Chap 63. 세포면역기능검사 64. 체액면역 및 면역글로불린검사

Presentation on theme: "Chap 63. 세포면역기능검사 64. 체액면역 및 면역글로불린검사"— Presentation transcript:

1 Chap 63. 세포면역기능검사 64. 체액면역 및 면역글로불린검사
진단검사의학과 강 소 영

2 * 면역검사를 필요로 하는 질환군 1’ immunodeficiency autoimmune disease acquired immunodeficiency 기타 – hemato-oncological dis.,… * Indication 빈번한 세균감염 바이러스에 대한 비정상적인 심한 전신반응 진균 혹은 원충류에 의한 일상적이지 않은 감염 생바이러스 접종에 따른 전신반응 가족내 반복되는 감염력 HIV에 노출된 경우…

3 세포면역기능의 검사 세포면역검사의 단계적 접근 Screening stage CBC/DC Lymphocyte subset
Mitogen/다양한 항원을 통한 시험관내 림프구 활성검사 Ig 2. Confirming stage Radiology (MRI : thymus 크기 검사) Skin test : PPD, C. albicans, Tetanus NK cell 활성도 검사, Th1, Th2 cytokine 생성검사 Immunization에 대한 반응검사 : 연령별 특이항체, 자연항체

4 Lymphocyte subset test
세포면역기능의 검사 Lymphocyte subset test - CD (Cluster of differentiation) 동일한 세포면역 항원을 인지하는 2개 이상의 특이 단클론 항체군 - CD 분자 or CD항원 CD 항체군에 인지되는 세포표면분자 - 유세포분석기 (flow cytometer) 형광색소가 표지된 단클론 항체를 이용한 면역형광법 여러 항원 동시 측정 가능 특정 세포 빈도와 혈액단위부피당 절대수 제공 전혈 (형광염색 후 적혈구 용혈) or 단핵구 (Ficoll-Hypaque 비중원심법으로 분리) 형광염색 형광색소 : FITC, PE, PerCP, APC..

5 세포면역기능의 검사

6 Immunofluorescence 세포면역기능의 검사

7 세포면역기능의 검사 Flow cytometry (FCM)

8 세포면역기능의 검사

9 세포면역기능의 검사 Reversed CD4/CD8 : HIV 양성 환자
: 기타 - DiGeorge syn., 양성갑상선종, HCV infec., 가와사키병, 악성종양, 일부 자가면역질환

10 세포면역기능의 검사 림프구기능검사 Skin test : 지연성 과민반응과정을 통해 전반적인 세포면역계 기능 검사
APC -> T cell로 항원전달, 인지, 증식되어 과민반응을 일으키는 과정 : 과거에 노출되었을 항원 – C. albicans, PPD, Tetanus (영아 – DNCB(dinitrochlorobenzene)) -> 피내주사 24-48시간 후 피부 발적이나 경화를 관찰 : anergy – 면역결핍을 시사하는 소견 : anergy의 원인을 찾을 수 없고, 정량화가 어렵다.

11 림프구기능검사 세포면역기능의 검사 2. Lymphocyte culture 1) Stimulant – Ag or Mitogen
- Ag stimulated lymphocyte culture 지연성 과민반응 피부검사의 in-vitro test에 해당 Candida, tetanus, CMV, HSV, PPD 감작된 T cell만 활성화, 배양기간 5-10일 소요 Mixed lymphocyte culture (MLC) : allogenic lymphocyte – Polyclonal activator stimulated lymphocyte culture Polyclonal activator (or Mitogen) T cell : PHA (phytohemagglutinin), conA (concanavalin A), superAg, anti-CD3 B cell : PWM (pokeweed mitogen) 대다수의 림프구가 활성화 (non-specific) 72hr 배양 세포면역기능의 검사

12 세포면역기능의 검사 림프구기능검사 2. Lymphocyte culture 2) detection
– number of blasts : Microscope - 3H TdR (tritiated thymidine) incorporation assay : 방사선동위원소 양을 측정하여 림프구 증식 정도 판단 - FCM : DNA content (DNA 염색시약 – 세포 주기 분석) : 세포추적염색시약 이용(CFSE, PKH26) : CFSE proliferation assay 친지질성 ester 림프구 세포막 통과 후 세포질내 esterase에 의해 형광에스테르로 분해되어 세포질단백과 공유 결합체 형성 세포 분열시 양이 반으로 줄어 분열증식 측정에 이용

13 세포면역기능의 검사 림프구기능검사 3. NK cell cytotoxicity test
: 51Cr labeled K-562 cell line (CML cell line) 4. Cytokine release assay : mitogen이나 Ag으로 T cell 자극 후 cytokine 생성 측정 : Quantiferon TB : type I cytokine : from Th1 cell, IL-2, IFNr, IL-12 type II cytokine : from Th2 cell, IL-4,5,10, 13, TGFß : 최근 단일세포 수준에서 cytokine을 분비하는 T cell 측정방법도 소개 FCM : intracellular cytokine staining ELISPOT

14

15 ELISPOT

16 체액면역 및 Ig 검사 * 항체 : B cell에 의한 체액면역의 중요물질 : Ig - 정상 성인 혈장 단백의 약 20% 차지
- 혈장 단백질 전기영동 : 가장 천천히 이동하는 γ-globulin region에 위치 * 항체의 구조적 성상 2 Fab (항원결합부위), Fc (C or cell receptor 결합부위) 2 heavy chain, 2 light chain variable region (VH,VL), constant region (CH, CL)

17 체액면역 및 Ig 검사 * 항체의 구조적 성상 heavy chain – 5 isotype ( γ, α, μ, δ, ε ) – 기능결정 light chain – 2 isotype ( κ, λ ) 2개의 동일한 항원결합부위 * Ag-Ab 반응 가역적 반응 Ag-Ab 반응의 강도 : 항원결합부위의 수 affinity affinity (친화력) avidity (결합력) cross link prozone effect

18 체액면역 및 Ig 검사 항체다양성의 유전적 기전 106 – 109 종류의 항체 생산 Ig gene rearrangement & somatic mutation

19 체액면역 및 Ig 검사 Ig의 일반적 성상 Ig M : 일차항체반응, pentamer, 10개 항원 결합부위 (결합력)
Ig G : 이차항체반응, Ig의 대부분 차지, Phagocytosis & ADCC Ig A : 분비물에 존재 Ig E : 가장 낮은 혈청농도, 알레르기반응, 기생충 질환

20 체액면역 및 Ig 검사 Hyperimmunoglobulinemia : polyclonal or monoclonal EP & IFE Normal PEP

21 체액면역 및 Ig 검사 Polyclonal gammopathy

22 체액면역 및 Ig 검사 Monoclonal gammopathy

23 Immunofixation electrophoresis (IFE)
체액면역 및 Ig 검사 Immunofixation electrophoresis (IFE)

24 Immunofixation electrophoresis (IFE)
체액면역 및 Ig 검사 Immunofixation electrophoresis (IFE)