방사화학 및 방사성 약품학 제 7 장 방사성물질의 의학.약학에서의 응용.

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1 방사화학 및 방사성 약품학 제 7 장 방사성물질의 의학.약학에서의 응용

2 생체성분이나 투여된 약물 등의 생체 내에서의 작용이나 변화등을
조사하는 것이 중요 생물체와 같은 복잡한 물질계 중에서는 특정물질의 동태나 변화를 정 확히 파악 하는 것이 중요 종래의 분석법 x 방사성핵종으로 표지된 물질을 추적자 (tracer) 로 이용 → 방출되는 방사선을 단서로 추적 방사성표지화합물의 합성 및 성질, 이들의 대사, 흡수, 분포측정 및 유전자 재결합의 응용, 정량법

3 표지 화합물의 합성과 성질 1. 표지핵종과 표지위치 표지화합물 (labeled compound)
- 화합물의 성분 원소를 그 방사성 동위체로 치환한 것 (ex) 3H, 16C, 32P 35S - 표지에 사용하는 핵종을 표지하고자 하는 화합물의 구성원소의 동위체 중에서 선정 (ex) 유기화합물 – 3H, 14C 핵종 선택시 – 방사선종류, 에너지, 반감기 등을 고려 - 목적에 맞는 바람직한 성질을 가진 핵종 결정

4 표지위치 Uniform labeling [U] - 특정 위치에만 표지 된 화합물 외에 그 원소의 모든 위치에 균일하게 표 지되 는 경우 General labeling [G] - 균일 하지 않지만 모든 위치에 방사성 핵종이 포함되어 있는 경우

5 2. 표지화합물의 합성 - 방사성 핵종으로 인한 수율을 높일 수 있는 반응계를 선택 - 짧은 반감기 핵종 – 신속한 합성반응
- 화학 수율이 최고로 되기 이전에 방사능 수율이 최대로 된 시점에서 반 응을 중지 1. 화학합성 2. 동위체 교환 3. 생합성 4. 반조표지법

6 생합성 - 원료로 되는 간단한 화학형의 방사성 화합물로 부터 생물, 세포 또는
효소등을 이용하여 생화학반응을 이용하여 목적으로 하는 표지 화합 물을 얻는 방법, - 광학 활성체를 얻을 수 있음 (ex) 14C 표지당류나 아미노산, 항생물질, 알카로이드, 35S 75Se 표지 아미노산

7 반조표지법 (recoil labeling method)
- 핵반응에 의해 생긴 순간의 방사성 원자는 큰 반조에너지를 갖기 때문 에 유기화합물의 분자와 충돌하여 그 결합을 절단하고 그곳에서 생긴 유 리기와 여러 화학반응을 일으키는 것을 이용 - 복잡한 구조를 갖는 화합물에서도 표지 할수 있다. - 비방사능이 높은 것을 얻는 것이 어려움 - 혼합물이 생성하여 이들을 분리정제하기 어려움

8 열 중성자 혼합물 (니트로벤젠 + 취화에틸) 81Br(n, r)82Br ortho, para 위치에 82 Br 가 부가한 니트로벤젠

9 3H 표지 화합물 - 동위체 교환법 - Wilzbach 법
- 표지하고자 하는 유기화합물과 tritium 기체를 일정기간 접촉 시켜 만듬 높은 비상사능을 가진 제거하기 곤란한 불순물을 함유 특정 위치에 표지 할 수 없다. (치환 가능한 위치에서 불규칙적으로 발생) 적당한 촉매 사용

10 - 할로겐 화합물의 할로겐 원자와 tritium 기체와 접촉 교환법
- 접촉동위체교환반응 RCH2COOK RCH3HCOOK KOH 3HHO - 할로겐 화합물의 할로겐 원자와 tritium 기체와 접촉 교환법 - 불포화 화합물의 tritium 기체에 의한 접촉 환원법 RCH = CHR’ RCH3H – CH3HR’ 3H2

