배지의 종류 및 조제법 배지란? 배지(culture medium)는 미생물이 필요로 하는 각종 영양소를 골고루 함유 하는 물질이다. 미생물의 영양소에는 탄소원, 질소원, 비타민류, 무기염 등이 있다. 미생물의 종류와 성질에 따라 사용하는 배지의 조성은 각각 다르다. 곰팡이와 효모용 배지는 pH 5.0∼6.0, 세균용 배지는 pH 7.0∼8.0으로 조 절하는 것이 좋다. 배지의 pH가 최적 pH에서 크게 벗어나면 미생물의 생육은 거의 중지된다. 조제된 배지는 건조나 변질을 막기 위하여 항상 빛이 들지 않는 찬 곳에 보 존한다. 미생물은 생리적 성질과 이용 목적에 알맞는 조건에서 배양하여야 한다. 미생물은 순수하게 배양되어야 올바른 실험결과를 얻을 수 있다. 나주대학 호텔조리제빵학부

배지의 종류 및 조제법 1. 배지의 종류 배지의 조성에 따라 천연배지(natural medium) 배지 중의 영양분이 모두 천연물인 동식물체에서 얻어진 것으로 만든 배지 화학조성이 복잡하고 명확하지 않음 합성배지(synthetic medium) 모든 영양분의 화학조성이 명확한 것으로 만든 배지, 미생물 영양요구성 검토, 미생물정량법(bioassay) 등에 사용 반합성배지 위의 두 가지 배지의 중간적인 것 나주대학 호텔조리제빵학부

배지의 종류 및 조제법 1. 배지의 종류 2. 배지의 상태에 따라 액체배지(liquid medium) 미생물 생리실험, 대사산물 생산, 균체세포 생산 등의 목적에 사용 고체배지(solid medium) 액체배지에 한천(agar), gelatine 등의 고화제를 첨가하여 응고시킨 것 멸균 후 냉각, 고화시킬 때 목적에 따라 사면배지, 고층배지, 평판배지 등으로 만든다. * 사면배지(slant) : 호기성세균의 배양 및 보존에 사용 * 고층배지(stab) : 젖산균 등 미호기성균의 천자배양(stab culture)에 사용 * 평판배지(plate) : colony를 형성시켜 미생물을 순수분리할 때 사용 나주대학 호텔조리제빵학부

배지의 종류 및 조제법 2. 사용기구 및 재료 기구 및 기기 pH meter, water bath, autoclave, 비이커, 삼각플라스크, 시험관, 페트리접시, 메스플라스크, 분주대 시약 및 재료 meat extract, peptone, NaCl, agar, 1N HCl, 1N NaOH, pH 시험지, 알미늄 호일, 황산지 나주대학 호텔조리제빵학부

배지의 종류 및 조제법 3. 실습내용 및 방법 육즙배지 조제 Meat extract 10g, peptone 10g, NaCl 5g을 칭량하여 비이커에 넣고 물 1ℓ 를 가하여 잘 녹인다. pH 미터 또는 pH 시험지로 pH 7.0∼7.2로 조절한다. 멸균한 500ml 솜마개 삼각플라스크에 100ml씩 분주한다. 솜마개 부위에 알미늄 호일을 씌우고 autoclave에서 120℃, 15분간 고압증 기멸균한다 육즙한천(bouillon agar) 배지 조제 미리 만들어 둔 육즙배지 100ml에 한천 1.5∼2.0g을 넣는다. 끓는 water bath 내에서 가열하여 한천을 녹인다. 멸균 솜마개 시험관에 신속하게 분주한다. 솜마개 부위에 알미늄 호일을 씌우고 autoclave에서 120℃, 15분간 고압증 기멸균한다. 사면배양에 사용할 것은 적당한 굵기의 유리봉에 눕여 응고시킨다 평판 또는 천자배양에 사용할 것은 그대로 세워 응고시킨다 나주대학 호텔조리제빵학부

배지의 종류 및 조제법 3. 실습내용 및 방법 육즙한천(bouillon agar) 평판배지 조제 클린벤치 내에서 녹여 둔 육즙한천배지를 멸균 페트리접시에 주입한다. 응고시킨 다음 항온기 내에서 전체를 뒤집어서 무균적으로 응축수를 건조시 킨다.(15∼20분) 뚜껑을 다시 닫고 꺼내어 꺼꾸로 뒤집은 채로 보관한다. 4. 미생물 배양 방법 고체배양법 : 종균의 보존, 형태 및 생리의 관찰에 이용 사면배양(slant culture, streak culture) - 호기성균의 배양에 이용 - 백금선으로 종균을 따서 사면 위에 아래쪽에서 위로 가볍게 직선 또는 지그재그로 선을 긋는다. - 세균, 효모는 백금이, 곰팡이, 버섯은 백금구를 사용하는 것이 편리 나주대학 호텔조리제빵학부

배지의 종류 및 조제법 천자배양(stab culture) - 혐기성균의 배양에 이용 - 백금선 끝에 종균을 묻혀 한천고층배지의 시험관 주둥이를 아래로 하여 배지의 표면 중앙에서 내부로 향하여 찌른다. 액체배양법 : 미생물의 생태 및 생리의 관찰, 발효 생산물의 시험, 균체를 대량으로 얻고자 하는 경우, 배양액 중에 통기할 필요가 있을 경우 등에 이용 정치배양(stationary culture) - 호기성균은 배양용기의 크기에 비하여 내부의 배지량은 적게 하고 액층을 얕게 하여 산소공급이 잘 되도록 한다. - Fernbach flask나 Loo flask와 같이 액면이 넓게 되는 용기들이 편리하며 시험관을 사용할 때는 한천사면배지처럼 눕혀서 표면적을 넓게 만드는 것 이 효과적이다. - 젖산균이나 낙산균 등의 혐기성균은 액층을 깊게 하고 일단 끓여서 사용 하면 특별히 혐기적 상태로 하지 않아도 왕성하게 증식한다. 이 때 종균은 많은 양을 접종하는 것이 좋다. 나주대학 호텔조리제빵학부

배지의 종류 및 조제법 진탕배양(shaking culture) - 호기성균을 보다 활발하게 증식시키기 위하여 액내에 많은 공기가 용해되 도록 하는 배양법 - 배지에의 산소용존속도는 진탕기의 회전속도, 진탕방법, 플라스크의 용적 에 대한 배지량의 비율, 플라스크의 형태에 따라 달라진다. Jar fermentor에 의한 통기교반배양 - 실험실에서 대량의 배지에 배양하려면 jar fermentor를 이용하여 통기교 반배양을 한다. - Jar fermentor는 미생물의 배양조건을 연구 검토하는데 적합한 장치 - 공업용 발효조와 구조, 통기 및 교반방법이 거의 같으므로 산업적인 생산 을 위한 기술적인 자료를 얻는데 이용 나주대학 호텔조리제빵학부