임상병리학 기초실험 김마리교수님 임상병리학과 김명정 박수영 김량옥
최근 PCR 은 염기서열의 분석, 유전자 검 사, 바이러스 검사 등의 다양한 분야에서 응용되고 있다. 감염병의 경우 기존 검사 법에 비해 윈도우기 (window period) 를 단축시켜 신속한 진단에 도움을 주고 있 다. PCR 반응을 통하여 in vitro 상에서 특 정부위의 DNA 를 105~108 배까지 수시 간내에 증폭시킬 수 있으며, 증폭된 DNA 를 여러가지 실험에 이용하고 결과를 토 대로 임상적인 진단검사에 응용할 수가 있다.
1. 이중쇄 DNA 를 단일쇄 DNA 로 열변성 시킨다. 2. 올리고 뉴클레오티드를 단일쇄 DNA 에 결합시킨다. 3. 결합한 올리고뉴클레오티드를 시발체로 하여 DNA 폴리머라제에 의해 DNA 를 합성한다.
매 PCR 주기마다 증폭되는 DNA 는 2 배씩 늘어야하나, 일정주기가 지나면 증폭되는 DNA 의 양이 안정기에 도달 하게 된다. 출처 : 임상분자생물학 정문각 임상분자생물학 고려의학
출처 : 임상분자생물학 정문각
PCR 은 원하는 DNA 서열을 시험관 속에 서 매우 빠르게 복제한다. PCR 을 일으 키기 위해서는 다음과 같은 것들이 필요 하다. 1) 복제할 DNA 2) 프라이머 3) DNA 뉴클레오타이드 4) DNA 중합효소 (Taq) 5) DNA 중합효소용 완충용액 출처 : 위키백과
PCR 의 세 단계 변성 (Denaturation) 신장 (Elongation) 결합 (Annealing) 출처 : 엔하위키 미러
PCR 은 매우 적은 양의 DNA 를 이용해서도 PCR 을 통해 원하는 부위만 증폭 할 수 있다. PCR 의 가장 큰 장점은 지저분한 사료를 이용해서도 가능한데 예를 들어 중요한 살 인사건에 희생자의 정체를 확인 하는 것이 가능하다. PCR 의 가장 큰 단점은 역설적이지만 그것이 매우 민감한 방법이라는 점이다. 이전실험에서 남아있던 미량의 DNA 나 실험자로부터 떨어 진 속눈썹처럼 단순한 것도 잘못된 결과를 초래 할 수 있다. 출처 : 위키백과
1. 삼염기 반복 질환의 진단 (Diagnosis of triplet repeat disorders) 뒤시엔느 근이영양증 헌팅톤 병 2. 제한 핵산 내부 효소의 소화 (Restriction endonuclease digestion) 특정 돌연변이를 찾으려고 할때 적용할수있다. 핵산내부효소는 변이영역에 걸친 인식서열을 가진것을 선택한다. 효소는 돌연변이가 존재하는지에 따라 DNA 를 자르거나, 또는 그 렇지 않을것이다.
3. 대립유전자 특이적 올리고뉴클레오티드 점 블롯 (Allele-specific oligonucleotide(ASO) dot blots) 단일 돌연변이 ( 예 : 낫적혈구병 ) 또는 흔한 질환대립유전자 ( 예 : 낭성섬유증 ) 의 제한된 범위의 검출과 관련이 있는 분석에 사 용된다. 4. 염색체 진단 (Chromosomal diagnosis) 이수배수체에 대한 빠른 선별은 염색체 13,18,21 에 특이적인 극 소위성의 복합 PCR 증폭에 의해 수행되고 그후 각각의 염색체에 대한 정량적인 분석이 뒤따른다.
5. 질량분석법 (Mass spectrometry) 질량분석법은 PCR 로 증폭된 DNA 를 분석한 평균값을 매우 빨리 제공한다. 이 방법은 CFTR 와 알츠하이머병에서 가장 중요한 아 포지방단백 -E 유전자 검출에 크게 유용하다.
배경 출처 : 네이버 한국 tv