Introduction to Plant Tissue Culture.

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1 Introduction to Plant Tissue Culture

2 인류의 식량으로서 식물 농업혁명, 녹색혁명 야생식물 재배식물 농업기술발달 : 농업노동자 육종기술발달 비료- 대규모재배
야생식물 재배식물 농업기술발달 : 농업노동자 육종기술발달 비료- 대규모재배 문제: 자원의 다양화 상실 유전자 조작의 안전성문제, 사료

3 Plant tissue Culture

4 식물조직배양 살아있는 식물조직편을 잘라내 무균조건으로 배지에서 무한으로 생육시키는 방법
1980년대 유전자조작을 통하여 식물의 특징을 변형시킬 수 있다는 전망 고부가 가치 유용산물의 생산

5 미소대량증식 micropropagation 모식물(mother plant)조직절편에서 수많은 동일한 복사본식물을 만들어내는 조직배양기술 영양번식이 어렵거나 종자발아가 안되는 경우 DNA 를 삽입하거나 유전자 도입등 식물형질전환기술의 성공을 위하여 식물조직배양이 이용됨

6 Plant Tissue Culture 1) Plant (식물) 2) Tissue (조직) 3) Culture (배양)

7 Plant Tissue Culture의 정의
The culture and maintenance of plant cells or organs in sterile, nutritionally, and environmentally supportive conditions at an in vitro. 식물조직의 일부분 또는 세포를 시험관 내에서 특정 영양분과 환경 조건하에서 무균상태로 배양하여 여러 가지 목적에 따라 이용하는 기술 Plant hormone

8 In Vitro & In Vivo 1) In vitro (시험관 내 실험, Latin: in glass) is performed with cells or biological molecules studied outside their normal biological context; for example proteins are examined in solution, or cells in artificial culture medium. Colloquially called "test tube experiments", these studies in biology and its sub-disciplines are traditionally done in test-tubes, flasks, petri dishes etc., but which now involve the full range of techniques used in molecular biology and larger commercial applications.

9 2) In vivo (동물실험, Latin: within the living) is those in which the effects of various biological entities are tested on whole, living organisms usually animals including humans, and plants as opposed to a partial or dead organism. Examples of investigations in vivo include: the pathogenesis of disease by comparing the effects of bacterial infection with the effects of purified bacterial toxins; the development of antibiotics, antiviral drugs, and new drugs generally; and new surgical procedures.

10 3) 임상 (인체실험) Clinical trials are prospective biomedical or behavioral research studies on human subjects that are designed to answer specific questions about biomedical or behavioral interventions (novel vaccines, drugs, treatments, functional foods, dietary supplements, devices or new ways of using known interventions), generating safety and efficacy data.

11 Plant Tissue Culture의 역사
태동 초창기(auxin 발견 이전) Auxin의 발견 Cytokinin의 발견 동정 생식 개체형성능(전체형성능) 발견 조직배양용 배지의 발달

12 1)태동 Haberlandt-분리된 잎 세포를 긴 기간동안 살아있도록 유지하는데 성공했지만 식물호르몬이 없는 단순한 배지를 사용했기 때문에 세포를 분열시키는 데는 실패 배지에 뭔가 첨가하면 촉진된다? 1930년대 말 auxin이 들어있는 배지에서 미분화된 세포덩어리 Callus 형성

13 캘러스(callus)의 발견 년 Duhamel ( ) : 처음 발견 년 Trecul : 캘러스 현미경사진을 발표 년 Vochting : Brassica rapa의 절편에서 캘러스 획득 -식물의 상처부위에 미분화된 세포덩어리 -얇은 세포벽을 가진 유조직세포 덩어리 -식물조직배양의 출발점

14 Callus Plant callus (plural calluses or calli) is a mass of unorganized parenchyma cells derived from plant tissue (explants) for use in biological research and biotechnology. In plant biology, callus cells are those cells that cover a plant wound. Callus formation is induced from plant tissues after surface sterilization and plating onto in vitro tissue culture medium. Plant growth regulators, such as auxins, cytokinins, and gibberellins, are supplemented into the medium to initiate callus formation or somatic embryogenesis.

15 체세포배발생 Somatic embryogenesis is a process where a plant or embryo is derived from a single somatic cell or group of somatic cells. Somatic embryos are formed from plant cells that are not normally involved in the development of embryos, i.e. ordinary plant tissue.

