Chap 63. 세포면역기능검사 64. 체액면역 및 면역글로불린검사 진단검사의학과 강 소 영

* 면역검사를 필요로 하는 질환군 1’ immunodeficiency autoimmune disease acquired immunodeficiency 기타 – hemato-oncological dis.,… * Indication 빈번한 세균감염 바이러스에 대한 비정상적인 심한 전신반응 진균 혹은 원충류에 의한 일상적이지 않은 감염 생바이러스 접종에 따른 전신반응 가족내 반복되는 감염력 HIV에 노출된 경우…

세포면역기능의 검사 세포면역검사의 단계적 접근 Screening stage CBC/DC Lymphocyte subset Mitogen/다양한 항원을 통한 시험관내 림프구 활성검사 Ig 2. Confirming stage Radiology (MRI : thymus 크기 검사) Skin test : PPD, C. albicans, Tetanus NK cell 활성도 검사, Th1, Th2 cytokine 생성검사 Immunization에 대한 반응검사 : 연령별 특이항체, 자연항체

Lymphocyte subset test 세포면역기능의 검사 Lymphocyte subset test - CD (Cluster of differentiation) 동일한 세포면역 항원을 인지하는 2개 이상의 특이 단클론 항체군 - CD 분자 or CD항원 CD 항체군에 인지되는 세포표면분자 - 유세포분석기 (flow cytometer) 형광색소가 표지된 단클론 항체를 이용한 면역형광법 여러 항원 동시 측정 가능 특정 세포 빈도와 혈액단위부피당 절대수 제공 전혈 (형광염색 후 적혈구 용혈) or 단핵구 (Ficoll-Hypaque 비중원심법으로 분리) 형광염색 형광색소 : FITC, PE, PerCP, APC..

세포면역기능의 검사

Immunofluorescence 세포면역기능의 검사

세포면역기능의 검사 Flow cytometry (FCM)

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세포면역기능의 검사 Reversed CD4/CD8 : HIV 양성 환자 : 기타 - DiGeorge syn., 양성갑상선종, HCV infec., 가와사키병, 악성종양, 일부 자가면역질환

세포면역기능의 검사 림프구기능검사 Skin test : 지연성 과민반응과정을 통해 전반적인 세포면역계 기능 검사 APC -> T cell로 항원전달, 인지, 증식되어 과민반응을 일으키는 과정 : 과거에 노출되었을 항원 – C. albicans, PPD, Tetanus (영아 – DNCB(dinitrochlorobenzene)) -> 피내주사 24-48시간 후 피부 발적이나 경화를 관찰 : anergy – 면역결핍을 시사하는 소견 : anergy의 원인을 찾을 수 없고, 정량화가 어렵다.

림프구기능검사 세포면역기능의 검사 2. Lymphocyte culture 1) Stimulant – Ag or Mitogen - Ag stimulated lymphocyte culture 지연성 과민반응 피부검사의 in-vitro test에 해당 Candida, tetanus, CMV, HSV, PPD 감작된 T cell만 활성화, 배양기간 5-10일 소요 Mixed lymphocyte culture (MLC) : allogenic lymphocyte – Polyclonal activator stimulated lymphocyte culture Polyclonal activator (or Mitogen) T cell : PHA (phytohemagglutinin), conA (concanavalin A), superAg, anti-CD3 B cell : PWM (pokeweed mitogen) 대다수의 림프구가 활성화 (non-specific) 72hr 배양 세포면역기능의 검사

세포면역기능의 검사 림프구기능검사 2. Lymphocyte culture 2) detection – number of blasts : Microscope - 3H TdR (tritiated thymidine) incorporation assay : 방사선동위원소 양을 측정하여 림프구 증식 정도 판단 - FCM : DNA content (DNA 염색시약 – 세포 주기 분석) : 세포추적염색시약 이용(CFSE, PKH26) : CFSE proliferation assay 친지질성 ester 림프구 세포막 통과 후 세포질내 esterase에 의해 형광에스테르로 분해되어 세포질단백과 공유 결합체 형성 세포 분열시 양이 반으로 줄어 분열증식 측정에 이용

세포면역기능의 검사 림프구기능검사 3. NK cell cytotoxicity test : 51Cr labeled K-562 cell line (CML cell line) 4. Cytokine release assay : mitogen이나 Ag으로 T cell 자극 후 cytokine 생성 측정 : Quantiferon TB : type I cytokine : from Th1 cell, IL-2, IFNr, IL-12 type II cytokine : from Th2 cell, IL-4,5,10, 13, TGFß : 최근 단일세포 수준에서 cytokine을 분비하는 T cell 측정방법도 소개 FCM : intracellular cytokine staining ELISPOT

ELISPOT

체액면역 및 Ig 검사 * 항체 : B cell에 의한 체액면역의 중요물질 : Ig - 정상 성인 혈장 단백의 약 20% 차지 - 혈장 단백질 전기영동 : 가장 천천히 이동하는 γ-globulin region에 위치 * 항체의 구조적 성상 2 Fab (항원결합부위), Fc (C or cell receptor 결합부위) 2 heavy chain, 2 light chain variable region (VH,VL), constant region (CH, CL)

체액면역 및 Ig 검사 * 항체의 구조적 성상 heavy chain – 5 isotype ( γ, α, μ, δ, ε ) – 기능결정 light chain – 2 isotype ( κ, λ ) 2개의 동일한 항원결합부위 * Ag-Ab 반응 가역적 반응 Ag-Ab 반응의 강도 : 항원결합부위의 수 affinity affinity (친화력) avidity (결합력) cross link prozone effect

체액면역 및 Ig 검사 항체다양성의 유전적 기전 106 – 109 종류의 항체 생산 Ig gene rearrangement & somatic mutation

체액면역 및 Ig 검사 Ig의 일반적 성상 Ig M : 일차항체반응, pentamer, 10개 항원 결합부위 (결합력) Ig G : 이차항체반응, Ig의 대부분 차지, Phagocytosis & ADCC Ig A : 분비물에 존재 Ig E : 가장 낮은 혈청농도, 알레르기반응, 기생충 질환

체액면역 및 Ig 검사 Hyperimmunoglobulinemia : polyclonal or monoclonal EP & IFE Normal PEP

체액면역 및 Ig 검사 Polyclonal gammopathy

체액면역 및 Ig 검사 Monoclonal gammopathy

Immunofixation electrophoresis (IFE) 체액면역 및 Ig 검사 Immunofixation electrophoresis (IFE)

Immunofixation electrophoresis (IFE) 체액면역 및 Ig 검사 Immunofixation electrophoresis (IFE)