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PCR-SSO 방법을 이용한 HLA-DRB 검사
Chapter.24 PCR-SSO 방법을 이용한 HLA-DRB 검사 10조: 홍소이 황유정
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발 표 목 록 1.검사의 배경 2. 검사 방법 3.검사의 기술적 고찰 - HLA-D 유전자의 대립인자
- 주조직적합복합체 - HLA-D 유전자의 대립인자 - 조직형 검사와 유전자 분석 - 조직이식과 HLA type 2. 검사 방법 - 검체, 시약, 정도관리 및 검사순서 3.검사의 기술적 고찰 - Oligonucleotide probe - 결과의 해석
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1) 주조직적합성 복합체 (Major Histocompatibility Complex, MHC)
- 면역반응의 항원인식과정에서 가장 중요한 역할을 하는 분자를 생성하는 여러 유전자와 그 산물인 단백질을 총칭 - 척추동물에서 면역계와 자가 면역에 중요한 역할 - 합성된 단백질 조각을 그 세포의 표면에 보여주는 역할 - MHC 단백질 복합체가 세포의 표면에 위치하여 확인된 단백질이 자기단백질이 아닌 것으로 판명되면, 면역 세포는 그 감염된 세포를 죽임
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class I형 class II형 - HLA-A, HLA-B, HLA-C 분자들이 속하며 거의 모든 세포에 존재
- T세포의 T수용체와 반응하여 cyotoxic T cell로 분화 시켜 감염된 세포를 죽이는 killer cell을 만듬 - 세포독성 T세포에 단백질을 제시 - 장기이식의 거부반응이나 바이러스감염 등에서 감염된 세포를 파괴하는 데 중요한 역할 - HLA-DR,DQ,DP로 나뉘며 항원은 α와 β2개의 당 단백사슬로 구성 - 항원에 감작된후 T세포 수용체와 반응하여 helper T cell로 분화시켜 세포 외부의 동일항원을 지닌 세균을 담당 - 대식세포나 B세포 등 특정한 면역 세포에만 존재 - II형 MHC 분자를 가진 세포들을 항원제시세포(APC) 라고 부르며 이 항원제시세포들은 미생물을 소화시켜 조각 냄
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T 세포 수용체 MHC자가항원, 외부 항원 결합체의 결합
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2) HLA-D 유전자의 대립인자 - HLA class II분자는 6번 염색체 단원의 HLA-D 부위에 위치한 유전자로부터 만들어짐 - 알파쇄와 베타쇄로 구성된 heterodimer이며 B cell과 macrophage와 같이 항원을 나타내는 세포의 표면에 존재 - 조직이식의 면역반응 뿐만 아니라 자가면역질환과 암 질환을 포함하는 질병에 대한 감수성에 매우 중요한 역할 - DRB1 분자를 세포표면에 농도 발현, 이식편대숙주질환 에서 중요한역활
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이식편대숙주 병 (Graft-versus-host disease, GVHD)
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3)HLA조직 형 검사와 유전자 분석 - HLA typing - AS-PCR - PCR-SSO방법
HLA A,B,C,D의 각 림프구 항원에 특이적인 항체를 림프구와 반응 후 보체를 가하여 림프구에 독성을 나타내는 정도를 관찰하여 림프구가 어떤 항체에 반응하는지를 관찰 단점:다양한 모든 대립유전자를 감별하는데 제한적 - AS-PCR 많은 대립유전자 모두에 대하여 PCR을 각각 진행해야 되기 때문에 경비가 많이 소요되는 단점 - PCR-SSO방법 간편하고 대량의 검체를 다룰 수 있다는 장점 다양한 염기서열을 동일한 조건에서 혼성화하기 때문에 많은 경험을 필요로 한다는 단점
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4)조직이식과 HLA type 이웃조직간에 항체반응을 유발하여 림프구의 공격이 발생하고 조직접합부위가 괴사함으로 이식거부반응 발생
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검사방법 검사순서 시약 검체 EDTA전혈 검체거절기준 및 검체 적합성 여부 SSO HLA DRB typing kit
SSO strip detection reagent kit 검사순서 (1)검체처리 및 DNA 분리 (2)PCR (3)프로브 혼성화 반응과 검출 (4)판독
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3. 검사의 기술적 고찰 소수의 nucleotide를 중합한 핵산 점돌연변이를 검사, PCR 산물의 특이도를 확인
oligonucleotide probe 소수의 nucleotide를 중합한 핵산 점돌연변이를 검사, PCR 산물의 특이도를 확인 각 돌연변이에 특이적인 oligonucleotide 를 붙여 동일한 방법으로 혼성화한 Line-Probe방법 결과의 해석 돌연변이들의 위치가 너무 가까우면 유전자의 돌연변이가 프로브에 모두 반응할수 있으므로 돌연변이 조합을 모두 조사하여 유전형을 결정
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