공지사항 1. 2017. 06.12 PM 3:00 생물학 및 실험1 기말고사 미응시시 점수 인정 불가 (꼭 응시 해 주세요.) 부정행위- 시험 성적 0 점 처리 2. 최종적으로 레포트 제출시 제한효소(예비) + 전기영동(예비) + 제한효소&전기영동(결과 종합적으로) =6/14 (수), 5 시 까지 제출 기존에 다 쓴 레포트도 모두 제출 바랍니다. -2권 이상일 경우도 모두 제출 (미제출시 점수 인정 불가-학교 공식 자료 약 2~3 년 보관 의무)
가천대학교 생명과학과 생물학 및 실험 1 2017-1학기 생물학 및 실험 1 Exp 13. 전기영동
서론 (DNA Extraction) 전기영동이란? 전 실험에서 준비한 DNA의 존재를 전기영동을 통해 확인하고 제한효소로 자른 DNA의 변화에 대해 분석해본다. 전기영동이란? 젤 메트릭스(gel Matrix) 내에서 전류를 이용하여 DNA, RNA, 또는 단백질등을 크기별로 분리하는 실험 방법 주로사용되는 젤의 종류에 따라 아가로스 젤 전기영동법 , 폴리아크릴아마이드 젤 전기영동법으로 구분한다.
서론 (DNA Extraction) 아가로스 젤 전기영동법 우뭇가사리로부터 분리한 agar(한천)에서 정제한 ‘아가로스(agarose)’를 matrix 로 이용한 전기영동법으로 DNA 또는 RNA를 크기별로 분리할 때 사용한다. 분리해상도는 폴리아크릴아마이드보다는 상대적으로 낮다 폴리아크릴아마이드 젤 전기영동법 아가로스 대신, 폴리아크릴아마이드를 젤로 사용하는 전기영동법으로 훨씬 촘촘한 다공성 물질로써 분리 해상도가 아가로스보다 훨씬 높아 작은 분자량의 시료를 분리할 때 쓰인다.
서론 (DNA Extraction) 전기영동 실험요약 여러 가지 size의 DNA sample 1번 lane 에 DNA marker를 넣고 2번 lane부터 DNA sample loading 전기영동 (-)에서 (+)로 이동, size에 따라 분리됨. DNA에 염색 UV에 의해 크기 확인
재료 및 방법 (Materials & Methods) Gel box, TAE buffer, 파이펫, 팁, loading dye, 지난시간의 Sample, DNA size marker, Agarose, Redsafe(Etbr 대체제), UV transilluminator
(총 24 ul volume을 가지는 sample 2개가 준비 되는것) 재료 및 방법 (Materials & Methods) 실험 방법(Methods) 1% Agarose Gel을 만들기 위해 TAE buffer 100ml에 agarose 1g을 넣어 전자레인지에 1 분간 가열한다. 1번에서 만든 용액을 따뜻할 정도로만 식힌뒤 Redsafe을 5ul 넣고 잘 섞은 후 Gel tray에 넣고 굳힌다. (30분~40분) 지난시간에 준비한 1.제한효소를 처리하지 않은 DNA sample 과 2. 제한효소로 자른 DNA Sample 각각 20ul에, 6X DNA loding dye 를 4ul 각각 잘 섞는다. (총 24 ul volume을 가지는 sample 2개가 준비 되는것)
재료 및 방법 (Materials & Methods) Gel box에 굳힌 gel을 옮긴 뒤 TAE buffer를 채워 넣는다. 첫 번째 홈에는 DNA ladder를 7ul 넣고 두 번째 홈부터 준비된 sample을 8ul씩 넣고 100v로 30~50분간 전기영동한다. (상황에 따라 더 높은 볼트로 전기영동 가능) Gel의 2/3정도에 bromophenol blue가 오면 멈추고 젤을 uv- transilluminator 로 관찰하고 사진촬영한다.
결과 (Result) 결과(Result) Gel 사진을 확인하고 DNA Size Marker에 따른 사이즈를 확인한다.
고찰 (Discussion) [ Exp 12 ] 전체적인 실험 과정 정리 제한효소가 인지하는 DNA 서열 비교. BamHI 외 2가지 이상. (eg, EcoRI, HindIII) [ Exp 13 ] 1. 밴드가 서로 다른 base pair 를 나타내는 이유에 대해 설명하시오