16 2) 초창기 Auxin 발견 이전 시기 가 Haberlandt : 잎 세포 배양 나. 근단세포 배양 년 White : 토마토의 뿌리 조직배양을 성공 계대배양을 통하여 Virus free 식물조직을 획득 오늘날 말하는 식물 조직 배양의 시초 White는 auxin이 필요하지 않는 담배 캘러스를 만 듬

17 액아의 배양 - 1946년 Ball : 정단분열조직, 즉 정아나 액아로부터 영양 번식이 됨을 밝힘
액아의 배양 년 Ball : 정단분열조직, 즉 정아나 액아로부터 영양 번식이 됨을 밝힘. 후에 미세번식(micropropagation)기술의 아버지라 불림.

18 3) Auxin의 발견 1926년 Went : indole acetic acid(IAA)가 발견
Cytokinin 발견 전 까지 IAA를 활용한 배양 연구 활발

19 4) Cytokinin의 발견 코코넛 밀크를 이용한 식물의 조직 배양 년 Conklin과 Van Overbeek

20 5) 동정생식 1963년 Yamada : 약(anther)배양을 통한 캘러스를 획득 1964년 Guha와 Maheshwari
- 화분(pollen)으로부터 배와 식물체가 형성됨을 관찰 - 전형성능이 체세포뿐만 아니라 반수체 화분세포에도 있음을 발견

21 6) Totipotency 발견 개체형성능, 전체형성능, 분화전능성
- 하나의 기관, 조직, 세포가 개체의 모든 조직, 기관을 구성하는 모든 세포로 분화할 수 있는 능력 - 식물들은 일반적으로 분화 전능성을 가지고 있으며, 동물의 경우 하등동물 또는 고등 동물의 수정란의 경우에만 해당됨.

22 * 전능성, 전체형성능, 전형성능,totipotency
Schwann & Schleiden(1800년대) 세포설 - 1838년 Schleiden : 식물 년 Schwann : 동물 세포가 생물체의 기본, 세포1개가 생물 1개체의 능력세포학설 하나의 세포를 배양하여 완전한 식물체로 재생시킬 수 있다는 개념 1902년 Harberlant가 주장하였으며 식물조직배양은 이 개념을 바탕으로 발전해 왔다. 단세포 혹은 식물 조직 일부분으로부터 완전한 식물체를 재생하는 능력 모든 세포는 전형성능을 지니고 있지만 세포의 분화 정도, 세포의 채취 부위, 배지의 조성, 배양 환경 등에 따라 표현되는 데는 차이가 있다.

23 Totipotency의 과정 기존의 조직 조직배양의 재료 분열조직, 영양조직, 생식조직 등 다양한 조직이 이용됨. 탈분화 조직
Callus 또는 Stem cell 다른 조직의 세포로 분화가 가능함. 개체 Callus가 각 기관 또는 조직으로 재분화 재료가 되었던 개체와 동일한 유전자형을 보유함.

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25 7) 조직배양용 배지의 발달 1893년 Rechinger : 수분을 함유한 모래 -> 식물체 팽창 1902년 Haberlandt : 조직배양 최초 시도 1922년 Kotte : 육추출물 (meat extract)를 이용 1943년 White : 식물조직배양배지에 최초의 무기용액 사용 1946년 Hildebrandt : 고농도의 Na2SO4가 함유된 배지를 제시 1953년 Heller : 식물조직배양배지에 높은 무기염의 중요성 강조 1962년 Murashige와 Skoog는 MS배지를 개발 : 무기물 배지에 auxin과 cytokinin을 첨가한 배지

26 Plant Tissue Culture의 목적
식물의 급속증식 무병주 식물체의 생산 식물 품종개량 인공종자의 생산 유전공학과의 접목 유용물질의 생산 식물 유전자원의 보존

27 1) 식물의 급속증식 - 조직배양은 기본적으로 영양계 식물의 급속한 대량 번식이 목적 - 식물은 삽목, 접목 등의 방법으로 주로 증식 : 식물 종에 따라 증식률이 매우 낮은 것도 있음. 조직배양은 이러한 문제점을 개선할 수 있으며, 유전적으로 균일한 개체를 급속 증식할 수 있음.

