Section 1-11 염색 (Staining).

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1 Section 1-11 염색 (Staining)

2 염색의 필요성 생체나 고정상태의 세포는 구성성분이나 세포간 물질이 투명한 상태이며 각 성분들 간의 굴절률의 차이가 없으므로 검경 시 각 세포 구성 성분의 구별이 어렵기 때문에 염료(dye)를 사용하여 세포의 구성 성분을 가시화 시키는 일인 염색(stain)이 필요 Staining(염색)은 microscopic image에서 contrast (대비)를 증가시키는데 이용되는 보조 기술 Stain

3 Dye (염료) 염료의 화학적 구성 벤젠(benzene)
Benzene 고리는 C6H6의 분자식으로 이루어진 방향족 유기 화합물이며, 다른 기(radical)와 치환반응을 하여 새 화합물을 생성 benzene 분자에서 2개의 수소원자가 2개의 산소 원자로 치환되면 벤젠 고리 내 원자결합 (이중결합)의 재배열이 일어나 quinone 이라는 새로운 화합물 (quinoid compound)이 된다. Dye (염료)

4 Dye (염료) 염료의 화학적 구성 발색단 (chromophores)
색을 내는 염료에는 이중결합을 하고 있으며, 방향족 유기화합물인 불포화 결합을 가지는 특정 원자단 발색단만 가지고 있는 화합물로 조직을 염색하면 일시적으로 염색이 된 것처럼 보이나 수세에 의해 곧 제거되기 때문에 발색단을 갖고 있다고 해도 모두 염료는 아니다. 발색단의 종류 ethylene 기(>C=C<), ketone (carbonyl) 기(>C=O), thiocarbonyl 기(>C=S), azo 기 (-N=N-), nitro 기 (-N=O), oxy-azo 기(-N=N-), quinone ring Dye (염료)

5 Dye (염료) 염료의 화학적 구성 색원체(chromogen)
착색된 색원체는 저항성이 없어 수세를 하면 쉽게 제거된다. Dye (염료)

6 Dye (염료) 염료의 화학적 구성 조색단(auxochrome)
색원체가 발색단에 의해 색을 나타내기는 하지만 염료가 되기 위해 조직과 친화력이 있는 제 2의 기를 필요로 하는데 이를 조색단이라 한다. 조색단 자체는 색을 내지 않으며 다만 염료에 전해 능력을 부여하여 수용액에서 해리되어 색소가 조직에 잘 결합할 수 있게 한다. 조색단의 종류 amino 기(-NH2), hydroxyl 기(-OH), carboxyl 기(-COOH), sulfon산 기(-SO3H), 치환 amino 기(-N(R2)) Dye (염료)

7 Dye (염료) 염료의 화학적 구성 염료 색을 나타내는 발색단과 조직성분과 결합능력을 갖는 조색단을 갖고 있는 유기화합물
염료 = 벤젠 + 발색단 + 조색단 Dye (염료)

8 Dye (염료) 염료의 화학적 구성 Leuco compounds (백색염기)
대부분의 발색단은 분해되어 수소와 결합하여 단일결합으로 변하는 환원과정으로 인해 발색단이 파괴되어 색을 상실하게 되는데 이를 leucobase (백색염기)라 한다. PAS 염색에 이용되는 Schiff reagent 가 대표적 예이다. Dye (염료)

9 Dye (염료) 염료의 화학적 구성 매염제 (mordants)
염료와 조직 사이를 연결하여 염색이 가능하도록 조력하는 물질 (조직과 염색액 사이에 요철형) 매염제는 먼저 염료와 결합하여 “lake (dye + mordant)”라 부르는 화합물을 형성하며 자체로는 색이 매우 약하여 염색으로서의 가치는 없지만 이런 상태의 화합물은 조직에 강하게 부착 일반염색에 사용되는 hematoxylin 용액은 alum (NH4, K)이 매염제로 사용되고, 미생물 염색 중 Gram 염색은 iodine을 매염제로 사용 조직화학에서 일반적으로 사용되는 매염제는 chromium, aluminium, iron, sulfate 염 Dye (염료)

