Mycobacteria Chlamydia, Mycoplasma, Rickettsia Fungus 진단검사의학과 김명희

Mycobacteria

Acid-fast bacilli 200여 균종 호기성 세포벽의 두꺼운 지질층으로 산과 알칼리 등의 물리적 자극 에 저항성 열, 자외선에는 취약 비운동성, 막대균 200여 균종 MTB complex Non-tuberculous mycobacteria (NTM)

진단 검체 검체 전처리 혈액, 뇌척수액, 골수: 실온보관 그 외: 4°C 냉장보관 객담: 아침 첫 객담, 최소 2개 이상의 검체 채취 여러 번 받아서 모은 검체 X 소변: 아침 첫 중간뇨, 24시간 뇨는 X 혈액: 항응고제 사용 EDTA, 혈액배양병에 담긴 검체, 응고된 검체는 부적합 검체 전처리 검체의 균질화와 오염제거 균질화: NaOH, N-acetyl-L-cystein (NALC)

항산균 도말검사(AFB stain) 민감도 22-80%(50%내외) 검체 1mL 당 결핵균 수가 104개 이상 검출 Fuchsin이용: Ziehl-Neelsen(ZN)법, kinyoun 염색법 형광염색: auramin O, auramine-rhodamine (ZN에 비해 민감도가 높음) X200 Auramin staining X1000 ZN staining

배양검사 검체 당 10-100개 이상의 균이 생존할 때 양성배양으로 민감도 높음 균 동정 및 항결핵제 감수성 검사에 이용가능 고체배지 계란배지(egg-based media) Lowenstein-Jensen (LJ)배지, Ogawa 배지 Malachite green 한천배지(agar media) Middlebrook 7H10, 7H11 액체배지 Middlebrook 7H9

액체배지 배양시간 단축 : 2-3주 양성률 ↑ 세균오염 증가 NTM 동정 증가

분자생물학적 방법 잠복감염 진단 PCR, real-time PCR, nested PCR Mantoux skin test Purified protein derivative (PPD) IFN-γ release assy (IGRA) QuantiFERON Gold IT, Elispot

감수성검사 다제내성 결핵 (multidrug resistant TB, MDR-TB) Isoniazid (INH) & rifampicin (RIF)에 동시 내성 광범위 약제 내성 결핵 (extensively drug-resistant TB, XDR-TB) MDR-TB 중 fluoroquinolone 계열 항균제 중 하나 이상, 주사 약제인 kanamycin, amikacin, capreomycin 중 하나 이상에 내성 감수성검사의 적응증 모든 환자의 첫 분리주 치료실패 치료 3개월 후에도 배양 양성

결핵균의 존재와 RIF 내성 여부를 동시에 검사 감수성 검사 직접법 간접법 절대농도법 내성비례법 내성비율법 액체배양 시스템 이용 신속내성검사 rpoB, katG Xpert MTB/RIF 결핵균의 존재와 RIF 내성 여부를 동시에 검사

Chlamydia, Mycoplasma, Rickettsia

Chlamydia Obligate intracellular parasite 기본체 (elementary body) 바이러스보다는 세균에 가까움 (그람음성) RNA, DNA 모두 가짐 항균제에 감수성 기본체 (elementary body) 망상체 (reticulate body) 봉입체 (inclusion)

C. trachomatis 면역형: 15가지이상 존재 Inclusion conjunctivitis: D-K Trachoma: A, B, Ba, C Lymphogranuloma venereum, LGV: L1, L2, L3 Nongonococcal urethritis & prostitis 비임균성 요도염의 50~60% D-K Gynecological infection 자궁 경관염, 자궁내막염, 나팔관염 신생아 폐렴: 산도로부터 감염

C. psittaci C. pneumoniae 새, 가금류 등으로부터 감염 Psittacosis (앵무새병) 성인 폐렴, 인두염, 기관지염

진단 직접 현미경관찰법 Direct fluorescent Ab (DFA) 신생아 결막염 단클론 항체 elementary body를 예민하고 신속하게 관찰 자궁경부 및 요도에서 채취한 검체 신생아 결막염 Giemsa stain: inclusion 관찰

배양 C. trachomatis C. pneumoniae McCoy cell, Hela cell inclusion 관찰 Hela cell, Hep 2 cell

혈청학적 검사 C. trachomatis 항원검사 예민, 신속 위음성 Complement fixation (CF) LGV

분자유전학 검사 C. trachomatis rRNA 상보염기를 이용한 probe ompI gene 증폭

Mycoplasma 인체에서 10여가지 균종 검출 병원균 M. pneumoniae M. hominis Primary atypical pneumonia, tracheobronchitis,.. M. hominis 신우신염, 난관염, 요도염, 구인두염 U. urealyticum 비임균성 요도염

진단 배양 분자유전검사 Sequence specific oligonucleotide probe hybridization Sequence specific primer 혈청학적 검사 Anti-I IgM cold agglutinin (선별검사) Anti-mycoplasmal IgM, IgG 특이항체 (확진)