28 2)무병주 생산 無病株 disease-free stock: 일반적으로 조직배양 즉, 생장점 배양을 통해서 얻을 수 있는 영양번식체로서 바이러스를 위시하여 조직 특히 도관내에 존재하는 병이 제거된 묘를 말하며, 메리클론(mericlone)이라 칭하기도 함. meri(meristem)와 clone의 합성어임. 분주(分株)나 실생(實生)에서 유래하는 묘와 생장점 배양에서 생육한 묘를 명확히 구별하기 위해 난업계를 중심으로 이용되어 왔음. 메리클론은 일반적으로는 바이러스 등의 병원균의 감염이 적다는 점에서 무병묘의 대명사로 사용하는 경우도 있음. 또 좋은 품질을 가진 식물체를 배양용기 내에서 증식시킨다는 뜻에서 메리클론이라는 용어를 쓰는 경우도 있음. 생장점 배양이나 거기서 유래한 메리클론을 배양에 의해 증식하는 것을 메리클론 배양이라고 함.

29 무병주 생산 Virus 검정 다수의 virus의 경우 유묘에서 병징의 발현이 늦고 재감염의 가능성이 높아 정기적인 검증이 필요
검증방법 육안을 통한 병징 검정 지표식물을 이용한 검정 혈청학적 검정 전자현미경을 이용한 검정

30 무병주(無病柱, Disease-free stock) 식물체의 생산
- 식물의 생장점 조직의 배양을 통해 무병주 생산 가능 - Disease-free, Virus-free 식물체 생산

31 무병주 생산의 필요성 ○ 콩을 제외한 유성번식법에 의해 증식되는 식물의 경우 일반적으로 종자전염이 없음.
○ 무성번식법에 의해 증식되는 식물의 대부분은 한가지 이상의 병원체에 감염되어 있음. ○ 세균과 진균류에 의한 감염은 약제를 통해서 치유 및 통제가 가능함. ○ Virus의 경우 아직 까지 효과적인 치유 방법이나 통제 방법이 없음. ○ Virus 감염으로 인하여 생산량의 70%까지 감소

32 무병주의 증식과 유지 증식 무병주로 확인된 식물체의 증식을 위해서는 격리포장 살균된 토양에서 재배하여 재감염을 막는 것이 중요
유지 및 보관 액체 질소 (-196℃)를 이용한 초저온 저장 2~4℃ 저온시설에서 300lux의 광량으로 1일 8시간을 유지 주의 사항 무병주의 경우 세균과 진균에 대한 감수성이 높아질 수 있음.

33 아 배양 Bud culture 무균상태에서 조직배양 기술을 이용하여 정아(apical bud)나 혹은 액아(axillary bud)로부터 인위적으로 기관을 유도하여 증식하는 방법 활엽수종의 기내배양법으로 가장 상용되는 배양법

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35 부정근 배양 Adventitious root culture
종자의 배에서 유래하는 정단분열조직에 발달하는 뿌리에 비하여 삽목, 삽엽 혹은 조직배양 시에 나타나는 뿌리의 배양 옥신의 나프탈렌아세트산(NAA), 인돌아세트산(IAA), 인돌부티르산(IBA) 등에 의해 부정근 분화가 촉진

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37 3) 식물 품종개량 - 약(anther) 또는 화분(pollen)배양을 이용하여 반수체 육성을 통한 우량식물체 육종
- 원형질체 융합을 통합 종, 속간의 체세포잡종식물체의 획득 - 임목개량을 짧은 시간에 가능케 함.

38 4)인공종자 Artificial Seed 눈 등 식물체의 일부 부정아배양체(부정배)를 친수성 알긴산이나 젤라틴 등을 사용한 캡슐에 담고 그 안에 배의 영양 성분을 넣어 봉입하여 종자처럼 이용할 수 있게 한 것 인공종자의 개념을 최초로 명확하게 한 사람은 Murashige이고, 그 후1980년대에는 부정배의 증식효율이 높아짐에 따라, 1983년에는 미국의 Plant Genetics사(현, Calgene사)가 인공종자 합성에 관한 특허신청을 제출한 것이 시초 인공종자의 장점은 종자가 잘 형성되지 않는 식물이나 우수한 형질의 식물개체를 세포배양 등을 이용하여 대량으로 만드는 것 조직배양 등으로 묘를 생산, 판매하는 방법으로는 묘까지 성장시키는 데 배지의 교환이나 이식 등의 막대한 노력과 시간이 소요됨. 종자처럼 파종만 하면 되는 인공종자가 이러한 문제는 해결해 줌. 현재는 양분과 농약을 첨가할 수 있도록 특수하게 피복막으로 덮거나 부가가치가 큰 인공종자를 많은 종류에 걸쳐 연구개발하고 있음.