10 Dye (염료) 염료의 화학적 구성 염색 강화제 (accentuators, 염색 보강제 )
매염제와 같이 어떤 분명한 화학적 결합을 하는 것이 아니고, 선택성을 증가 시키거나 염료의 염색능력을 증가하여 현색시키는 물질 함께 사용하는 염색의 염색능을 높이는 역할을 하지만 염료와 lake를 만들지 못하며, 또 조직과도 화학적으로 결합하지 않는다. methylene blue 용액에 포함되는 patassium hydroxide이나 carbol fuchsin에 들어가는 phenol 등 Dye (염료)

11 염료의 분류 천연염료 (natural dyes) Hematoxylin
Mexico의 Campeche 지방에서 자라는 logwood tree의 나무껍질에서 추출되는 연한 갈색 염료 염색할 때에는 염료 자체가 염색능력이 없고 자연산화나 화학적인 산화에 의해 hematein으로 전환되어야 염료로서의 기능인 염색능력을 갖게 되고 조직과의 친화력이 약하므로 염색 시 매염제와 결합시켜 사용 염색액을 제조 시 hematein으로 전환시켜 주어야 하며 염색용액 제조시 염색능력을 갖게 하는 과정을 숙성(ripening) 또는 산화시킨다고 한다. 주로 핵염색에 이용 염료의 분류

12 천연염료 (natural dyes) Hematoxylin 염료의 분류

13 염료의 분류 천연염료 (natural dyes) Indigo
가장 오래된 염료로서 '염료의 제왕‘이라 하며, 남옥(indogofera)속의 식물로부터 얻어지는 푸른색 염료 근래에는 인공적으로 합성이 가능 생물학적으로 원형질과 광견병 환자의 신경세포 Negri 소체(Negri body)의 염색에 이용 Cocchineal과 그 유도체 (Carmine) 중남미 선인장에서 번식하는 연지벌레 암컷의 체부를 건조시켜 추출된 cocchineal을 alum으로 처리하여 만든 양홍염료 당원, 점액질 등의 염색에 이용 염료의 분류

14 염료의 분류 천연염료 (natural dyes) Orcein
지의류(이끼식물) 식물인 Lecanora tinctoria와 Rocella tinctoria 속에 존재하는 lecanoric acid를 추출 처리 탄력섬유와 성염색질 소체 (sex chromatin body)의 증명과 B형 간염의 virus 봉입체(HBs Ag)를 증명할 때 사용 Saffron Crocus (Saffron속 붓꽃과의 일종)꽃에서 추출된 노란색의 천연염료 alcohol 용해성이 있으며 세포질 및 원형질 염색에 이용 염료의 분류

15 염료의 분류 인공합성염료 (artifical dyes, synthetic dyes)
산성염료 (acid dyes, anionic dyes) 유색인 염기의 염(보통 sodium 염)으로 염료가 수용액에 해리되어 염료분자의 발색단과 조색단이 염료분자의 음이온 쪽에 위치 Na+ - (Chromogen + Auxochrome) - alcohol보다 물에 녹기 쉽고 세포질과 같은 염기성을 띠는 세포 성분의 염색에 적합 eosin Y, light green, erythrosine, picric acid, acid fuchsin 등 OH, COOH, NO2 및 SO2OH 등의 원자기를 가지고, carboxylic acid 나 sulfurous acid의 sodium 염의 형을 가지고 있다. 염료의 분류