11 14C 표지 화합물 - 기본 출발 물질 : Ba14CO3 - 14CO2에 의하여 각종 표지화합물의 유도
Grignard 시약에 14CO2를 도입 → 가수분해 → 14C표지 카르복실산 합성 생합성법 - 수초류나 고등식물에 14CO2 를 도입 균일한 표지 와 천연의 입체배위를 갖는 14C 표지화합물 수득

12 125I 표지화합물 - 할로겐표지화합물 중 의약학 영역에서 중요한 것 은 옥소 (125I,131I) 화 합물
- 휘발성, 체내 흡수시 갑상선에 축적되어 영구적 손상 발생 1) 효소법 - 미량의 과산화수소로 Na125I 를 산화할 때에 촉매로서 lactoperoxydase 를 이용 하는 방법 - 강한 산화제나 환원제를 사용하지 않기 때문에 이러한 시약의 단백질의 생리 활성 의 영향을 무시 할 수 있다.

13 2) Chloramine T method - 살균제로 사용되고 있는 T (p – CH3C6H4SO2NNaCl)를 산화제로서 이용 하는 방법 - 단백질과 방사성옥소화합물(Na125I, Na131I)을 완충용액중에 혼합 - Na125I 의 산화 125I tyrosine 잔기의 페놀의 수산기에 ortho, histidine imidazole 고리등에 부가 단백질 표지

14 3) 간접표지법 - 방사성옥소로 표지한 시약과 단백질과의 반응에 의하여 옥소표지화합물 을 얻는 방법
- 단백질이 산화제나 환원제 및 높은 비 방사능의 옥소에 직접 접촉되지 않기 때 문에 이에 기인하는 화학적 변성을 최소화 함 - Tyrosine 잔기가 없는 경우에도 표지할 수 있음 Bolton and Hunter 시약 - polypeptid의 lysine 잔기의 옆 사슬의 아미노기 또는 N 말단 아미노기 등과 반 응 하여 표지

15 32P 및 35S 표지 화합물 32P 표지화합물 - 출발물질 – H332PO4
[α – 32P] NTP 합성법 (화학반응과 효소조합) NTP의 ribose의 2’,3’ 위치의 수산기에 인산이 도입되지 않도록 보호기를 들여온 후 5’OH 기를 인산화하여 보호기를 제거한 후 효소를 사용하여 NTP 합성

16 - 35S, H235S,NaH35S,K35SCN,C35S2, 35S thiourea 등을 사용 한 합성반응
- 출발물질 : H235SO4 - 35S, H235S,NaH35S,K35SCN,C35S2, 35S thiourea 등을 사용 한 합성반응 - 황을 함유하는 아미노산 : L-[35S] methionine, L-[35S]cystine - 35S 황산염을 함유하는 배양액 중에서 효모균이나 대장균을 배양하여 얻어지는 35S 함유 단백질을 가수분해에 의해 합성

17 - 목적으로 하는 방사성 핵종의 방사능이 전 방사능의 몇 %를 차지
3. 표지화합물의 순도와 안전성 1) 방사성 핵종 순도 - 목적으로 하는 방사성 핵종의 방사능이 전 방사능의 몇 %를 차지 하는가를 나타내는 순도 방사성핵종순도 = 전 방사능 방사능 핵종의 방사능 X 100 순도검정 - β방사체 : 반감기의 측정, 질량분석법, 각종 크로마토 그래피법 - r방사체 : 반도체 검출기

18 2) 방사화학적 순도 - 어떤 방사성 핵종이 몇개의 다른 화학형으로 공존할 경우 특정 화학 형에 의한 방사능의 그 핵종이 전 방사능에 대한 비율 방사화학적 순도(%) = 그 핵종의 전 방사능 어느 특정 화합물의 방사능 X 100 순도검정 – 크로마토 그래피