39 인공종자의 생산 최초의 시도 1902년 독일의 Haberlandt에 의해 체세포에서 “인공의 배＂를 유도 가능성 확인
1977년 Murashige에 의해 체세포 배를 종자 형태로 유도하면서 상업적으로 이용 가능성이 확인

40 인공종자의 개발 목표 신뢰할 만한 체세포발생 시스템 확보 성숙한 체세포배의 평균적인 발아율 확보
인공종피의 악영향을 막아야 함. 발아시 필요양분의 공급 포장에서 생장 가능성 확보 발아된 식물체의 균일성 확보 최소 1개월간 보관

41 인공종자의 개발현황 수화형 종자: 체세포 배를 수화제와 함께 파종하는 방법
수화제로는 해초에서 추출한 알진산(alginic acid)를 주로 사용 문제점 과다한 수분 노출 시 저장양분이 용출되는 문제점 발생 종자의 보관이 어려움. 종자의 파종에 특수한 기기를 사용해야 함. 수분과 관련된 문제를 해결하고자 capsule을 수화제 외부를 보호 하였으나 capsule 물질이 체세포 배 발아에 악영향을 미쳐 개발에 실패

42 인공종자의 이용 종자번식 식물에 비해 취급이 어려운 영양번식 식물의 취급을 용이하게 할 수 있음.
현재 주요작물의 번식을 빠르게 할 수 있음. 감수분열 과정이 없어 유전적인 희석이 없고 유전자의 조성이 안정적임.

43 인공종자(artificial seed)의 생산
- 식물의 조직 일부분을 배양하여 배상체(embryoid)를 기내에서 대량 증식하여 이들을 각각 피복하여 발아가 가능하도록 만든 인위적인 종자를 생산

44 5)유전공학과의 접목 원형질체 배양 Protoplast culture
원형질체의 단리, 융합, 증식, 선발 및 식물체 재분화 등의 과정을 거쳐 새로운 식물을 만들어 내는 방법 식물의 세포나 callus 배양에 의하여 형성된 세포에서 세포막을 제거하여 원형질체를 분리 배양하여 체세포 잡종을 만드는 데 많이 이용함.

45 유전공학과의 접목 - 유전공학은 미생물을 위시한 고등생물에 이르기까지 상당한 가능성 제시 - 인공적 재조합 유전자를 숙주세포에 도입, 유전자의 발현을 유도하는 기술 접목 - 여러 유전자의 식물세포 도입 가능성 및 발현 여부 검토 - 바이러스와 병해충 저항성, 제초제 저항성, post-harvest에 관여하는 유전자 - 2차 대사 산물 생산 유전자 등의 유용 - 유전자 발현을 통한 품종 개량에 이용

46 6) 유용물질의 생산 - 식물체에서 얻을 수 있는 유용물질 : 향료, 색소, 의약, 농약, 비타민, 호르몬, 효소 등 - 유용 물질을 세포의 기내 배양을 통해 획득 가능

47 7) 식물 유전자원의 보존 - 종자 번식 식물 : 종자를 건조하여 저온 저장함으로써 장기간 보관가능 - 영양 번식 식물 : 보존 어려움 기내 배양을 통해 보관하고 품종 보존

48 Culture Medium

49 배지의 정의 ○ 배양체 (미생물, 식물, 동물 조직 등)의 생장에 필요한 영양물질을 제공하는 영양소의 혼합체
A culture medium (growth medium) is a liquid or gel designed to support the growth of microorganisms or cells, or small plants. There are two major types of growth media: those used for cell culture, which use specific cell types derived from plants or animals, and microbiological culture, which are used for growing microorganisms, such as bacteria or yeast. The most common growth media for microorganisms are nutrient broths and agar plates; specialized media are sometimes required for microorganism and cell culture growth. Some organisms, termed fastidious organisms(잘 안 자라는 세균), require specialized environments due to complex nutritional requirements. Viruses, for example, are obligate intracellular parasites and require a growth medium containing living cells.

