혈액4 빈혈의 특수혈액검사 진단검사의학과 이 우인.

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1 혈액4 빈혈의 특수혈액검사 진단검사의학과 이 우인

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3 Diagnostic Tests of Anemia
General Routine CBC with RBC index PBS Reticulocyte Iron/TIBC/ferritin BM aspiration & Biopsy Special Depends on clinical Mx(classification)

4 Classification of Anemia
I. Microcytic hypochromic anemia Iron deficiency anemia s-iron, TIBC, ferritin, BM iron Anemia of chronic disorder Thalassemia … Hb electrophoresis Sideroblastic anemia s-iron, TIBC, ferritin, BM iron(sideroblast) II. Normocytic normochromic anemia Aplastic anemia Myelophthisic anemia Some Hemolytic anemia**** Some Hemoglobinopathies …Hb EP III. Macrocytic anemia DNA 합성 감소(megaloblastic), EPO 증가(reticulocytosis), RBC surface area 증가 (MDS, lipid metabolism) Vitamin B12 deficiency … Schilling test, anti-parietal cell test, anti-IF antibody test DDx: pernicious anemia Folic acid deficiency Aplastic anemia Liver disease Myelodysplastic syndrome Some hemolytic anemia,

5 철결핍빈혈 Iron deficiency anemia
Iron metabolism 철은 상부소장(십이지장)에서 흡수 골수와 RES에 저장 Serum iron – transferrin 결합 필요한 곳으로 여분의 iron 은 ferritin, hemosiderin의 형태로 조직 내 저장 TIBC(total iron binding capacity) transferrin이 철을 가지고 있을 수 있는 능력 IDA 에서는 있는 철이라도 최대한 이용하기 위해서 transferrin의 농도가 증가함

6 IDA 검사실 소견 Ferritin < 15 ug/L TIBC >360 ug/dl
NL: M 10~200ng/ml, F 15~400 ng/ml TIBC >360 ug/dl NL: 250~360ug/dl Serum iron < 30ug/dl NL: 50~ 150ug/dl Transferrin saturation < 10% =(serum iron /TIBC) x 100 FEP(free erythrocyte protoporphyrin) 축적 Microcytic hypochromic(MCV ↓, MCHC ↓) Poikilocytosis(elliptocyte, anisocytosis, RDW 증가 Reticulocyte normal or low

7 Megaloblastic anemia MCV 100~ 140 fL Peripheral macro-ovalocyte
Howell -Jolly body Hypersegmented neutrophil 5 segmentation >5% 6 segmentation 한 개 이상 혈청 비타민 B12, folic acid 감소 혈청 메틸말론산 & 호모시스테인 증가 LDH 1& 2 fraction 증가

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10 Vitamin B12 deficiency Anemia
위 점막의 parietal cell에서 분비되는 intrinsic factor 와 비타민 B12 가 결합하여 흡수 Anti-parietal cell 항체, Anti-intrinsic factor 항체 Schilling test IF장애로 인한 악성빈혈 (pernicious anemia) 과 흡수장애로 인한 비타민 B12 결핍의 빈혈을 DDx 공복상태 방사선 비타민 B12 경구 투여 24시간 소변 채집 1 ~2시간 후 비방사선 비타민 B12 근육 주사하여 간, 혈장의 B12 결합 장소를 포화 배설률 정상인 7% 이상 일주일 후 내인자와 함께 경구 투여 후 반복검사 정상 배설률 내인자 결핍

11 Aplastic anemia 재생불량성빈혈
중증판정 골수 25% 이하 세포충실도 혈액 호중구수 500/uL 미만 혈소판수 20,000/uL 미만 교정망상적혈구수 1% 미만 위의 세가지 지표 중 두 가지 이상 만족

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13 Hemolytic Anemia 1.Extrinsic factors Splenomegaly
Antibody:immune … Indirect, direct Coombs test, cold agglutinin, Donath-Landsteiner test Mechanical Direct toxic 2. Membrane abnormalities Spur cell anemia PNH … Ham’s test, sucrose lysis test, flow cytometry Hereditary spherocytosis …osmotic fragility test, autohemolysis 3. Abnormal of red blood cell interior Enzyme defect … enzyme activity measure Defect in HMP Hb-pathies … Hb electrophoresis Thalassemia