16 염료의 분류 인공합성염료 (artifical dyes, synthetic dyes)
염기성 염료 (basic dyes, cationic dyes) 유색인 염기의 염(보통 chloride, sulfate, acetate 염)으로 염료가 수용액에 해리되어 발색단과 조색단이 염료분자의 양이온 쪽에 위치 (Chromogen + Auxochrome) + -Cl- alcohol에 쉽게 녹고 수분에는 잘 녹지 않으며, NH2, NHCH3, N(CH3)2 및 NH 등의 원자기를 가진다. 핵염색에 많이 이용 basic fuchsin, methyl blue, methyl green, thionine, toluidine blue 등 염료의 분류

17 염료의 분류 인공합성염료 (artifical dyes, synthetic dyes) 중성염료 (neutral dyes)
한 염료분자 내에 두 종류의 발색단 (산성염료와 염기성염료)을 가지고 있어서 두 종류의 다른 색을 나타내는 유색염료 중성염색법을 최초로 개발한 사람은 러시아의 Romanowsky이며, 염료는 polychrome methylene blue와 eosin이 혼합된 형태로 혈구염색에 널리 사용 혈액학에서 사용되는 Wright 염색이나 Giemsa 염색, neutral red와 light green 혼합용액 등이 대표적인 중성염색법 염료의 분류

18 염료의 분류 인공합성염료 (artifical dyes, synthetic dyes)
양성염료 (amphoteric dye, 혼합염색) 염료분자가 양(+)으로 하전될 수 있는 기와 음으로 하전될 수 있는 기를 가진 염료 용액의 pH 상태에 따라 양이온성 염료 (염기성 염료) 또는 음이온성 염료 (산성염료)로 기능할 수 있는 염료 carmine을 수순 정제한 carminic acid는 등전점이 약 pH 4.5인 양성염료로서, 용매가 알칼리인 경우 음(-)으로 하전되며, 산성인 경우 양(+)으로 하전 염료의 분류

19 염료의 분류 Colour index Number (CIN) Direct Fast Scarlet 4BS 관칭 형용사 색상명 기호
관칭 형용사 색상명 기호 염료의 명칭, 구조, 성질, 기타에 관하여 S.D.C (The Society of Dyers & Colourists. England)와 A.T.C.C (The American of Textile Chemists & Colourists. U.S.A)에서 공동 출판하고 있는 염료색인 (colour index)을 이용 동일한 염료는 회사명 (염료명)이 다르더라도 일련번호로 통일되어 있으며 C.I Name 혹은 C.I Number라고 한다. 염료의 분류

20 Colour index Number 염료의 분류

21 염색의 원리 물리적 염색작용 염료의 분산도와 농도 및 조직의 구성밀도 (pore size)가 중요
지방염색에 사용되는 수단염료(예> sudan Ⅲ)와 같은 무극성염료(indifferent dye)는 물리적인 과정 특히 그 분산력에 의해 지방 속으로 녹아 들어가는 것 염색의 원리

22 염색의 원리 물리적 염색작용 용해성 반응(solubility, absortion)
조직 성분에 녹는 염료를 통상 용해성 염료 (lysochrome)라 부르며 그 대부분은 지용성 성질을 갖고 있어서 조직 내의 지질 증명시 빈번하게 사용 지방염색에서 염료인 oil red O 처럼 용매로 쓰이는 propylene glycol은 염료가 녹아 있는 상태에서 지방질을 접촉하면 용매에 녹을수 있는 한계보다 더 확산되어 용해되는 성질이 있고 이 과정에서 염색액 내의 색소가 용매보다 지방에 잘 녹아 색소가 이행되어 발색되는 성질을 이용 염색의 원리

23 염색의 원리 물리적 염색작용 흡착성 반응(absorption)
큰 물질이 조그마한 일부분을 유인하여 끌어 붙이는 것으로, 염료의 일부분이 세포에 침전된 어떠한 물질(조직)에 침투되거나, 세포의 성분으로 화합되는 상태 hematoxylin 용액은 alum이나 aluminium sulfate를 가하여 양(+)으로 대전한 염기성 색소로서 강하게 음(-)으로 대전한 핵이나 연골기질을 염색 용매의 수소 ion 농도(pH)에 따라 조직의 대전성이 변화하며, 염색성도 변화 염색의 원리