50 배지의 기능 및 특성 배지의 기능 ○ 식물의 지지 ○ 수분을 공급 ○ 각종 무기염류 제공 ○ 비타민 등 공급 ○ 생장조절물질의 공급 ○ 가스교환을 위한 환경을 제공 (산소와 이산화탄소의 적절한 순환) ○ 식물로부터 발생되는 대사산물 제거 배지의 특성 ○ 화학적 특성: 산도(pH), 양이온치환능력(CEC) ○ 물리적 특성: 가비중, 공극률, 용수량, 기상, 유효수분함량

51 배지의 조성 1) 무기염류(mineral salts) - 다량요소 - 미량요소 2) 유기원소 - 탄소 및 에너지원 - 기타 유기물 3) 비타민(vitamin) 4) 생장 조절 물질 (Plant Hormone, Plant Growth regulator) 5) 기타 첨가물

52 1) Mineral Salts ○ 탄소(C), 수소(H), 산소(O)를 제외한 식물세포 및 조직배양에 필요한 원소
○ 다량요소(Macro elements): 질소(N), 인산(P), 칼륨(K), 황(S), 칼슘(Ca), 마그네슘(Mg) ○ 미량원소(Micro elements): 나트륨(Na), 망간(Mn), 몰리브덴(Mo), 구리(Cu), 아연(Zn), 붕소(B), 코발트(Co), 철(Fe), 요오드(I)

53 2) PGRs ○ Auxin: 2,4,5-T, CPA, NAA, 2,3-DPA, 2,4-D, TCP, NOA, IAA
○ Cytokinin: Kinetin, 6-BAP, Zeatin, IPA, 2-ip(isopentenyl adenine) 청어정액, 효모, 옥수수, coconut milk(diphenylurea, phenylalanine) ○ Gibberelin(giberrelin acid, GA) ○ Abscisic acid (ABA) ○ Ethylene

54 3) 기타 첨가물 ○ 응고제 (불활성 지지물) ○ 활성탄(activated charcoal)
○ 항생물질(antibiotics)

55 배지의 물리성 ○ 물리적인 상태에 따라 두 가지로 구분 고체배지(solid medium) 액체배지(liquid medium)

56 1) 고체배지 ○ 응고제를 첨가하여 고형화한 상태의 배지
○ 응고제(solidifying agents) 종류: Agar, Agarose, Gelrite, Phytagel 등

57 고체배지의 장단점 ○ 고체배지의 장점 - 배양초기단계 callus 유기 및 유지 증식에 이용 - 산소공급 원활
- 안정된 morphogenesis(형태 형성) ○ 고체배지의 단점 - Nutrient gradient - 접촉면의 산소공급 불량, 갈변화 - 고 페놀성화합물 함유 조직의 사용 불가 - 1% 이상의 농도에서 수분, 영양분, 생장조절제 등의 흡수 방해

58 2) 액체배지 ○ 응고제가 첨가되지 않은 상태의 배지 ○ 두 가지로 분류 - 액체 정치 배지, 액체 진탕 배지
1) 액체정치배지 - 여과지, platform: no nutrient gradient, gas exchange - agar + nurse cell 2) 액체진탕배지 - 가스교환 용이(no nutrient gradient) - 식물체 극성소멸: micropropagation에 용이 - 빠른 성장: 일반 계대배양보다 2배 이상 빨리 계대배양 하여야 함 - reciprocal shaker(gyratory): rpm rotatory drum: 1-20 rpm

59 PGR의 변화 ○ 옥신 : 일반적으로 열에 안정적, 110~120℃, 15 ~ 60min. - IAA :
광, 효소, 식물효소등에 의해 쉽게 파괴, 주의 IAA 용액은 산화작용에 의해 쉽게 불활성화 -> 적색 배지에 망간, citrate, 산소가 존재 시 잘 파괴됨 산성의 pH(4 이하)에서 파괴량 증가 ○ 시토키닌 : 생장조절 물질 중 가장 열에 안정 - kinetin : nm 파장 조사 -> adenine으로 분해 ○ 지베렐린 - 건조 상태 : 안정, 물에 용해 : 가수분해, 고열 : 급격히 분해 - 지베렐린 수용액 : pH 3~4: 약 20일 방치하면 활성도가 50% 감소 121℃에서 20분 멸균 시 : 활성도 90% 감소 - 반드시 여과 살균 : 0.45마이크르 미터 이하의 membrane filter 이용

60 MS 배지의 조제 ① 농축액의 조제 ② 배지의 양과 형태 결정 ③ 농축액의 혼합 ④ pH 조절 ⑤ 배양용기(배양병) ⑥ 멸균
⑦ 분주 및 치상

61 ① 농축액의 조제 MS 배지 조성표를 참고하여 첨가되는 무기화합물 100배, 식물호르몬 100mg/l의 고농축액 조제

62 ② 배지의 양과 형태 결정 실험 계획에 따라 배지의 양과 만들고자 하는 배지의 형태 결정(평판 또는 사면)

63 ③ 농축액의 혼합 농축된 비율에 따라 적당량을 증류수에 희석(교반기를 이용하여 균일하게 혼합하면서 첨가함. 고체배지의 경우 한천을 첨가함.)