19 3) 표지 화합물의 안전성과 보존 - 표지화합물 은 보존 중 자체방사선에 의해 자기분해가 일어남 자기분해
방사선의 직접작용에 의한 분해(일차분해) 시료 중 이온, 라디칼등 활성종에 의한 분해(2차분해) 자기분해 화합물 근처에 흡수되는 에너지 크기에 의존 - 비정이 짧은 저에너지 β- 핵종으로 표지된 화합물, 자기분해 되기 쉬움 비방사능이 높은 것일 수록 분해되기 쉽다. 표지화합물이 화학적 성질, 물리적 상태 등 영향

20 표지 화합물의 보존상 주의 사항 보존온도 – 저온 (예외) 3H – 동결 건조시 분해속도 빠름 → 용질분자가 Cluster 형성 2. 용존산소를 제거 (불활성 기체로 봉입) 라디칼 스카벤져(radical scavenger)를 첨가 4. 시료에 흡수되는 방사선 에너지 감소 - 라디칼등의 활성종과 분자와의 결합기회를 적게 하는 분산보존이 유효

21 - 수용액 – 물의 방사선 분해에 의해 OH ., H2O2 등이 생성
(1) 고체 시료 – 표면적 넓게 (2) 액체시료 – 용액의 농도 묽게 - 수용액 – 물의 방사선 분해에 의해 OH ., H2O2 등이 생성 - 비수용매계의 용액 사용(벤젠, 톨루엔) (3) 비방사능을 낮춘다(비방사성 담체로 희석)

22 추적자 실험에서의 응용 1. 실험계획과 문제점 추적자 (tracer)
- 물질의 이동이나 변화의 과정을 추적하기 위하여 이용한 표지물질 조건 : 비표지물질과 표지물질과의 사이에 화학적, 생물학적 내지는 물리적 작용에 차이가 없어야한다 방사성 동위체 추적자 의 특징 1. 방사성 동위체 추적자의 거동은 방사선을 이용하여 쉽게 추적할 수 있다. 2. 측정 감도가 높다. 3. Autoradiography 를 이용할 수 있다. 4. 방사성 동위체 추적자를 사용함 으로서 새로운 대사산물을 해명할 경우가 있다.

23 5. 약물 등 약효가 나타나지 않는 양으로 동물 실험 등을 시행하기 때문에
투여한 약물에 의해 생체에 영향을 주지 않는 실험을 할 수 있다. 6. 실험동물에 투여된 표지화합물은 그 투여량에 따라서는 그 방사능 자 체의 영향이 나타날 경우도 있다.

24 실험계획과 문제점 1. 표지화합물의 선택 2. 방사선 효과 3. 비방사능 4. 동위체 효과
- 동위체의 차이에 의해 나타나는 효과 - (ex) 수소,3중수소,중수소 등을 치환한 분자가 화학반응을 할 때 반응속도 의 변화가발생

25 2. 약학에서의 응용 1) 유기산 에스테르의 가수분해반응
2) Friedel – Crafts 반응에 의한 알킬화 반응시 일어나는 전이반응의 확인 3) 무기화학에서의 응용 – 금속산화물의 산소의 역활 4) 생화학에서의 응용 – Lysine 중간대사물질로서의 글루타르산의 추정 5) 식물생화학에서의 응용 – 엽록체의 물질대사 6) 생약학에서의 응용 – 알칼로이드의 생합성

26 방사화학 분석 원자핵 반응에 의하여 생성하는 방사성핵종의 방사능에 의거한 원소분석법 방사성 핵종 방사선 방출
열중성자, 속 중성자, 고에너지 광자 고 에너지 하전입자(양자, α입자), 시료 핵반응 방사성 핵종 방사선 방출 반감기를 거치며 붕괴 반감기, 방사선 에너지 측정 → 원소의 정성분석 방사선의 강도 측정 → 원소의 정량분석 투과성 우수. 핵반응을 일으키기 쉬움, 반응에 의한 생성핵종 r선 방출하는 것 많음 ※ 정량,정성 분석 → r 선 이용 조사입자 – 열중성자 이용

