전혈에서 시간과 온도에 따른 ACTH 의 안정성 평가 신선영, 이현주, 민경선, 우재룡, 이호영 서울특별시립 서울대학교 보라매병원
연구 배경 ACTH검사에서 신속한 혈장분리과정은 검사결과의 신뢰성에 영향을 줄 수 있음. Adreno Corticotropic Hormone (ACTH) 단백질 분해에 의해 매우 불안정한 호르몬. 짧은 반감기. 단백질 분해효소의 활동을 막기 위해 4℃온도 유지.
ACTH 전처리 과정 냉각 EDTA 채혈 얼음을 넣은 컵 수송의 문제 검사실 수송 냉장원심분리 -20℃보관
이전 연구 (Martin et al, 2006) 전혈 상태의 ACTH의 안정성은 온도보다 원심분리 될 때 까지의 시간에 의존. (Jane et al, 2003) 전혈 상태에서 ACTH, AVP, VIP 호르몬의 안정성. (유선희 et al, 2007) 혈장에서 ACTH의 안정성.
연구 목적 실온 EDTA tube 사용이 ACTH결과에 미치는 영향. 혈장분리 전 시간과 온도가 ACTH결과에 미치는 영향. 불안정성을 조사하고, 가치 있는 정보를 제공.
대상 및 방법
Blood Samples 전체 22명의 검체를 대상. 냉각된 EDTA tube와 실온 EDTA tube에 각각 채혈. 즉시 원심 분리하여, 측정될 때 까지 -20℃보관. 전혈 상태의 EDTA 검체를 조금씩 나누어 분주. 실온에서 2시간, 4시간, 24시간, 냉장에서 24시간 방치. 원심 분리하여, 측정될 때 까지 -20℃보관.
ACTH 실험 면역방사계수측정법 (IRMA) CIS Biointernational (Gif-sur-Yvette, France) 측정간정밀도 CV < 5.3% 측정내정밀도 CV < 6.1%
통계 처리 SPSS 15.0 Wilcoxon Signed Ranks Test : 시간과 온도에 따른 결과 분석. P-value : <0.05 Sigmaplot 7.0 Box Plot : 냉각 EDTA vs. 실온 EDTA 냉장24시간 vs. 실온24시간 Line and Scatter Plot ( Simple Error Bars) : 시간과 온도에 따른 변화 커브 그림.
Results
ACTH 측정결과 전처리 상태 검체수 ACTH 농도 (pg/ml) ACTH 감소율 (%) P-value 냉각 EDTA 즉시 22 35-128 실온 EDTA 즉시 16 ND-111 26.3 0.038 실온 2시간 방치 11 ND-99 47.2 0.015 실온 4시간 방치 ND-96 39.1 0.009 실온 24시간 방치 7 ND-75 34.2 0.018 냉장 24시간 방치 ND-78 51.6 0.043
냉각 EDTA vs. 실온 EDTA (P=0.038) 냉각 실온
실온에서 시간에 따른 변화 (P=0.038) (P=0.465) (P=0.786) (P=0.225)
4℃에서 시간에 따른 변화 (P=0.043)
냉장24hr vs. 실온24hr (P=0.066) 냉장 실온
요 약 I 실온 EDTA tube를 사용하였을 때, 유의하게 결과가 낮아짐을 확인. 실온에 방치된 시간에 따라 ACTH결과가 유의하게 4℃에 보관해도 24시간 후에는 유의하게 낮아짐.
요 약 II 냉장과 실온 24시간방치 결과가 유의하지 않음. 전혈상태로 실온에서 2시간 방치되면, 47.2% 감소됨. 전혈상태로 24시간까지 방치 될 경우, 최대 51.6% 감소됨.
결 론 냉각된 EDTA tube사용이 필수적, 채혈 된 검체 는 수송되기 전까지 4℃에 보관. 신뢰성 있는 검사결과를 위해서는 가능한 한 신속한 검체 전처리 과정이 필요. 전혈로 4℃에 보관하였을 때, 시간에 따른 안정성에 대한 후속 연구 필요.
감 사 합 니 다.