osmolality(고정액의 삼투압) 조직의 평균 삼투압은 340 mOsm light microscopic studies에서는 중요치 않다 고정에 영향을 미치는 요소

9 고정의 실제 고정 용기 고정액의 양 고정의 촉진 고정시간 입구가 넓은 용기
작은 조직편의 고정에는 눈에 잘 띠도록 투명한 용기 사용 고정액의 양 조직 용적의 10~30배가 되도록 충분하게 고정의 촉진 고정액의 침투를 빠르게 하기 위해 진탕, 감압하에서 고정하면 고정시간이 다소 단축 고정시간 Formalin 고정의 경우 작은 생검 검체 는 수 시간에서 12시간, 두께가 5mm 이상 되는 조직괴는 24시간 정도 고정 고정의 실제

10 고정의 실제 조직편의 취급 고정의 완료 고정 후 처리 고정 후 조직의 용적 변화 조직편의 두께는 보통 5mm 이하
조직의 색상 및 경도의 변화 고정 후 처리 조포르말린은 고정 후 보존액의 기능도 있기 때문에 고정이 끝난 조직을 당분간 그대로 보존해도 좋다 고정 후 조직의 용적 변화 조직과정을 거쳐 paraffin으로 포매할 때 본래 용적의 약 33%가 위축 고정의 실제

11 B A A와 B는 어떤 고정액을 담아 놓은 것이다. 색상을 보고 맞게 연결된 것을 고르시오.
1. A-Carnoy, B-Zenker A-Bouin, B-Zenker 3. A-Bouin, B-Carnoy A-Muller, B-Bouin

12 위절제 검체이다. 육안검사에 앞서 고정은 어떻게 하는가?
1. 대만부를 절개하여 판에 펴서 고정 2. 소만부를 절개하여 판에 펴서 고정 3. 전체 검체를 일단 고정한 후 대만부를 절개해 줌 4. 대만부와 소만부 사이를 절개한 후 바로 고정액에 담근다.

13 고정의 촉진을 위해 microwave oven에서 고정하고 있다. 다음 고정제 중 침투속도가 가장 느린 것은?
1. acetic acid ethanol 3. formalin glutaraldehyde

14 Zenker 용액에 고정된 조직의 염색표본이다. 왼쪽은 HE염색이고 오른쪽은 편광현미경 사진이다. 제거 시 사용되는 시약은 ?
가. Lugol’s iodine 나. hydrogen peroxide 다. sodium thiosulfate 라. potassium permanganate 1. 가, 나, 다 가, 다 3. 나,라 가, 나, 다, 라

15 전자현미경 조직 고정을 위해 조직을 세절하고 있다. 고정에 사용되는 2차 고정액은?
osmium tetroxide ethanol Glutaraldehyde picric acid

16 Section 1-4 수세 Washing

17 수세 수세의 목적 고정액의 주성분과 formalin pigment(색소)를 제거
고정액에 의해 형성된 인공산물 (조직내 산 또는 알칼리 성분)을 제거 고정 후 조직 내에 남아 있는 고정액은 조직과정을 방해하는데 이를 제거하기 위해서는 흐르는 물에 충분히 수세 Alcohol액에 고정한 조직은 수세 할 필요가 없다. 수세

18 수세의 과정 조직이나 고유번호가 적힌 인식레이블의 유실을 방지하기 위해서 tissue capsuling을 한 후 금속바구니에 넣어 흐르는 물에 방치, 또는 유리병(cup)이나, beaker 등의 입이 넓은 용기의 입을 거즈로 싸서 흐르는 물을 통과 tissue capsule의 구멍을 빠져 나갈 만한 작은 조직(내시경 조직)은 거즈로 싼 후 tissue capsule에 넣어야 안전 시간은 12~24시간이나 10% 인산염 완충 중성 formalin을 사용하는 검사실에서 임상환자를 대상으로 할 때는 진단을 빨리 하기 위해 보통 2~4시간 정도 수세