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NO assay의 protocol과 원리 LPS(lipopolysaccharide)
- Tool-like receptor 4를 경유하여 식세포에 activating signal을 주고 inducible NO synthease(iNOs)의 발현에 영향을 주어 NO를 많이 합성 할 수 있게 한다. - PLS는 Gram staining(-) Bacteria의 cell wall를 구성하는 성분으로 inflammation에 관련된 pathogen이다. Griess Ragent - Griess Reagent A (N-1-Naphthylethylenediamine)=NEDHC C# : sigma N9125 Griess Reagent B (Sulfanilamide) C#: sigma S 이 시약 A와 B를 동량 섞어서 sup과 1:1 동량 반응 시킨다. 반응원리 NEDHC, Sulfanilamide 그리고 NO2-가 반응하여 Azo coupling을 이루는데 이 두개의 링형태가 (NO 합량이 높을 수록 선홍색을 띄게 됨) 540nM의 파장에서 흡광도 값을 최대를 가진다. 따라서, 이 값을 측정하여 간접적으로 NO의 생성량을 정량하는 것이다. Data에 대한 해석 실험군이 NO 생성능이 많을 경우 inflammation에 반응의 촉매제로써 염증과 관련하여 별다른 효능을 기대할 수 없다.
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