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유전자변형동물 생산 및 활용 - Genetically Engineered Animal
동물실험기법 유전자변형동물 생산 및 활용 - Genetically Engineered Animal LARC, SBRI 구옥재, DVM, PhD
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동물 실험 계획 ? 목적 ?
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- 유전자변형동물 ; 목적에 맞게 유전자를 삽입 혹은 제거한 동물
유전자변형동물 ? - 유전자변형동물 ; 목적에 맞게 유전자를 삽입 혹은 제거한 동물 Model Animal for Biomedical Research Organ donor for Xenotransplantation Protein/Pharmaceutical Production Model Animal for Food Industry
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모델 동물 - 수술 / 투여 등 유전자 변형
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유전자변형마우스 돌연변이 마우스 (Spontaneous Mutant) SCID, Trembler-J 유전자 변형 마우스 (GEM; Genetically Engineered Mouse) Transgenic Mouse (유전자 도입) Knockout Mouse (유전자 제거)
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유전자 발현 전신 발현 / Tissue-specific
Knock-out 전신 knock-out / Conditional KO (Cre-loxP, …) 유전자 발현 on/off Tet-on / Tet-off 특정시기에 유전자 KO / 발현 Cre-ERT loxP-STOP-loxP Doxy + Doxy - Tamox + Tamox - Tamox + Tamox -
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논문 저자
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SBRI 동물자원은행
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국제 마우스 표현형 컨소시움
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Live Animal 도입 동결 자원 도입 (동결 배아 / 동결 정자) 제작
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2. 유전자 미세주입 ; 1세포기 배아 전핵에 직접 주입
Transgenic Mice Production Promoter p(A) 1. 형질전환 유전자 제작 Coding sequence 2. 유전자 미세주입 ; 1세포기 배아 전핵에 직접 주입 3. 수정란 이식 ; 가임신 유도한 암컷 난관에 수술적 이식 4. Transgenic Founder 생산 및 유전자 검사 진행
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배반포기 (Blastocyst) 배아 이용
Knockout Mice Production 1. 원하는 유전자가 제거된 배아줄기세포주 확보 Embryonic Stem Cells 2. 배아줄기세포 주입 배반포기 (Blastocyst) 배아 이용 3. 수정란 이식 ; 가임신 유도한 암컷 자궁에 이식 4. Chimera 생산 => 교배/번식을 통해 Knockout founder 생산
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유전자가위 기술
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Engineered Nucleases Find and Cut Repair Process
= enable targeted cleavage in genome for efficient Genome Editing Find and Cut Gene Knockout Repair Process Gene Recovery Gene Modificaion Gene Addition
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Any Strain Even GEM can be used
Engineered Nuclease Based KO mice Multiplex KO !! Any Strain Even GEM can be used FAST, EFFICIENT, LOW COST
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Fvb-TG(CAG-Cas9-RFP) Cas9 mice sgRNA injection (in vivo jetPEI IP)
Heart Muscle Spleen Brain Colon Lung Liver Kidney sgRNA injection (in vivo jetPEI IP)
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Gene Therapy using CRISPR/Cas9 system
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Genome Engineering Using Engineered Nucleases
Hijacking Cellular DSB Repair Pathways for Targeted Genome Modifications ENs Small insertions and deletions ENs Exact transfer of sequences from donor DNA EN-mediated genome engineering utilizes DSB repair pathways that are conserved in all eukaryotes !
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SNP KI
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Humanized Mice 유전체 분석 결과 => 특이 Mutation 도입 동물 질병 모델
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Transgenic Dog / Pig / Cow
Transgenic Livestock Transgenic Dog / Pig / Cow
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Somatic Cell Nuclear Transfer
동물 복제 기술 Somatic Cell Nuclear Transfer
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Computational Biology
Organ-on-a-Chip 동물실험 대체 실험법
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구 옥 재 010-7445-7297 okjae.koo@gmail.com
감사합니다 !! 구 옥 재
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Cre-loxP system Excision Cre Recombinase LoxP LoxP
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ROSA26 ROSA26 tm Giel-Moloney et al., 2007, Genesis
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