64 ④ pH 조절 pH meter를 이용하여 교반기로 혼합하면서 산성용액(알칼리용액)으로 pH5.9로 조정

65 ⑤ 배양용기(배양병) 분주한 후 알루미늄 호일로 밀봉

66 ⑥ 멸균 고압멸균기를 이용하여 멸균한 후 Clean Bench에 보관

67 ⑦ 분주 및 치상 분주는 조직배양을 위해 만든 MS 배지를 배양병에 일정한 양으로 나누는 것(한천이 가라앉지 않도록 잘 저어줌.) 치상(置床)은 조직배양을 위해 절취한 식물조직(외식체, explant)을 배지 위에 심는 것

68 Plant Tissue Culture의 장점
식물증식이 고전 육종방법에 의한 것보다 빠름. 삽목, 접목 등 고전번식 방법으로는 증식이 잘되지 않는 식물 종들의 증식 가능 유전적으로 동일한 개체를 동시에 대량으로 생산 가능 종자의 발아율 향상 특정 조건하에서 식물체 또는 식물체의 일부를 장시간 기내에 보존 가능 Virus-free, 유전공학 및 체세포융합, 우수한 식물 종의 개발, 그리고 다른 기초연구에 많이 사용됨.

69 식물조직배양 기술 이용시 - 생산 조절 : 계획생산 가능 - 품질 유지 - 산물회수 단계 간편 - 새로운 물질을 생산 할 수 있음. (돌연변이 이용)

70 Plant Tissue Culture의 단점

71 공무원 기출문제 1. 포마토, 오레타치 등의 새로운 식물체를 만드는데 이용되는 생명기술은?
① 유전자 재조합 ② 조직배양 ③ 핵이식 ④ 세포융합 ⑤ 유전자 조작 정답) ④ 세포융합

72 원형질체 : 세포벽이 제거된 식물세포 1966년 Cocking : 많은 수의 원형질체를 얻기위해 효소를 이용하여 세포벽을 분해함 다른종과의 원형질체 융합은 체세포잡종 (세포질체 잡종 cybrid)을 만든다 Pomato : 감자와 토마토의 체세포 잡종 1970년대 말 원형질체 융합으로 잘 알려진 예

73 공무원 기출문제 1. 조직배양을 통한 무병주 생산이 산업적으로 이용되고 있는 작물은? (제7회 농산물품질관리사: 원예학개론)
① 상추 ② 옥수수 ③ 딸기 ④ 무 정답) ③ 딸기 2. 반수체 식물이 가장 잘 생길 수 있는 조직배양 방법은? (2003년 종자기사: 식물 육종학) ① 약 배양 ② 배 배양 ③ 생장점 배양 ④ 단세포 배양 정답) ① 약 배양 (Anther Culture: 식물체의 약이나 꽃가루를 채취하여 배양하는 과정으로 반수체(haploid)나 반수성 배(haploidy embryo)를 생산하여 육종연한을 단축시키는 데 그 목적이 있음.)

74 공무원 기출문제 1. 생명 기술의 종류와 특징이 바르게 연결된 것은?
① 유전자 재조합 기술 : DNA 전체를 융합하거나 조작하는 기술이다. ② 세포 융합 기술 : 우수한 가축, 멸종 위기종 등을 복제할 때 이용할 수 있다. ③ 세포 융합 기술 : 품질이 우수하지만 번식력이 약한 생물을 대량 생산할 수 있다. ④ 조직 배양 기술 : 하나의 세포에서 유전적으로 동일한 개체를 다량으로 얻을 수 있다. ⑤ 핵 이식 기술 : 두 세포의 유용한 특징을 동시에 나타내는 신품종을 만드는 가장 좋은 방법이다. 정답) ④ 조직 배양 기술은 생물체를 구성하는 조직 일부나 세포를 분리하여 인공적인 환경에서 증식시키는 기술이다. 유전적으로 같은 개체를 다량으로 얻을 수 있기 때문에 번식력이 약한 생물을 대량으로 생산할 때 이용할 수 있다.