14 적혈구 파괴증가 적혈구 생성증가 적혈구 손상 감별진단
혈장 간접 빌리루빈 증가, 소변 urobilinogen 증가, 혈장 haptoglobin 감소 적혈구 생성증가 망상적혈구 증가 적혈구 손상 비정상적혈구 혈액도말 감별진단

15 Osmotic fragility test (적혈구 삼투압 취약성 검사)
원리 Cell surface : cell volume ratio의 감소 측정 Hypotonic solution에서 확장되는 capacity에 따라서 용혈 되는 것을 측정 Decrease(resistant) :Thalassemia, Iron deficiency, Liver disease, Reticulocytosis Increase : Cong. spherocytosis 용혈 시작 0.5% ,용혈 끝 0.35%

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17 Osmotic fragility test with Incubation
Incubation 37’C 24시간  greater difference

18 Sucrose Hemolysis Test
원리 PNH 적혈구는 complement(보체) 에 비정상적으로 sensitive RBC를 complement 에 bind하도록 조건을 만든다[sucrose …binding을 promote] Washed RBC(pt) + 정상 혈청 + 10% sucrose실온 30분  hemolysis측정 목적 PNH screening test 해석 정상 5% 미만 5% ~ 10% suspicious megaloblastic anemia, autoimmune hemolytic anemia 10% 이상 PNH

19 Ham’s test (Acidified Serum test, 산성화 혈청용해 실험)
원리 PNH 적혈구는 산성화된 정상인의 혈청(보체함유)에서 철저히 용혈 되고 보체를 파괴시킨 혈청에서는 용혈 되지 않는다 목적 PNH 확인(confirm)

20 1 2 3 4 5 6 7 Fresh NL serum 0.5 Patient’s serum Heat inactivated NL serum 0.2N HCl 0.05 50% pt’s RBC 50% NL RBC Pattern of Lysis trace +++ + - w DDx : 4번 tube positive 이면 spherocytic or antibody sensitized cells Congenital dyserythropoietic anemia(CDA II)…3번 tube에서 음성

21 GPI 부착 단백검사 CD55, CD59 유세포 검사 PNH 확진검사

22 Coombs’ test (Anti-globulin test, 항글로부린 검사)

23 Direct anti-globulin test (EDTA 혈액)
적혈구에 감작된 적혈구를 검출 용혈성 수혈 부작용 신생아 용혈성 질환 자가항체(autoimmune hemolytic) 및 약물(Drug-induced)에 의한 적혈구 감작 Indirect antiglobulin test (혈청) 혈청 내에 있는 항체를 검출하기 위해 적혈구에 인위적으로 감작 시킨 다음 검출 혈청 내 적혈구 항체 검사 Cross matching

24 Cold agglutinin(한랭응집소)
한랭항체에 의한 자가면역성 용혈성 빈혈 Cold agglutinin disease Primary - Idiopathic Secondary Mycoplasma pneumoniae Infectious mononucleosis Lymphoproliferative disorder Paroxysmal cold hemoglobinuria

25 Cold antibody IgM immunoglobulin with anti-I, or anti-i 정상 1:16 미만, activity 0 ~ 20’C (4’C 최적) Donath Landsteiner test PCH Cold hemolysin with biphasic activity IgG 가 4’ C 에서 complement fixation 25 ~ 37’C 가 되면 complement proteins activatedRBC lysis Antibody of P antigen

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27 RBC survival curve

28 Hemoglobin electrophoresis

29 LDH isoenzyme test Glycolysis system 의 최종단계에 작용하는 효소 종류 … Table 참조
Flipped pattern of LDH isoenzyme LD1 / LD2 > 1 Isoenzyme Normal Range Tissue Disorder LD1(HHHH) LD2(HHHM) 12 ~ 27% 27 ~ 37% Heart, Red blood cell Renal cortex Myocardial Infarction Hemolytic anemia Megaloblastic anemia Acute renal infarction LD3(HHMM) 18 ~ 25% Lung,Lymphocytes, Spleen,Pancreas LD1(HMMM) LD1(MMMM) 3 ~ 8% 0 ~ 5% Liver Skeletal muscle

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31 기타 Alkali Denaturation tests for Hb F
Fetal hemoglobin resists alkali denaturation Acid Elution test for Hb F Enzyme 측정