27 응용의 예 - 사람의 암조직 및 정상조직 - 당뇨병 환자 및 정상인의 뇨 - 카네미유증 - 아급성척수시신경증 - 매연속 피부염 유발물질

28 동위체 희석 분석 - 화학성질이 유사한 물질의 혼합물 중 특정 물질을 정량하기 위해 목적 물질을 순수, 정량적으로 분리
동위체 희석분석 (isotope dilution analysis) - 정량적인 분리를 필요로 하지 않을 경우 표지물질을 표적으로 하여 표지물질의 비표지물질에 의한 희석의 정도의 변화를 검토함으로써 시료중의 목적물을 정량하는 방법

29 1. 직접 동위체 희석법 - 시료중의 목적물질(A) 의 미지량(WX)을 정량 할 경우 여기에 목적물질과 화학적으로 동일한 표지물질(*A 비방사능 S1은 이미 알고 있음)을 일정량(W1) 첨가하여 균일하게 혼합한 후 혼합물(A+*A)로 부터 그 일부를 순수하게 분리하여 비방사능(S2)을 구함 S1W1 = S2(W1 + WX) WX = W1 x [(S1/S2) -1]

30 2. 역동위체 희석법 - 시료 중의 표지물질을 정량할 때 이용
- 시료중의 표지물질 *A 의 양WX을 구하기 위해 그 비표지물질 A의 일정 량W1을 시료로 가하여 균일하게 혼합한 후 혼합물(*A+A)을 순수하게 분리하고 그 비방사능(S1)을 측정. Sx : A의 방사능 SXWX= S1(WX + W1) WX = W1 x [(S1/(SX –S1)]

31 3. 이중 희석법 - 동일 양의 시료를 채취하여 그곳에 다른 양의 비방사성물질을 가하는 방법
- 다른양의 시료를 채취하여 그곳에 동일양의 비방사성물질을 가하는 방법 - 시료를 분할하지 않고 비방사성물질을 가하는 방법

32 4. 동위원소 유도체법 - 시료에 방사성 시약을 가하여 정량하고자 하는 물질의 표지유도체를 정
량적으로 만들어 이것을 이용하여 정량목적물을 동위체희석법에 의하여 정량하는것

33 동위원소 유도체를 그와 동일한 화학형의 비표지물질로 희석하는 방법
동위원소 유도체 희석법 동위원소 유도체를 그와 동일한 화학형의 비표지물질로 희석하는 방법 *R 방사성 시약 Y1R(비방사성 유도체 ) Y1*R + Y1R의 일부분을 분리 방사능 구함 Y1*R, Y2*R, Y3*R의 유도체 형성 WX = W1 x [(S1/(SX –S1)] 화학적성질이 유사한 물질 Y1,Y2,Y3.. 혼합물을 함유하는 시료 생성한 Y1*R의양 WX, 첨가한 Y1R의 양 W1, Y1*R의 비방사능 SX, Y1*R+Y1R의 비방사능 S1

34 - 정량목적물을 표지하기 위하여 방사성 시약 이외에 분리정제시 회수
이중 동위원소 유도체법 - 정량목적물을 표지하기 위하여 방사성 시약 이외에 분리정제시 회수 율을 구하기 위하여 별도의 방사성핵종으로 표지된 물질을 사용 1) 표지화합물법 - 정량목적물과 동일한 화학형의 표지화합물을 사용 Y1의 양을 정량 *R (제1방사성 핵종으로 표지된 방사성 시약) *Y1(표지화합물) Y1*R + *Y1*R Y1 + *Y1 분리 방사능 측정 화학적성질이 유사한 물질 Y1,Y2,Y3.. 혼합물을 함유하는 시료

35 표지유도체법 Y1**R (정량목적물의 유도체) *R (방사성 시약) Y1*R, Y2*R, Y3*R Y1*R + Y1**R 분리 각각의 방사능 측정

