Macromolecule analysis Ⅱ-① Lipid Extraction from tissues

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1 Macromolecule analysis Ⅱ-① Lipid Extraction from tissues

2 Mouse tissues에서 Lipid 추출
실험 목적 Mouse tissues에서 Lipid 추출 지질은 환경적, 유전적 질병을 진단할 수 있는 지표로 이용된다. mouse liver에서 지질을 추출하여 TLC(thin-layer chromatography)를 통해 여러 지질의 함유량을 확인한다.

3 Introduction 생체성분 중에서 물에는 불용성이고 유기용매에는 가용성인 물질을 총칭해서 지질이라고 한다.
지질은 일반적으로 단순지질, 복합지질, 유도지질로 분류된다. 지방조직 이외의 조직, 장기의 지질은 복합지질의 비율이 높고, 이것을 조직지방이라고 한다.

4 Introduction Cholesterol
TC(Total Cholesterol)는 우리 몸에 꼭 필요한 물질로, 세포의 세포막을 구성하고 있고 주요 대사에 관여하고 있다. Cholesterol은 음식으로도 섭취되지만 체내에서 합성할 수 있다. 이처럼 TC는 우리 몸에 꼭 필요한 성분이지만 혈중의 높은 TC level은 고혈압, 동맹경화, 뇌졸증, 심근경색 등과 관련이 있는 것으로 알려져 있다.

5 Materials & Methods Homogenizer, PBS, glass tube, chloroform, Triton-X100, waterbath, Centrifuge, pipette, tip, DW, MeOH, Vortex, Nitrogen gas ▶ Sample preparation 1. Place approximately 50~100mg tissue in 1ml PBS and homogenize. 2. Add 2ml of chloroform : methanol (2:1) 3. Vortex and spin at 3000rpm for 10min 4. Transfer the organic phase (bottom) to a glass tube 5. Add more 1ml of chloroform : methanol mixture in sample vial 6. Vortex and spin at 3000rpm for 10min 7. Separate the bottom layer to glass tube 8. Dry under Nitrogen

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7 Materials & Methods Homogenizer, PBS, glass tube, chloroform, Triton-X100, waterbath, Centrifuge, pipette, tip, DW, MeOH, Vortex, Nitrogen gas ▶ Sample preparation 9. Solubilize the dried lipid in 250ul chloroform containing 1% Triton – X 100, 10. Dry the chloroform in Nitrogen 11. Solubilize the dry contents in 200ul DW 12. Vortex and sonication for 5min 13. Labeling and storage in 4°C

8 Results

9 Discussion Q. Triton – X 100의 역할을 설명하고 비슷한 기능을 하는 다른 시약을 찾아보세요