분자생물학실험 Total RNA extraction RNA quantitation CDNA synthesis RT-PCR Western blotting Yeast two-hybrid Electrophoresis RT-PCR CDNA synthesis RNA quantitation Total RNA extraction
RT-PCR (Reverse Transcriptase-polymerase chain reaction) 분자생물학실험 SUBJECT RT-PCR (Reverse Transcriptase-polymerase chain reaction)
분자생물학실험 RT-PCR (Reverse Transcriptase-polymerase chain reaction)
분자생물학실험 Materials & Method PCR * Primer : SHR, SCR, ACT2 Template (cDNA) 3 ㎕ Primer FW/RV 0.5 ㎕ 5X Buffer 2㎕ Taq polymerase 0.1 ㎕ D.W. 4.4 ㎕ Total 10 ㎕ Step Temperature Time cycles Initial denaturation 95℃ 1min 1 Denaturation 15s 30 Annealing 58℃ Extension 72℃ 10s/1kb Final extension 5min
분자생물학실험 Real-Time qRT-PCR (Real Time quantitative Reverse Transcription PCR)
분자생물학실험 Result & Discussion - 각각의 mutant background에서 유전자 발현정도의 차이를 비교해 봅니다. shr-2 mutant background에서 SCR의 발현이 낮게 나온 건 뒤에 설명. Point mutation이라 발현에는 문제가 없어 마치 기능이 소실되지 않은 양상의 band를 관찰 할 수 있습니다. 발현 정도의 차이를 비교할 때 ACTIN primer는 왜 사용 했는지? ACTIN이 무엇인지?
분자생물학실험 Result & Discussion SHR scr-5 SCR shr-2 shr-6 239(CAG->TAG) 앞의 발현양상 band 결과를 보면 shr-2 background에서 SCR 유전자의 발현이 낮게 나오는데, 이는 두 mutant중 shr-2가 null 이며, SHR이 SCR의 전사를 도와준다는 것을 말합니다. Abrash et al. (2009) Developmental cell 16: 787 shr-2 ATG SHR shr-6 scr-5 239(CAG->TAG) SCR ATG 0.1kb SHR, SCR은 transcription factor(TF) 입니다. SHR은 mobility가 있어서 stele에서 endodermis쪽 으로 이동이 가능합니다. 이동 후 SCR에 binding하여 SCR의 Transcription을 돕습니다. scr-5 mutant는 point mutation이 일어난 loss of function plant입니다.
조별로 사진이 정리 되어 있지 않아요. 실험 당일에 찍어간 사진과 비교하여 각자의 전기영동 결과를 ppt 자료와 비교하여 결과 레포트를 작성하세요.
분자생물학실험 다음 실험 예비 레포트 Yeast two hybrid - Yeast transformation