Clostridium difficile 연관 설사 진단을 위한 Toxin A/B immunoassay의 유용성 평가

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1 Clostridium difficile 연관 설사 진단을 위한 Toxin A/B immunoassay의 유용성 평가
미생물파트 박지연

2 Clostridium difficile 임상적 의의
항균제 연관 설사 원인균 중 25% 독소 A와 B를 생성 경미한 설사, 위막성 대장염, 독성 거대결장까지 동반 심한경우 장천공이나 사망까지도 유발 조기 발견 및 치료 필요

3 Clostridium difficile 검사법
세포독성 검사 독소 B 검출의 표준참고 검사 (민감도 94~100%, 특이도 100%) C. difficile 배양검사 대변 검체를 이용한 PCR 독소면역검사법

4 목적 B 독소 생성 C. difficile 변이주 증가 TOX A/B QUIK Chek (Techlab, USA)
면역크로마토그래피법 A와 B독소 동시 검출 TOX A/B QUIK Chek의 유용성 평가

5 방법 기간: ~ 총 1590검체 (1198환자) C. difficile Cx. & TOX A/B → Toxin B PCR 분석 3가지 모두 시행하지 않았거나 중복된 경우 제외한 총 959 검체를 대상으로 결과 분석

6 Clostridium difficile 배양
48시간 배양 Clostridium difficile Selective agar (CDSA, BD) 동정: ATB 32A Vitek ANI

7 MIX 10분 후 판독 TOX A/B QUIK Chek conjugate 한 방울 검체 25ul 희석된 검체 400ul분주
15분 실온 배양 세척액 300ul substrate 2방울 10분 후 판독

8 TOX A/B QUIK Chek 결과 판독

9 결과 Ⅰ + - TOX A/B Culture Toxin B PCR No.(%) 38(4) NT 22(2.3) 42(4.4)
NT 22(2.3) 42(4.4) 25(2.6) 832(86.7)

10 결과 Ⅱ + - 결과 일치율: 93% 민감도: 47.5% 특이도: 97.5% Total 38 22 60 42 857 899
Culture+PCR TOX A/B + - Total 38 22 60 42 857 899 80 879 859 결과 일치율: 93% 민감도: 47.5% 특이도: 97.5%

11 결과 Ⅲ CDSA 배지에서 증식정도에 따른 TOX A/B 양성율 기간: 2006. 9. ~ 2008. 4.
Toxin B PCR + Tox A/B – (%) Tox A/B + (%) Few 26(73) 10(27) Some 15(59) 12(41) Many 36(38) 42(63)

12 고찰 Alcohol-shock 처리 후 배양
방법: 대변과 동량의 alcohol을 섞어 30분 실온 혐기성 상태에서 PEAA & CDSA 접종 기간: ~ 현재 TOX A/B 양성, 배양 음성 2건 Alcohol-shock 처리 후 배양 양성, Toxin B PCR 양성

13 결론 TOX A/B QUIK Chek의 특이도는 97.5%로 높았으나 민감도는 47.5% 낮았음 결과 일치율
TOX A/B QUIK Chek이 음성이라도 C. difficile 연관 설사를 배제가 힘들 것으로 판단 결과 일치율 93% < % 민감도 47.5% < % 특이도 97.5% < %