24 염색의 원리 물리적 염색작용 이염색성 반응, 변색성 염색(metachromasia)
조직구성분 중 어떤 물질은 특정 염료와 결합할 때 원래 염료가 지닌 고유의 색과는 다르게 발색되어 그 주변에 염색된 다른 성분들과 구별되는 경우 조직의 점액(mucin) 성분은 toluidine blue 염료에 적색으로 염색되고 나머지 구성성분은 염료 자신의 색인 청색으로 염색 이런 특성의 염료를 변색성 또는 이염색성 염료라 하고, 변색성 염료의 색을 변화시키는 성분을 변색성물질 또는 향색소라 한다. 염색의 원리

25 염색의 원리 물리적 염색작용 이염색성 반응, 변색성 염색(metachromasia) 이염색성 조직성분 이염색성 염료
점액(sulfated mucopolysaccharide), 유전분, 연골(cartilage), 비만세포(mast cell) 과립, 핵산 복합체, hyaluronic acid 이염색성 염료 methylene blue, thionin, toluidin blue, bismark brown, safranin, crystal violet, methyl violet, azure 이염색성 반응은 불안정하여 탈수제로 처리하면 잘 없어지므로 수용성 봉입제를 이용 염료가 조직에 친화력으로 인한 굴절률의 차가 발생하여 변색 염색의 원리

26 Staining principle - physical

27 화학적 염색작용 염료가 조직성분과 결합하기 위해서는 가장 흔한 결합방식으로 이온결합 (정전기적 결합), van der waals forces, 수소결합, 공유결합 (covalent bonding)이 관여 이온결합에 의한 염색 염료가 조직성분과 결합하여 불용성의 염(salt)을 형성 염료는 염색액 내에서 양이온 또는 음이온으로 이온화되어 단백질 및 기타 성분들과 결합하여 유색의 화합물을 형성 염기성 염료는 일정한 pH 범위내에서 양(+)으로, 산성염료는 음(-)으로 하전 양성염료는 염료의 등전점 이하의 pH에서는 양(+)으로 이상의 pH 에서는 음 (-)으로 하전 염색의 원리

28 염색의 원리 금속염의 주입법 (metalic impregnation)
조직의 구성 성분과 세포 주위에 다량의 금속염(metal salt)이 침투되었을 경우, 염료가 가진 조염기성과 결합하여 불용성의 염을 만들고, 색조를 얻는 것 도은법에 의한 reticulum 염색은 ammonical silver 착염의 염색용액을 만들어 금속염에 도은(silvering)하여 조색하는 방법 염색의 원리

29 염색 반응에 영향을 주는 요인 염색액의 이온강도 염료 및 염색액의 농도와 절편의 두께 염색의 온도
염색액 이온강도가 높을수록 특정 조직성분의 염색 강도는 증가 염료 및 염색액의 농도와 절편의 두께 염색액의 농도가 높을수록 염색반응이 강하나 염료가 결합할 수 있는 binding site의 수와 이미 결합된 염료분자의 수에 의해 제한 염색의 온도 온도의 상승은 염색용액의 확산력을 높이며, 단백질 구조 사이를 이완시켜 염료의 침투율을 증가 염색 반응에 영향을 주는 요인

30 염색 반응에 영향을 주는 요인 조직화학성분과 염료가 반응하는 외부환경의 pH (염색액의 pH) 조직화학성분의 이온화의 양
조직의 고정 정도 고정액에 의한 단백질 구조의 변화는 화학적으로 염료가 조직에 염료 친화성이 있게 할 뿐만 아니라 조직성분의 투과성을 변화시켜 염료의 침투율을 증가 또는 감소시키기도 한다. 염색 반응에 영향을 주는 요인

