PCR-SSO 방법을 이용한 HLA-DRB 검사 Chapter.24 PCR-SSO 방법을 이용한 HLA-DRB 검사 10조: 11070139 홍소이 11070140 황유정
발 표 목 록 1.검사의 배경 2. 검사 방법 3.검사의 기술적 고찰 - HLA-D 유전자의 대립인자 - 주조직적합복합체 - HLA-D 유전자의 대립인자 - 조직형 검사와 유전자 분석 - 조직이식과 HLA type 2. 검사 방법 - 검체, 시약, 정도관리 및 검사순서 3.검사의 기술적 고찰 - Oligonucleotide probe - 결과의 해석
1) 주조직적합성 복합체 (Major Histocompatibility Complex, MHC) - 면역반응의 항원인식과정에서 가장 중요한 역할을 하는 분자를 생성하는 여러 유전자와 그 산물인 단백질을 총칭 - 척추동물에서 면역계와 자가 면역에 중요한 역할 - 합성된 단백질 조각을 그 세포의 표면에 보여주는 역할 - MHC 단백질 복합체가 세포의 표면에 위치하여 확인된 단백질이 자기단백질이 아닌 것으로 판명되면, 면역 세포는 그 감염된 세포를 죽임
class I형 class II형 - HLA-A, HLA-B, HLA-C 분자들이 속하며 거의 모든 세포에 존재 - T세포의 T수용체와 반응하여 cyotoxic T cell로 분화 시켜 감염된 세포를 죽이는 killer cell을 만듬 - 세포독성 T세포에 단백질을 제시 - 장기이식의 거부반응이나 바이러스감염 등에서 감염된 세포를 파괴하는 데 중요한 역할 - HLA-DR,DQ,DP로 나뉘며 항원은 α와 β2개의 당 단백사슬로 구성 - 항원에 감작된후 T세포 수용체와 반응하여 helper T cell로 분화시켜 세포 외부의 동일항원을 지닌 세균을 담당 - 대식세포나 B세포 등 특정한 면역 세포에만 존재 - II형 MHC 분자를 가진 세포들을 항원제시세포(APC) 라고 부르며 이 항원제시세포들은 미생물을 소화시켜 조각 냄
T 세포 수용체 MHC자가항원, 외부 항원 결합체의 결합
2) HLA-D 유전자의 대립인자 - HLA class II분자는 6번 염색체 단원의 HLA-D 부위에 위치한 유전자로부터 만들어짐 - 알파쇄와 베타쇄로 구성된 heterodimer이며 B cell과 macrophage와 같이 항원을 나타내는 세포의 표면에 존재 - 조직이식의 면역반응 뿐만 아니라 자가면역질환과 암 질환을 포함하는 질병에 대한 감수성에 매우 중요한 역할 - DRB1 분자를 세포표면에 농도 발현, 이식편대숙주질환 에서 중요한역활
이식편대숙주 병 (Graft-versus-host disease, GVHD)
3)HLA조직 형 검사와 유전자 분석 - HLA typing - AS-PCR - PCR-SSO방법 HLA A,B,C,D의 각 림프구 항원에 특이적인 항체를 림프구와 반응 후 보체를 가하여 림프구에 독성을 나타내는 정도를 관찰하여 림프구가 어떤 항체에 반응하는지를 관찰 단점:다양한 모든 대립유전자를 감별하는데 제한적 - AS-PCR 많은 대립유전자 모두에 대하여 PCR을 각각 진행해야 되기 때문에 경비가 많이 소요되는 단점 - PCR-SSO방법 간편하고 대량의 검체를 다룰 수 있다는 장점 다양한 염기서열을 동일한 조건에서 혼성화하기 때문에 많은 경험을 필요로 한다는 단점
4)조직이식과 HLA type 이웃조직간에 항체반응을 유발하여 림프구의 공격이 발생하고 조직접합부위가 괴사함으로 이식거부반응 발생
검사방법 검사순서 시약 검체 EDTA전혈 검체거절기준 및 검체 적합성 여부 SSO HLA DRB typing kit SSO strip detection reagent kit 검사순서 (1)검체처리 및 DNA 분리 (2)PCR (3)프로브 혼성화 반응과 검출 (4)판독
3. 검사의 기술적 고찰 소수의 nucleotide를 중합한 핵산 점돌연변이를 검사, PCR 산물의 특이도를 확인 oligonucleotide probe 소수의 nucleotide를 중합한 핵산 점돌연변이를 검사, PCR 산물의 특이도를 확인 각 돌연변이에 특이적인 oligonucleotide 를 붙여 동일한 방법으로 혼성화한 Line-Probe방법 결과의 해석 돌연변이들의 위치가 너무 가까우면 유전자의 돌연변이가 프로브에 모두 반응할수 있으므로 돌연변이 조합을 모두 조사하여 유전형을 결정