36 5. 부족당량 희석법 - 방사성표지물질과 그 비표지물질과의 혼합물로 부터 그들과 결합하는 일
정한 부족량의 시약을 사용하여 일정량의 정량목적물을 분리하면 분리된 정량목적물 중에 존재하는 방사성표지물질의 양이 혼합물 중에 존재하여 있던 비표지물질의 양에 대응하여 감소하는 것에 근거 일정한 부족한 시약 방사성표지물질을 포함하는 용액 동일한 표지물질 시료에 첨가한 용액 (미지의 수용액) WX = W1 x [(A1/A2) -1] W1:방사성 표지물질(이미알고 있음) WX:정량 목적물질의 양, A1,A2: 각각의 방사능

37 Radioassay 1. 방사면역 측정 (radioimmunoassy) 1) 원리
항체에 대한 비표지항원과 표지항원과의 사이에서 일어나는 경합반응 을 이용 Ag* + Ab Ag* - Ab Ag (비표지항원) Ag – Ab 표지항원 항체 표지항원 - 항체결합체 + 비표지항원 - 항체결합체

38 2) 방사면역측정의 구성요소와 측정법 항혈청 - RIA 등의 면역측정법에서는 일반적으로 단순분리, 순수화한 항체 대신에 그 항체 를 포함하는 혈청 - 조건 : 측정대상물 (항원) 에 대하여 친화성 및 특이성이 높아야 함 - 토끼, rat 및 산양 등의 동물에 항원을 주사해 만듬 - 면역동물의 종, 개체 및 면역방법 등 의 요인으로 항혈청 중에 포함되는 항체의 종 류나 비율이 다르며 반응성도 다양

39 항원 기능 - 항체의 생성을 촉진하는 성질 (면역원성) - 생성된 항체에 결합하여 항원항체결합체 형성하는 성질(면역반응성)
분자량이 큰 단백질, 펩티드류 – 2가지 기능 분자량이 작은 펩티드,스테로이드, 약물…. - 단독항체생산불가 담체 단백질(알부민, 글로부린…) 과 화학적 결합 분자량↑ → 면역 항원이 높아지며 항체 생성 소분자 물질 Hapten

40 알부민, 글로블린 분자 중의 활성기 (lysine 잔기 중의 유리아미노기) hapten 분자 중 아미노기 or 카르보니기 등
Hapten – carrier 단백질 복합체 알부민, 글로블린 분자 중의 활성기 (lysine 잔기 중의 유리아미노기) + hapten 분자 중 아미노기 or 카르보니기 등 Coupling 시약 Hapten – carrier 단백질 복합체

41 표지항원 RIA 사용 되는 일반적 표지화합물 : 3H, 125I 125I - 요도드가 반응성 풍부, 표지화 용이
- 반감기(60.2일) 적당, 높은 비방사능을 얻기 쉬움 - 자기분해가 적음 합성 - 분자내 tyrosine, histidine 을 함유하는 단백질 및 펩티드 등 – 직접 125I 로 표지 가능 - 스테로이드호르몬,약물등의 hapten – 작용기를 도입

42 3H - 저에너지 β방사체 – 액체씬틸레이션 계수기 사용 - 씬틸레이터의 폐기처리 복잡. 비방사능을 얻기 어려움 - 반감기 길고 화학적으로 안정

43 결합형과 유리형의 분리 항원항체의 결합체 (B), 항체가 결합하지 않은 유리의 항원 부분 (F)
이중항체법 (double antibody method) - 항원 + 제1항체 → 항원 - 제1항체 결합체 + 제2항체 → 항원 –제1항체-제2항체 결합체 - 원심분리 후 B또는 상층의 F 부분의 방사능 측정

44 덱스트란 탄말법 (dextran coated charchol method)
저분자 스테로이 및 약물 의 경우 항원항체 반응액 활성탄으로 처리 (덱스트란으로 처리) 유리항원 만 활성탄에 흡착 Polyethylene glycol - 농도, 반응액의 이온강도 등을 적당히 선정, 항체의 r-globulin 을 침 전시켜 B, F분리