31 Application of staining
생체염색(vital stain) 살아있는 동물이나 세포에 시행하는 염색형식 탐식세포의 식작용 (phagocytosis)과 같은 세포의 기능을 확인하거나 세포질 내 특정 성분을 염색하는데 사용 이미 고정된 조질절편은 사용할 수 없다. Application of staining

32 Application of staining
생체염색(vital stain) 종류 생체내 염색(intravital staining) 생물체 내로 특수 염료를 주입한 다음 염색된 조직편을 절제한 후 표본을 제작하여 염색하는 방법 생체에는 무독성이며 주사용 멸균증류수에 용해된 교질상태의 용액 trypan blue 및 trypan red 수용액과 india ink를 사용 Application of staining

33 Application of staining
생체염색(vital stain) 종류 초생체 염색(supravital staining) 살아있는 세포를 분리하여 염색액 속에 넣어 염색하는 방법 염료의 조건은 모든 세포 및 조직에 침투할 수 있고, 세포내에 침투하여 세포를 죽이지 않고 원형질로 확산되어 세포내에 존재하는 특정 세포 포함물 (cell inclusions)에 착색되어야 할 뿐 아니라 세포의 주위나 세포들 사이에서 특이한 세포를 보다 뚜렷이 구별할 수 있는 강한 염착능을 보유 methylene blue, Janus green B, neutral red Application of staining

34 Application of staining to fixed tissue
단순염색 (simple stain) 염료를 단순히 물이나 alcohol에 용해시킨 염색액으로 조직성분의 염료에 대한 친화력의 차이를 이용한 가장 기본적인 염색법 동결박절법을 이용하여 표본을 제작할 때, 염기성 염료인 methylene blue를 단지 증류수에 용해하여 만든 0.2% 수용액으로 절편한 조직을 염색하여 핵은 청색으로, 염기성 염료에 친화력이 약한 세포질과 세포간의 물질 등은 옅은 색으로 나타나는 염색법 Application of staining to fixed tissue

35 Application of staining to fixed tissue
직접염색(direct staining) 매염제(mordant)를 이용하지 않고 직접 조직의 특정성분을 염색 조직의 밀도가 염료의 흡수를 조절하는 중요한 요인 congo red, sirius red 등 Application of staining to fixed tissue

36 Application of staining to fixed tissue
매염제 (mordants)를 이용한 염색 간접염색(indirect staining) 염료와 매염제가 결합함으로써 염료의 색이 더 짙은 화합물, 즉 lake를 만들어 조직과 결합하면 조직-매염제-염료 복합체를 형성 매염 염료는 hematein, celestine blue B(mordant blue 14), alizaline red S(mordant red 13) 등 Application of staining to fixed tissue

37 Application of staining to fixed tissue
금속 침투법 금속염(salts of heavy metals)을 이용하는 염색 주로 질산은(AgNO3)을 많이 이용하는데, 질산은을 증류수에 용해하면 유리되는 은이온(silver ion, Ag+)을 염색과정에 이용 은이온을 이용하는 금속 침투법을 도은법(silver impregnation) 도은법의 종류 호은성 반응(argyrophilic reaction) 은환원성 반응(argentaffin reaction) 유도성 은환원성 반응(induced argentaffin reaction) Application of staining to fixed tissue

38 Application of staining to fixed tissue
금속 침투법 호은성 반응(argyrophilic reaction) 암모니아성 은을 직접 환원시킬 수 없지만, 외부에서 developer를 첨가해 주면 환원이 되어 색상이 나타나게 하는 방법 세망섬유나 Helicobacter pylori 검출 시 사용 Application of staining to fixed tissue

39 Application of staining to fixed tissue
금속 침투법 은환원성 반응(argentaffin reaction) 조직 내에 어떤 성분은 은이온과 결합하면서 동시에 은이온을 환원시킬 수 있는 능력이 있어 발색을 하는 developer를 첨가할 필요가 없다. 멜라닌과 같은 타이로신 유도체 등을 검출 Application of staining to fixed tissue