Rickettsia, Coxiella, Rochalimaea 병인 인체감염증 분포지역 전파방법 Spotted fevers(홍반열군) R. rickettsia Rocky산 홍반열 서반구 Tick bite R. cororii Boutonneuse fever 지중해, 아프리카, 인도, 서남아시아 R. sibrica Siberian tick typhus 시베리아, 몽고, 중앙아시아 R. australis Queensland tick typhus 호주 R. akari Rickettsial pox 미국, 러시아, 한국 Mite bite (좀진드기)

Typhus fever 병인 인체감염증 분포지역 전파방법 R. prowazekii Epidemic typhus(발진티푸스) 전세계 Infected louse feces Brill-Zinsser병 북아메리카, 유럽 Reactivation of epidemic typhus R. typhi Murine typhus(발진열) Infected flea feces R. tsutsugamushi Scrub typhus 아시아, 인디아, 호주, 태평양제도 Chigger bite(좀진드기) Coxiella burnettii Q fever Infectious aerosol, Tick bite Rochalimaea qiuntana Trench fever 유럽, 아프리카, 북아메리카 Scratching louse feces

진단 급성기와 회복기 혈청 혈청학적 검사 발병기, 1~3주 Weil-Felix Rickettsial 질환을 갖고 있는 환자의 혈청이 Proteus vulgaris의 특정 균주와 응집

Fungus

진균 특징과 임상적 분류 형태 생식 분류 효모균(yeast) 사상형 진균(Mold) 이상형진균(Dimorphic fungi) 유성생식과 유성포자 무성생식과 무성포자 분류 완전 진균 불완전 진균

임상적 분류 표재성 진균증 피부진균증 피하진균증 이상성 진균에 의한 심부진균증 스포로트리쿰증(Lymphocutaneous sporotrichosis) 색소분아균증( chromoblastomycosis) 진균종 (Eumycotic mycetoma) 이상성 진균에 의한 심부진균증 기회감염진균증(opportunistic mycosis)

기회감염균증의 진단 Candidiasis와 그외 효모감염균증 1. Candidia spp. 2. Aspergillosis 발아관 시험, 탄수화물 발효시험과 동화시험 상푼화된 Kit, 형태학적 특징, CHROMagar KNO3, urease 2. Aspergillosis 무색소의 격벽이 있는 균사가 45각도, 환경에 흔히 존재 동정소견 혈청학적 검사 3. Zygomycosis 4. Hyalohyphomycosis 5. Phaeohyphomycosis

진단법 1. 검체의 채취 및 접종 건조, 냉동 금지 객담 : 양치질 후 아침 첫 객담 뇌척수액 : 양이 많을 수록 좋음, 보관시 실온 혈액 모발, 조갑, 피부 : 병변의 가장자리 scraping 요 : 아침 첫뇨, 중간뇨 조직 : 마르지 않게 골수 흡인물 농, 삼출물

India ink : 뇌척수액, Cryptococcus neoformans (민감도 50% 이하) 2. 직접검사 10-20% KOH : 피부, 조갑, 모발 India ink : 뇌척수액, Cryptococcus neoformans (민감도 50% 이하) Calcofluor white : Pneumocystis jirovecii Fluorescent monoclonal Ab 3. 조직, 병리학적 검사 Methenamine silver, PAS 4. 혈청학적 검사 면역확산법, 보체고정법, latex 응집법, ELISA Crytococcosis, Aspergillosis, Candidiasis, Sporotrichosis, Blastomycosis, Coccidioidosis, Histoplasmosis

India ink 염색

Calcofluor white rapid detection of yeasts, fungi & parasitic organisms non-specific fluorochrom binds to cellucose and chitin in cell walls Yeast A. fumigatus

5. 배양검사 배지 2. 배양조건 3. 사상형 진균의 동정법 4. 효모균 진균의 동정법 Sabouraud dextrose agar(SDA) 비선택배지 선택배지 : 항균제와 cycloheximide 2. 배양조건 30oC에서 최소 30일간 3. 사상형 진균의 동정법 Lactophenol cotton blue 4. 효모균 진균의 동정법 Germ tube test : C. albicans API 20C Corn meal tween 80 agar Nitrate(KNO3) 동화반응, urease검사, CHROMagar Candida

Lactophenol cotton blue 염색 Phenol:   kills any live organisms; Lactic acid : It  preserves fungal structures, and Cotton blue : It stains the chitin in the fungal cell walls. Aspergillus spp. Micosporum gypseum Yeast, C. neoformans

Germ tube test Differentiate Candida albicans from other yeast synthesis of protein and ribonucleic acid Germ tube: one of the virulence factors of C. albicans C. tropicalis: pseudohyphae

진균의 분자 진단 핵산 추출 세포벽의 파괴: 물리적 방법, 효소처리, 화학적 방법 주요 표적 부위 Mitochondrial rDNA 5S rDNA Nontranscribed spacer Intergenic spacer rDNA 28S rDNA 18S rDNA Internal transcribed spacer PCR, multiplex PCR, RQ PCR