ACL TOP 을 이용한 D-dimer 정량 검사법 소개

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1 ACL TOP 을 이용한 D-dimer 정량 검사법 소개
진단검사의학과 혈액학파트 한 윤 숙

2 D-dimer 란? 교차연결(cross-link)로 형성된 섬유소, 즉 fibrin이 2차 섬유소 용해
(Secondary fibrinolysis) 과정에서 plasmin에 의해 분해될 때 생성 되는 산물 → 두 개의 D-domain으로 연결 섬유소 용해의 지표 D-dimer에 특이적인 단클론성 항체를 사용하여 혈중 농도를 측정 2차 섬유소 용해가 일어나는 대표적인 질환이 파종성 혈관내 응고증 DIC (Disseminated intravascular coagulation) 심근경색、폐경색、정맥 혈전증、 혈전성 혈소판성 자반증 (ＴＴＰ)、용혈성 요독 증후군(ＨＵＳ) 、 각종 혈전질환의 진단 및 추적 관찰에 이용

3 Fibrin 이 D-dimer로의 분해과정
응고 활성인자  Plasminogen tPA ↓ ↙ Fibrinogen → Fibrin  ← Fibrin  ← plasmin ↖UK  D-dimer

4 D-dimer test 1.검사원리 : Monoclonal anti-D-dimer가 부착된 latex 입자를
혈장 내에 있는 D-dimer와 반응 시켜 즉시 육안으로 응집여부를 관찰하는 latex agglutination 법 2. 검사방법 1) Test-kit를 냉장고에서 꺼내 실온에서 30분간 incubation. 2) 환자 검체를 리스트대로 정렬하여 확인. 3) Black test card에 환자의 혈장 원액과 각각의 positive, negative control을 20μl씩 분주. 4) Reagent 1( latex particle , mouse anti-human D-dimer monoclonal Ab) 시약 20 μl 씩 분주. 5)  Mixing rod를 이용하여 well 전체에 골고루 Mix. 6)  3분 동안 well 을 잘 돌려가며 응집 여부 확인. 7) 응집이 있으면 양성, 응집이 없으면 음성으로 판독 .

5 ACL TOP 장비와 시약에 대한 소개

6 ACL TOP 장비와 시약에 대한 소개 Reagents 3 x 2 mL Latex Reagent (lyo)
3 x 8 mL Reaction Buffer 2 x 1 mL Calibrator Wavelength 671 nm 시약 유효기간 (2-8C) Latex: 1 month Buffer: 1 month Stability on board (ACL TOP) Latex: 4 days Buffer: 4 days Calibration Stability 30 days Controls Low Control (about 300 ng/mL) High Control (about 700 ng/mL) Time to result < 5 min

7 Interferences (ACL TOP) none up to:
Detection Limit (ACL TOP) 21 ng/mL Upper limit Normal Range ACL TOP ng/mL FEU(Fibrinogen equvalent Unit) 단위비교 2 FEU= 1ng/mL Linearity ng/mL (Auto rerun off) ng/mL(Auto rerun on) Interferences (ACL TOP) none up to: Bilirubin 18 mg/dL Heamoglobin 500 mg/dL Lipemia 1320 mg/dL Rheumat. Fact. 1400 IU/mL

8 ACL TOP 과 D-di test D-di test P N Total ACLTOP P (>243 ng/mL) 38 29
67 1 21 22 39 50 89 (N=89)   P-N 의 경우 26 검체는 STAgo 에서도 P 3 검체는 Borderline 으로 ACL 에서만 P N-P 의 경우 STAgo 에서도 N N-N 의 경우 STAgo Borderline

9 ACL TOP과 STAgo 장비간 상관성

10 Scoring System for overt DIC
Score 1 2 3 Platelet >100K/uL ≤100K ≤50K Fibrin-related marker <843 ng/mL >1942 PT <18 sec 18-21 ≥21 Fibrinogen >100 mg/dL ≤100 ≥ 5: compatible with overt DIC → daily scoring

11 분 석 정량 검사 장비 모두 다 정성 검사에 비교적 유의한 정확도 높은 농도의 경우 ACLTOP 이 보다 정확한 결과 보고
분 석 정량 검사 장비 모두 다 정성 검사에 비교적 유의한 정확도 높은 농도의 경우 ACLTOP 이 보다 정확한 결과 보고 고농도의 경우 STAgo를 사용하는 영동 세브란스의 경우 Manual Dil. 선행한 후 검사 진행 두 장비 상호간 정확도는 더 높아짐 정성법의 경우 검체의 보관이나 상태에 따라 영향 정성법의 경우 검사자의 주관적인 견해가 개입됨 장비를 이용한 정량 결과가 DIC 질환의 직접적인 marker로 사용

12 ACL TOP 사용의 장점 정량적 보고 자동화 장비 (현 혈액학 파트 내 3대 보유)
신속한 결과 보고 (24시간 가동으로 비정규시간에도 가능) 고농도에서도 측정 가능 시약의 안정성 객관적 결과보고

13 ACL TOP 의 단점 장비 관리상 8시간 마다 두 가지 농도의 Control 물질을 사용하여 daily Q.C
비용 상승의 문제 현 정성 검사 가격 (30% 가산 전): 3,180원 향후 정량 검사 가격 : 7,940원 D-di test 시약 가격: 223,300원 (60T) ACL TOP 시약 가격: 450,000원 (약 100 T) (Control, Cal. 시약에 대한 추가비용 발생 예상)

14 향후 기대효과 및 고찰 응급 검사 가능 (채혈부터 검사까지 이루어지는 시간 단축) 자동화 장비로 인해 정확한 검사 결과 보고
응급 검사 가능 (채혈부터 검사까지 이루어지는 시간 단축) 자동화 장비로 인해 정확한 검사 결과 보고 검사의 신속성 기대 타 병원 검사 결과의 참고 가능 DIC 질환의 직접적 참고 자료 적용 시약, 관리 비용에 따른 검사비 상승 예상 검사별 냉동 보관 절차의 세분화 요구 예상 추후 검사와 장비 관리 교육 후 검사 Set up 예정

15 ↖^^↗ 환절기 감기 조심하세요…..