40 Application of staining to fixed tissue
금속 침투법 유도성 은환원성 반응(induced argentaffin reaction) 조직성분을 인위적으로 은이온을 환원시킬 수 있는 상태로 전환시킨 다음 (산화를 하여 aldehyde 기를 유리) 은이온을 반응시키는 방법 진균이나 기저막의 검출에 사용되는 도은법 Application of staining to fixed tissue

41 Application of staining to fixed tissue
혼합염색 하나의 용액에 여러 종류의 염료를 혼합한 염색용액으로 조직을 염색 조직성분의 염료에 대한 친화력의 정도에 따라 각각 다른 색으로 구분되어 염색되는 형식 van Gieson 염색용액이 대표적 하나의 염색용액에 산성염료인 picric acid와 acid fuchsin을 혼합하여 각각 근섬유와 아교섬유를 노란색과 적색으로 구분 Application of staining to fixed tissue

42 Progression processing
진행성 염색 (progressive staining) 조직의 여러 구성성분을 정해진 순서에 따라 차례로 염색하고, 과염색된 부분을 수세로 제거하여 미세구조를 잘 관찰할 수 있도록 감별해 주는 염색 여러 시점에서 현미경으로 관찰해가면서 염색 정도를 판정하여 적당한 수준에서 그 과정을 정지시켜 수세하는 방법 Mayer's hematoxylin 핵염색, Gill’s hematoxylin 핵염색 Progression processing

43 Progression processing
진행성 염색 (progressive staining) Progression processing

44 Progression processing
퇴행성 염색 (regressive staining) 섬세하고 예민한 염색결과를 필요로 할 때 사용하는 염색 형식 먼저 염색을 원하는 부분 뿐만 아니라 기타 다른 부분(원하지 않는 부분)까지도 과염색 (overstaining) 시킨 후에 과염된 염료를 감별(탈색)과정을 거쳐 불필요한 부분을 탈색 탈색(감별)이 지나치면 목적하는 부분까지도 과탈색되는 경향이 있으므로 반드시 현미경하에서 조절해가면서 수행하여야 좋은 결과를 얻을 수 있으며 특정 성분만을 정밀하게 염색해 낼 수 있다. Harris' hematoxylin 핵염색 Progression processing

45 Progression processing
퇴행성 염색 (regressive staining) Progression processing

46 Progression processing
감별(탈색 : differentiation, decoloration) 퇴행성 염색방법을 사용하여 어떤 성분을 염색하려면 먼저 증명하고자 하는 물질 뿐만 아니라 모든 조직성분에 염색강도를 조절하여 염료를 완전히 포화시켜 염색한 후에 과잉의 염료를 제거(원하지 않는 부분에 염색된 염료를 제거)하여야 하는데 이 과정을 감별(탈색 혹은 분별)이라 한다. 감별제로는 산성 용액, 염기성 용액, 고농도의 매염제가 포함된 용액, 완충액과 산화제 등 Progression processing

47 Progression processing
감별(탈색 : differentiation, decoloration) 산성용액, 염기성 용액 염기성 염료는 약산성 물질로 감별 alum hematoxylin으로 염색한 것을 acid alcohol(1% HCl / 70% alcohol)로 감별 산성염료는 약염기 물질로 감별 eosin이 과염된 것을 0.1% ~ 0.5% ammonia / 70% alcohol 용액으로 감별 산성 혹은 염기성 탈색제에는 물 대신 alcohol을 용매로 사용하고 있는데, 그 이유는 조직 염색에 사용되는 다수의 염료가 alcohol 보다는 물에 더 잘 용해되기 때문 Progression processing

