HBV DNA Viral Load Test 비교 COBAS TaqMan 48 과 COABS AmpliPrep 소개 면역혈청파트 분자유전팀 이 은 경 28

Objective 임상의 요구와 치료의 monitoring 등 필요성 - 현재 HBV DNA 정량검사의 검출한계 (1.42 X 105 ~ 1.7 X 109 Copies/mL) 신의료기술 검사방법인 Real-Time PCR 에 관한 보험수가 질의 비교 분석을 하게 된 이유는 크게 2가지입니다. 첫째는 현재 사용하고 있는 HBV DNA 정량 검사는 환자를 계속적으로 관찰해야 하는 입장에서는 만족스러운 결과를 주고 있지 않는다. 그것은 검출의 범위가 1.42 X E5 – 1.7 X E9 Copies/mL이어서 검출 한계치 이하에 대한 data가 항상 요구되었습니다. 낮은 영역에서의 대안이 필요하게 되었다. 참고적으로 현재 우리 병원에서는 사용하고 있지는 않지만 300copy 까지 검출이 가능하지만 부족합니다. 이런 요구들의 대안으로 Real time PCR을 이용하면 35copy까지도 검출이 가능하게 되었습니다. 신의료기술 을 이용하는 Cobas TagMan 48을 이용하여 실제 data를 분석해 보고 이 data를 보험수가 질의를 위한 기본 자료로 쓰기 위해 비교 하였습니다. 28

Hepatitis B Virus Background Baseline, untreated HBV levels generally 108 - 109 virions Viral load can be as high as 2 x 1011virions Half-life of HBV is 24 hours Total virus produced per day is 1011 virions Hepatitis B virus is cleared more slowly, so requires more aggressive therapy 먼저 HBV에 대해 간단하게 알아보겠습니다. 치료를 하지 않았을 때는 일반적으로 108 - 109 이나 2 x 1011까지도 증가하며 하루에 생성되는 virons이 1011이고 반감기는 24시간입니다. 그래서 아주 천천히 Clear되기때문에 공격적인 치료를 해야만 합니다.

Markers of HBV Infection Serology Antigens HBsAg, HBeAg Antibodies IgM anti-HBc, Total anti-HBc, anti-HBe, anti-HBs Nucleic Acid Testing (NAT) HBV DNA HBV감염의 여부를 아는 방법은 여러 가지가 있으나 통상적인 방법으로는 HBsAg, HBeAg 인 Antigens을 검사하는 것과 IgM anti-HBc, Total anti-HBc, anti-HBe, anti-HBs 등의 Antibodies들을 검출하는 Serologic한 방법과 핵산 자체를 검사하는 NAT 방법이 있습니다.

Progression to Chronic HBV Infection Acute (6 months) Chronic (Years) HBV-DNA HBsAg Total anti-HBc Titer HBeAg anti-HBe IgM anti-HBc 이 그림은 Chronic HBV Infection 인 경우를 모식화 한 것이다. HBsAg, HBeAg ,IgM anti-HBc, Total anti-HBc, anti-HBe, anti-HBs 등의 존재는 노출된 시기에 따라 다양하게 나타나지만 HBV DNA는 환자의 상태에 따라 정량적으로 변화할 뿐이지 완치가 되지 않으면 계속적으로 나타난다. 4 8 12 16 20 24 28 32 36 52 Weeks after exposure 31

Molecular Methods of Monitoring Slot/Dot Blot Lack Sensitivity less accurate in quantitation Signal Amplification Hybrid Capture (Digene) bDNA (BAYER) Target Amplification Polymerase Chain Reaction End-Point analysis Real-Time PCR HBV 검사에 이용되는 NAT검사의 대표적인 방법에는 Slot/Dot Blot , Signal Amplification ,Target Amplification 등이 있다. Slot/Dot Blot는 검사하는 방법으로 인해 Sensitivity가 낮고 부정확한 정량검사여서 잘 사용되지 않고 있다. 주로 사용하는

Hybrid Capture® II HBV DNA Test Contains an ad/ay Probe Cocktail Linear range of detection = 0.021 - 6,000 pg/mL or 5,000 – 1,700,000,000 copies/mL Standard kit : 141,500 - 1,700,000,000 copies/mL Ultra Sensitive kit : 5,000 - 3,300,000 copies/mL 4 log dynamic range Sample size = 30 uL serum 96 well microplate format Assay time to results = 5 hours

Signal amplification system bDNA를 이용한 HBV-DNA의 정량

COBAS AMPLICOR™ System - Routine Diagnostic PCR

비교 Table

COBAS TaqMan48 - IVD labeled real-time PCR System

AMPLILINK Datastation COBAS CTM 48 의 Workflow Manual Sample Preparation Barcode High Pure Kit K-Tubes and K-Carrier CTM48 and AMPLILINK Datastation AmpliPrep Automated Sample Preparation

검사방법에 따른 비교 Data Material Method 2005년 6월 ~ 8월까지 HBV DNA 검사 의뢰된 환자 중 임의선택 145 검체 내과 검체 : 40 검체 총 185 검체 Method Digene 사의 Hybrid Capture II Bayer 사의 bDNA Roche 사의 COBAS TaqMan 48

검사방법별 비교 Data Hybrid Capture II bDNA TaqMan High Range 2 32 18 Detection Range 92 109 151 Low Range 91 44 16 Total (검체수) 185 Hybrid Capture II : 141,500 ~ 1,700,000,000 Copies/mL bDNA : 2,000 ~ 100,000,000 Copies/mL TaqMan : 35 ~ 640,200,000 Copies/mL

검사방법별 결과(1)

검사방법별 결과(2)

검사방법별 결과(3)

검사방법 별 비교 Data 검출 한계치 이하의 결과 Hybrid Capture II bDNA TaqMan Detection Range 47 75 Low Range 91 44 16 Total Hybrid Capture II : 141,500 ~ 1,700,000,000 Copies/mL bDNA : 2,000 ~ 100,000,000 Copies/mL TaqMan : 35 ~ 640,200,000 Copies/mL

검사방법 별 비교 Data. 검사방법별 비교 결과

Molecular Technologies Available for Therapeutic Management 109 108 107 bDNA v3.0 Digene 106 105 104 PCR 103 102 Real-Time PCR 101 1 to 2 wks 3 months 4 - 6 months Follow - up

Automated Sample Preparation - COBAS AmpliPrep System Full Automation Limited preparation Reducing errors Increased operator safety COBAS Taqman48 Real Time PCR What I would like to do now is walk you through the CAP system and show you how the system was designed to meet our customers requirements. The COBAS AmpliPrep is fully automated automating all the steps of the sample preparation steps for PCR testing on the COBAS AMPLICOR. Manual steps are limited to loading and unloading minimizing the errors associated with manual sample preparation and protecting the operator from exposure to hazardous material. The AmpliPrep is controlled by AMPLILINK software using a Windows NT graphical interface to provide quick and easy access. The system can be connected to the LIS through a bi-directional interface The COBAS AmpliPrep has a unique feature not offered by any competitive systems, samples can be tracked using a barcode throughout the process from sample to results on the COBAS AMPLICOR.

감사합니다 !!

검사방법별 비교 Data bDNA 의 검출 한계치 이하의 분석 Hybrid Capture II bDNA TaqMan Detection Range 28 Low Range 44 16 Total Hybrid Capture II : 141,500 – 1,698,000,000 Copies/mL bDNA : 2,000 – 100,000,000 Copies/mL TaqMan : 35 – 640,200,000 Copies/mL