사카자키 및 바실러스균 검사법 국립수의과학검역원 축산물규격과 김영조.

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1 사카자키 및 바실러스균 검사법 국립수의과학검역원 축산물규격과 김영조

2 Ent. Sakazakii 개요 균 명명 배경 - 노란색 색소를 형성하는 Enterobacter
cloacae(yellow-pigmented Ent. cloacae) - Steigerwalt et al.는 Ent. sakazakii가 Etn. cloacae와 유전적으로 다름을 보고(1976) - 새로운 종으로 분류(1980) ※ 일본학자 Riichi sakazakii의 이름을 따서 명명

3 Ent. Sakazakii 개요 균 특성 - Gram 음성 - 간균 - 편모를 갖음 (motile)

4 Ent. Sakazakii 개요 균 특성 - Oxidase 음성 - D-sorbitol 음성
- α-glucosidase 양성(93.0%) - 물, 토양, 동물 장관 등에 정상적으로 존재 ※ 분리빈도는 높지 않음

5 Ent. Sakazakii 개요 관심배경 최초 발생보고 (1929) 영국 St. Albans 발생(1958) 후 주목
1961 ∼ 2002 : 48건 발생보고 · 사망 : 15명, 회복 : 31명, 불명 : 2명 ※ 리콜 · 2002 : 1.5million cans(Wyeth Nutrition) · 2004 : 100million cans(Pregestimil INF)

6 Ent. Sakazakii 개요 관심배경 CODEX에서 논의 제안(미국, 2003)
- 카나다에서 초안 마련하여 Step 4에서 논의 함 FAO/WHO 합동보고서 : 위해도 언급(2004) 2004년에도 지속적인 발생 - 프랑스 : 9명감염(2명 사망) - 뉴질랜드 : 5명감염(1명사망) ※ 치사율이 20∼50%

7 Ent. Sakazakii 개요 관심배경 조제분유는 멸균제품이 아님 - 오염에 의한 검출가능성이 높음 :
141시료에서 20시료 검출(14%) ※ 환경에서 검출 예 Place 갯수 검출 공장 9 8 집 16 5

8 Ent. Sakazakii 개요 미생물위해도 확인에 따른 분류 Category A : 질병발생과 인과관계 분명
- 살모넬라, Enterobacter sakazakii Category B : 질병발생과 인과관계 증명되지 않음 - Enterobacter sakazakii외의 Enterobacteriaceae : Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloacae Category C : 인과관계가 Category B보다 낮음 - Clostridium perfringens, Cl. botulinum, Listeria monocytogenes, Bacillus cereus

9 Ent. Sakazakii 개요 조제분유 생산 공정 Wet mix process : 모든 성분을 액상으로 하여
혼합하고 살균처리 한 후 분말화하는 과정으로 생산 Dry mix process : 각각의 성분을 분말화한 후 혼합하는 과정으로 생산 Combined process : Wet mix process 과정으로 생산한 base에 Dry mix process로 생산한 일부 성분을

10 Ent. Sakazakii 개요 열처리에 대한 오염원인 열에 대한 높은 내성이 높은 오염의 원인(과거)
- 70℃로 조유할 경우 균수가 104배의 감소 ※ 균 종에 따라 열내성이 20배정도의 차이를 나타냄 삼투압에 대한 내성(현재) : - 환경에서 생존율을 높임으로써 재오염의 가능성을 높임

11 Ent. Sakazakii 개요 병인 기회감염의 원인 WHO/FAO 합동 워크샵(2004)
- 내성균이 많이 출현함으로 사람에게서 기회감염 ※ 정상상태에서는 비병원성이나, 어떤 특정한 환경에서 병원성이 됨 WHO/FAO 합동 워크샵(2004) - 1살 미만의 영아가 위험군임 - 특히, 면역결핍아, 2.5kg미만의 저체중아, 미숙아 등이 위험군임 ※ 모든 사람에게 질병을 유발할 수 있음

12 Ent. Sakazakii 개요 감염 영·유아의 증상 패혈증(Septicemia) 뇌막염(Meningitis)
- 혈액에서 세균의 증식 뇌막염(Meningitis) - 뇌막에서 염증 괴사성장염(Necrotizing enterocolitis) - 장 괴사를 이끄는 급성염증반응

13 Ent. Sakazakii 개요 Ent. sakazakii 기준 ※ 2007. 01. 09일부터 시행함 불검출이어야 함
- 조제분유 및 기타조제분유에 한함 - 시료량을 100g으로 하여 검사실시 ※ 일부터 시행함