45 고상법 (solid phase method)
- Polystylene 으로 만든 tube 에 항체를 흡착 - 세팔로즈나 폴리스틸렌 + 항체 → 불용화항체 사용 - B, F 분리가 간편, 다량의 시료 처리에 적당

46 측정조작 RIA에 의하여 실제 시료를 취급할 경우 1. 정해진 조작에 의해 항원항체반응 2. B, F 분리
4. 표준물질을 사용하여 작성한 표줁 곡선에서 목적으로 하는 물질의 양 구 함

47 2. 면역방사정량 측정법 (immunoradiometric assy, IRMA)
- 항원,항체반응을 기본원리 - 표지항체를 사용 - RIA 보다 감도 높음 결합형 항체와 유리형 항체 분리 방법 - 면역흡착제법 - 2부위법

48 면역흡착제법 항원 방사성표지항체 흡착제로 결합시킨 항원 원심분리 상층, 항체의 방사능 측정 흡착제 침전

49 Sandwhich 법 항원 고상상 항체 다른 항원 결정기를 표지하는 방사성 항체 고상상 항원과 반응한 표지항체의 방사능 측정

50 3. 방사수용체 측정 (radioreceptor assay, RRA)
호르몬,약물등의 수용체를 특이적 결합단백으로서 이용 원리 생리활성물질(S), 방사성표지화합물(S*), S에 대한 수용체(R) . 사이에 경합 반응 S* R S*R + S SR S 의농도를 단계적 변화 → 결합체(B), 유리부분(F)를 분리 → 방사활성측정 → 표준곡선 작성

51 특징과 응용 호르몬을 함유한 생리활성물질의 혈중 존재양식이나 작용기전의 연구면 에서 우수한 특징 수용체 분석법(수용체 부위의 발견, 결합정수, 수용체 수의 산출 및 결합특이성의 분석)으 로서 우수 - RIA 나Bioassay 와 조합함으로서 호르몬의 구조와 기능의 관계를 연구 하는 수단으로 유용

52 4. 기타 측정계 경합단백결합측정법(competitive protein binding assay, CPBA)
- 측정대상물질 및 방사성표지화합물과 이들과 특이적으로 반응하는 결합 단백질과의 사이의 경합반응을 이용하여 B,F 분리 후 방사선 측정 - 저 농도의 시료측정에 부적합 효소면역측정법 (enzyme immunoassay) - 측정이 용이, 감도가 높아 실용성이 높음 - 방사성물질을 취급하지 않아 장해방지 규제를 받지 않음

53 유전자 재결합에서의 응용 유전자 재결합 (gene recombination)
- 효소를 이용하여 시험관 내에서 다른 종류의 유전자 DNA를 임으로 결합 시켜 운반체와 함께 세포속으로 이동하는 실험 및 이와 같은 재결 합 물질을 이용하는 실험 1. 염기배열의 결정법 2. 클론의 선택

54 Autoradiography (ARG)
- 방사선의 사진효과를 이용하여 표본 중의 방사성동위원소의 위치 및 방사능농도를 표본과 사진유제를 밀착 시킴으로서 직접 유제막에 기 록하는 방법 특징 - 측정결과가 반영구적으로 남는다. - 검출능력이 현저히 높다. - 표본과 대조한 방사능의 분포를 얻을 수 있다. - 항상 방사능을 측정할 수 있는 상태에 있으며 입자선의 행동을 구체적 으로 관찰할 수 있다.

