알레르기 진단을 위한 UniCAP 검사 소개 이원의료재단 학술부

- Uppsala, Sweden 세계 최초 알레르기 in vitro test 1972: 1974: 1995: Phadebas® IgE Test Phadebas RAST® UniCAP® 100 세계 최초 specific IgE test 완전 자동화된 specific IgE test 소개 전세계 50개국 4000개 이상의 검사실에서 사용. 10개 중 7개의 알레르기 검사는 UniCAP으로 검사가 이루어 짐. FDA 규정에 부합한 ISO 9001 인증 획득, GMP 기준 적합 인증 WHO가 인정한 유일한 specific IgE 정량 검사법 다른 알레르기 검사의 성능 평가를 위해 표준 검사로 UniCAP과 비교할 정도로 공인된 검사법

UniCAP®100 / Pharmacia CAP System™ FEIA 시약 분주에서 정보처리까지 전과정 자동화 3시간 이내 결과 자동 프린트 처리시간: 2시간 45분 / run 처리속도: 48 tests / run Sample volume: 40 µl/test Method: 4가지 서로 다른 test를 동시 가능 - Quantitative IgE blood test

검사 항목 <Immunoglobulin E> 1. UniCAP Specific IgE 사람의 혈청에 존재하는 특이 항원에 관한 IgE 항체 profile을 조사함으로써 환자의 알레르기를 일으키는 원인물질 규명 - 진단 : 최선의 치료를 위해 환자의 알레르기를 유발하는 항원 수치 측정 - 예측 : 증상의 유무와 관계없이 IgE 수치로 알레르기 발병 예측 가능 - 모니터링 : 현재 적절한 치료를 받고 있는지 환자 상태 모니터링 2. UniCAP Total IgE : 사람의 혈청 내에 존재하는 총 IgE 농도 측정 - 인체에 순환하는 총 IgE 농도는 대개 알레르기와 연관되어 있음 - 환자의 아토피 상태에 대한 개요 제공 - 직업과 관련된 알레르기의 경우 흔한 유발 항원이 아닐 경우 특별한 알레르기 추적 가능

Solid phase: ImmunoCAP™ Tube passive coating ImmunoCAP Paper disc activated Cellulose foam 1 50 150 Solid phase 3-dimensional cellulose polymer Covalent coupling through CNBr-activation L. Sevéus & A. Sandell, 1992

Calibration Response (RU) IgE (kU/L) 17000 15300 UniCAP® 0.35 0.7 3.5 17.5 50 100 IgE (kU/L) 1700 3400 5100 6800 8500 10200 11900 13600 15300 17000 Response (RU) WHO Reference UniCAP® WHO Standard CAP은 Human serum IgE의 75/502 WHO Standard에 대하여 보정된 표준화된 정량적 결과 제공 IgE 측정 단위 1U = 2.42ng U. Bohman, 1998

Quantitation gives additional information Increased concentration of IgE antibodies = Increased probability of clinical symptoms kUA/L 0.35 0.7 3.5 17.5 50.0 100 >100 Increasing concentration of specific IgE antibodies

ImmunoCAP의 측정 원리 - 환자의 혈액 내 IgE와 ImmunoCAP의 allergen이 반응 ImmunoCAP의 cellulose foam에 Allergen 성분이 코팅 혈청중의 IgE가 Allergen과 결합, Conjugate 첨가 시 Enzyme Anti-IgE가 IgE와 결합 Fluorogenic Substrate와 Enzyme이 반응하여 형광물질 형성, 형광 Response값 측정 후 Standard curve로 농도를 계산 U. Bohman, 1998

Reproducibility of UniCAP® results during one year Evaluation of UniCAP 100 for in vitro Allergy Diagnosis 1 5 9 13 17 21 25 29 33 37 41 45 49 53 57 2 4 6 8 10 12 Assay run number kUA/L d1 d2 e1 e5 Result plots of IgE antibodies to d1, d2, e1 and e5 obtained during one year comprising 60 UniCAP 100 assay runs. Reference: Liappis N et al., Clin Lab 1999; 45: 229-235

Retesting sera from 1987 with UniCAP100 in 1995 .1 Pharmacia CAP System kU A /L 1987 UniCAP /L 1995 y = 0.32 + 1.12x R =0.96 PW Ewan Correlation of concentrations of allergen-specific IgE measured in Pharmacia CAP System in 1987 and in UniCAP in 1995 by retesting of the same serum samples after storage at -20 °C Paganelli R et al. Specific IgE antibodies in the diagnosis of atopic disease. Clinical evaluation of a new in vitro test system, UniCAP®, in six European clinics. Allergy 1998; 53: 763-768

The conventional way to present clinical validity Sensitivity 89% Specificity 91% UniCAP® Specific IgE Dr’s conclusion Positive Negative Total Positive 1121 144 1265 Negative 360 3545 3905 Total 1481 3689 5170 The clinical performance of UniCAP Specific IgE was documented in clinical trials in six countries, Italy, Spain, Germany, The Netherlands, Sweden and Great Britain, on 894 patients with unspected allergy. Clinical sensitivity and sensitivity were calculated as agreement between the test result and a specialist diagnosis based on the established diagnostic routines of the clinic. Paganelli R et al., Allergy 1998; 53: 763-8

Probability for clinical symptoms Doctor’s conclusion of allergy vs. IgE antibody value 100 80 90 70 60 50 40 30 20 10 0.35 0.7 3.5 17.5 Mite Cat Dog Probability IgE antibody concentration (kUA/L) Adapted from Paganelli R et al., Allergy 1998;53:763-8 by Ahlstedt S, Clin Exp Allergy 2002;32:11-16

Levels of IgE antibodies - as suggested decision levels for challenge kUA/L 90% Probability of negative reaction 95% Probability of positive reaction Neg 5.0 10.0 20.0 40.0 15.0 0.6 1.0 0.35 30.0 50.0 Egg 6.0 32.0 Milk Peanut Fish Children with severe atopic dermatitis, mean age 5.2 years, median tot IgE 3000 kU/L Reference: Calculated from Sampson and Ho, J Allergy Clin Immunol 1997; 100: 444-51

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