14 Ent. sakazakii 에 대한 국제기준 국가 기준 검사방법 비 고 EU 0/10g ISO/TS ’06.1.1부터 시행
국가 기준 검사방법 비 고 EU /10g ISO/TS ’06.1.1부터 시행 (n=30) CODEX 없음 제정논의중 0/10g(n=30) 미국 없음 FDA방법 MPN이용 카나다 없음 BAX sys PCR이용 호주 없음 FDA방법변형 뉴질랜드

15 Ent. sakazakii의 생화학적 성상(FDA)
생화학적 시험 E E E. sakazakii cloacae aerogenes Lysine decarboxylase Arginine dihydrolase Ornithine decarboxylase KCN, growth in sucrose dulcitol (-) adonitol (-) raffinose D-sorbitol X-methyl-D-glucoside (+) D-arabitol (-)

16 Chromogenic Enterobacter sakazakii agar 도말
Ent. Sakazakii 검사방법 시료준비 및 전배양 (시료 100g을 900ml DW 접종) 배양액 10ml을 90ml EE Broth에 접종 E. sakazakii medium 및 Chromogenic Enterobacter sakazakii agar 도말 TSA 도말 (yellow pigment 집락) 생화학적 성상시험 36℃에서 18간 배양 36℃에서 18시간 배양 36℃에서 24±2시간 배양

17 B.cereus 개요 균의 특성 The family Bacillaceae Gram-positive, 간균
운동성 (motile) 있음 아포형성 →100℃/40분 생존

18 B.cereus 개요 적정온도: 30 - 40℃ pH range: 5.0-8.8(Opt. pH 6.0-7.0)
Min. Aw: 0.93 편재성 ( Widespread in nature) 호기적 또는 혐기적 조건

19 B.cereus 개요 증상: 설사형과 구토형(12~24h 지속) 감염량: 106 cfu/g
독신생성(heat stable/heat liable toxin) 특별한 치료방법 없음 사람과 사람의 감염은 없음

20 B.cereus 개요 감염원 일반환경 (흙, 공기, 물 등) 동 물 식품 (해산물, 샐러드. 분유 등)
raw, dried or processed food 일반환경 (흙, 공기, 물 등) 동 물 식품 (해산물, 샐러드. 분유 등)

21 B.cereus 개요 오염방지 요리하는 동안 충분한 온도로 가열 요리된 뜨거운 음식은 60℃이상유지 음식의 저장은 4℃이하
요리된 식품과 날것의 교차오염 방지 과일, 채소를 깨끗한 물에 잘 씻음 조리자의 개인위생준수

22 B.cereus 개요 B.cereus 기준 G당 100 이하(멸균제품은 음성) 조제유류 (조제분유, 조제우유, 성장기용
조제분유·우유, 기타조제분유 ·우유,) 시료량은 25g으로하여 실시함 기준 고시됨

23 조제분유에서 B.Cereus의 국제기준 CODEX: 기준 없음 EU: 기준 없음
(일반세균, 대장균군, 살모넬라 기준 있음) EU: 기준 없음 (E.sakazakii, Salmonella.spp 검사) 카나다: n=10, c=1, m=102, M=103 미국(FDA): < 100/g 호주/뉴질랜드: n=5, c=1, m=102, M=103 일본: 기준 없음(100 이하로 자체규제)

24 조제분유에서 B.Cereus의 국제기준 E U 100 cfu/ g Absent in 0.01g Netherlands
Portugal Hungary Poland Switzerland E U 100 cfu/ g Iran Denmark Absent in 0.01g For Powdered Infant Formula Products: B. cereus; n=5, c=2, m=10, M=100

25 B.cereus와 유사균의 생화학적 특징 Catalase + + + motility + + -
생화학적 시험 B.cereus B.thuringiensis B.mycoides Catalase motility Reduction nitrate Tyrosine 분해 Egg yolk reaction Glucose 이용능 VP reaction Heamolysis Toxin enterotoxine enterotoxin 결정체

26 B.Cereus 정성 검사법 시료준비 (시료 25g을 225ml BPD 접종) 균질화한 검액 MYP한천배지에 접종
생화학적 성상시험 30℃에서 24시간 배양

27 B.cereus 정량 검사법 시료준비 (시료 25g을 225ml BPD 접종) 균질화한 검액을 10-2~10-6단계희석
MYP에 희석용액 0.2ml씩 5장 도말 30℃에서 24시간 배양 5개 이상의 의심집락을 선별하여 생화학적 성상시험

28 대 책 생산자 대책 소비자대책(개인위생) 공정에 따른 철저한 위해분석 필요 오염경로 파악 위생관리 철저 Hang time 줄임
- 조유 후 곧바로 수유하고 남은 것은 버림 젖병 및 기기 살균 철저 - 젖병 표면등에 biofilm 형성을 잘 함 70℃ 물로 조유

29 Thank You !