55 단점 - 현상이라는 복잡한 인자 필요 - 현상, 정착 후가 아니면 결과를 판정할 수 없는 즉, 즉응성이 없다. - 암실을 필요로 한다. - 결과가 적분치 이다. 결과의 관찰 방법에 따라 - 육안관찰 - 현미경적 관찰 - 입자선의 비적 관찰

56 관찰 목적에 따른 검체의 표본 작성방법 Contact method - 유제와 표본에 분리막을 끼워서 압착 Strip-ping method - film base로 부터 유제를 벗겨내어 표본상에 씌움 유제도포법 - 표본에 직접유제를 도포 Smear method - 유제막 위에 액체검체를 도포 침적법 - 유제용액 중에 표본을 담갔다 꺼냄 Inverting method - 유제를 덮고 일정시간 후 현상한 후 표본에 염색등의 조작

57 1) 감광재료 - 사진유제는 할로겐화은 결정을 젤라틴 중에 분산시킨 것 잠상퇴행 (fading) - 사진유제 중에 생긴 잠상이 현상하지 전에 소멸하는 현상 - 고온 다습 에서 일어나기 쉬움 2) 해상력 (resolving power) - 인접한 두 점의 선원을 식별할 수 있는 최소거리를 해상력 - 감광유제 중의 할로겐화 은의 입자의 크기가 균일하고 미세하며 함유량 이 많은 것이 저지능도 크며 해상도 높음 - 저지능↑ → 방사선 비정 짧음. 흑화상도 작아 선명해짐

58 3) Fog - 목적으로 하는 방사선 이외의 현상으로 인한 흑화 사용 전 : 습도, 온도, 압력, 보관장소….. (2) 사용 중 : 빛, 화학물질, 지문, 마찰…. (3) 현상 중 : 빛, 현상액의 조성, 현상얼룩…. Fog를 일으킬 위험성이 있는 시료 – 얇은 셀로판지로 격리

59 각종 autoradiography 의 특징과 응용
Macro autoradiography - 방사성물질을 포함하는 시료와 X선 필름 등을 밀착하여 autoradiogram 을 작성하여 육안적으로 관찰 판정 감광재료 : x선필름, - 적용 : 종이크로마토그램, 건조식물표본, 작은 동물의 전신 동결절편

60 Microautoradiography
핵종 : β- 방사체 대상 : 동식물의 조직,세포 방법 : 표지화합물을 주입하여 절편 또는 도말표본으로 한 후 ARG 를 시행 감광재료 : microautoradiography 용 각종 autoradiography

61 Mount 법 - 유제막을 직접 표본위에 놓고 밀착을 충분히 한 방법 - 염색제에 의한 fog나 현상의 불 균일에 의한 상의 선명도가 저하되는경우 가 있다. Stripping 법 - 수중에서 건판으로 부터 필름을 벗겨 셀로이딘 처리한 표본의 위에 씌우 는 방법 Inverting 법 : 현상 후 시료를 염색하는 방법 - 글리세린 중에서 유제막과 시료를 벗겨 새 슬라이드 위에 반전해 놓은 후 염색

62 Smear 법 - 혈액, 세포부유액 등 액체상의 검체를 직접 유제막위에 도포 Dipping 법 - 액체상의 감광유제 중에 표본을 침적한 후 건조 노출 - 유제를 붙인 표본을 건조제와 함께 밀봉 4~5℃의 냉방에서 노출 정량 - 단위면적당 현상은 입자의 수로 부터 상대적으로 방사능을 정량

63 전자현미경 autoradiography
유제 : 입자의 크기가 균일, 미세 유제 도포방법 : loop법, bubble 법 Loop 법 - 백금 또는 스텐레스 제품의 침으로 만든 loop로 감광유제를 펼쳐서 전자현미 경용 mesh위의 표본에 도포 Bubble 법 - 비누거품과 같은 유제 풍선을 만들어 이 막에 mesh 위의 표본을 붙인다.

64 Track autoradiography
우주선이나 α선 등의 비적을 감광유제 중에 기록하는 방법 감광재료 : 할로겐화 은입자의 크기가 작고 균일, 함유율높고, 두꺼운것 autoradiography 시료중의 목적원소를 방사화하여 시행하는 방법