Western blot
지난 주 실험 개요 Western blot Cell harvest Gel electrophoresis (SDS PAGE) Cell lysis 단백질 정량 (Sampling) Gel electrophoresis (SDS PAGE) Transfer Blocking
실험 개요 Primary, secondary antibody incubation Developing (using film)
Introduction Membrane으로 transfer한 단백질을 Film 또는 chemi-doc를 통해 단백질의 양을 상대적으로 측정하는 과정
Introduction
Introduction Primary antibody Secondary antibody
Materials & Methods Primary incubation TBS-T wash 5min, 3 times A B Secondary antibody incubation for 1hour 30mins ECL A, B 를 각각 200ul를 E-tube에 섞는다. 랩에 membrane을 올려 놓고 ECL을 뿌려 놓는다. Chemi-doc으로 측정 A B Shaking incubator
Result ① ② ??kDa → →CPT1 ??kDa → →β-actin marker control WY 1.083 dosage 실험 결과 SDS-PAGE OD (y값) ug/ul (x값) X = (y-0.0732)/0.0583 로딩량 (uL) /30ug 30/x값 5X loding dye DW (or RIPA) 총볼륨 =20uL A 1.083 17.32075 1.7 4 14.3 20 B 0.689 10.56261 2.8 13.2 ② marker control WY ??kDa → →CPT1 Bradford 용액 ??kDa → →β-actin
Discussion Q. Lowry method, Bradford method에 대해 알아보세요 실험결과 해석 및 고찰
Report 12+13+14 12/7 5시 까지 제출