48 Progression processing
감별(탈색 : differentiation, decoloration) 산성용액, 염기성 용액 pH와 등전점 조직염색에서 산성염료, 염기성 염료의 분류는 등전점으로 분류하며, 단백질의 등전점 보다 pH가 낮으면 산성염료이다. 핵의 등전점은 pH 1.5~2.0 이며 핵 염색제 hematoxylin은 pH 2.2~2.9로 염기성 염료 세포질의 등전점은 pH 5.5~6.0 이며 세포질 염색제 eosin은 pH 4.5 내외이므로 산성염료 Progression processing

49 Progression processing
감별(탈색 : differentiation, decoloration) 매염제 이온경쟁을 이용한 방법으로, 고농도의 매염제는 조직 주위에 과량의 매염제가 존재하면, 조직과 결합한 dye-mordant (염료-매염제)복합체를 파괴하여 염료가 과량의 매염제쪽으로 나오므로 조직에서 빠져 감별 탄력섬유의 증명에 이용되는 Verhoeff's elastic fiber 염색에서, hematoxylin의 매염제인 ferric chloride가 함유된 염색액을 사용 Progression processing

50 Progression processing
감별(탈색 : differentiation, decoloration) 완충액 pH 6.0~6.5 인산완충액은 혈액도말표본에 사용하는 wright‘s 염색의 탈색제로 이용 인산완충액의 pH는 methylene blue와 eosin의 최대 염색범위의 pH에 대하여 중간에 위치하게 되어 methylene blue에 대해서는 산성 탈색제로, eosin에 대해서는 염기성 탈색제로 작용 산화제 산성 alcohol 용액의 pH를 이용하는 것과 ferricyanide, bisulfate, permanganate 등과 같은 산화제를 이용 Progression processing

51 Types of chromasia 정색성 (orthochromasia) 변색성 (metachromasia)
염료 본래의 색이 조직에 염색되었을 때 동일하게 발현되는 염색성 대부분의 염색은 정색성을 이용 변색성 (metachromasia) 정색성과는 반대로 염료 본래의 색이 조직성분에 그대로 발현되지 않고 다르게 나타나는 성질 다색성 (polychromasia) 염료 자체는 단일 염료지만 방치 상태에서 자연적으로 여러 다른 염료를 형성 혈액도말표본인 Wright 염색 Types of chromasia

52 Routine staining (일반염색)

53 개요 조직학에서 기본적으로 세포의 배열과 형태학적 변화를 보기 위해 모든 조직절편을 핵과 세포질을 구분해서 볼 수 있는 hematoxylin & eosin 염색 혈액도말표본은 기본적으로 Wright 염색을 시행, 세균학에서는 Gram 염색, 세포학에서는 Papanicolaou 염색을 시행 Routine staining

54 Routine staining Hematoxylin
Wihelm von Waldeyer에 의해 처음 조직학적 연구에 사용된 이후(1862~3), H & E 염색으로 조직세포의 형태학적 관찰에 가장 빈번하게 활용되고 있는 염료 Hematoxylin은 멕시코, 중앙아메리카, 서인도제도 등에 서식하는 Hematoxylin campechianum 에서 채취한 logwood라는 단단한 적갈색 나무의 수액으로부터 추출되는 천연염료 Hematoxylin은 물에서는 잘 녹지 않지만, 가열하거나 alcohol 또는 ether에서는 잘 녹는다. Routine staining

55 Routine staining Hematoxylin
산화되면 hematein(C16H12O6)으로 되며, hematoxylin 이나 hematein은 그 자체로는 염색성을 갖지 못하고 aluminium과 같은 금속과 결합하여야 염색성을 획득 알칼리성의 hematoxylin 용액은 햇볕에 쬐는 장소에서 단순히 방치하는 것만으로도 서서히 hematein으로 변화되는데, 이 과정을 숙성(ripening) Hematoxylin의 숙성은 특정 산화제(ex> 과산화수소, 과망간산칼륨, 요오드산칼륨, 요오드산나트륨 등)를 사용하여 인공적으로 촉진시킬 수도 있다. Routine staining