항바이러스 한약제 검사 바이러스팀 최유정, 이대희
항바이러스 약효검사 실험방법 1. 시험 원리 바이러스 감염세포에서의 바이러스 역가 측정 2. 검색 능력 Multi-Screen System: 24 또는 96 well plate format 3. 재료 및 장비 Vero세포, Marc145세포, 배지, FBS, cytoxicity assay kit, CO2 배양기, Microplate reader 등 4. 시험 방법 -96-well plate에서 완벽한 단층을 형성한 세포를 준비한다. -한약제를 100배 희석 배수로 원액부터 희석한다. -well당 1 M.O.I./cell이 되도록 한약제와 혼합하여 1시간동안 반응시킨다. -그 중 100 ul의 혼합액을 취해 준비해놓은 세포에 접종한다. -100% CPE를 보일 때까지 72-96 시간 배양한다. -상등액을 취한 다음 바이러스 역가를 측정한다. -시료의 각 시험 농도에서의 virus yield 감소를 계산한다. 5. 평가 기준 각 농도에서의 바이러스 역가 감소 비교
PRRSV 1차 TEST -역가 측정 우선, 육안적으로 봤을때 cpe형성이 대조군보다 적게 나타나는 샘플에 대해서 측정하였습니다. Identifier NA ORF7-PFU NA ORF7-Log PFU 역가감소비교 31x200 7,209.00 3.858 176 42x200 20,470.00 4.311 62 43x20 11,480.00 4.06 111 45x20 7,241.00 3.86 47x20 2,631.00 3.42 483 48x200 62,620.00 4.797 20 57x200 58,290.00 4.766 22 58x200 14,740.00 4.168 86 60x200 90,340.00 4.956 14 77x200 15,170.00 4.181 84 81x200 13,730.00 4.138 93 86x20 10,590.00 4.025 120 124x200 7,348.00 3.866 173 148x200 20,050.00 4.302 63 161x200 21,490.00 4.332 59 200x20 6,885.00 3.838 185 Identifier NA ORF7-PFU NA ORF7-Log PFU 역가감소비교 206x200 25,910.00 4.413 49 208x200 11,560.00 4.063 110 217x200 21,660.00 4.336 59 218x200 30,040.00 4.478 42 224x200 70,280.00 4.847 18 232x200 17,530.00 4.244 73 238x20 4,613.00 3.664 276 277x20 12,510.00 4.097 102 280x20 101,000.00 5.004 13 282x200 12,090.00 4.083 105 299x20 6,202.00 3.793 205 322x20 8,782.00 3.944 145 324x20 10,310.00 4.013 123 325x20 4,720.00 3.674 269 326x20 5,252.00 3.72 242 cell positive control-1 1,272,000.00 6.105
cell positive control-1 PED 1차 TEST-역가측정 우선, 육안적으로 봤을때 cpe형성이 대조군보다 적게 나타나는 샘플에 대해서 측정하였습니다. Identifier PEDV-PFU PEDV log PFU 바이러스 역가감소 비교 30x20 713.1 2.853 410 32x20 7391 3.869 40 43x20 2488 3.396 118 44x200 1736 3.24 168 48x20 2962 3.472 99 49x20 20570 4.313 14 51x20 85600 4.932 3 55x20 1084 3.035 270 56x20 2174 3.337 135 57x20 2678 3.428 109 58x20 1817 3.259 161 60x20 6042 3.781 48 71x20 256.8 2.41 1139 77x20 749.5 2.875 390 78x20 47.48 1.676 6160 Identifier PEDV-PFU PEDV log PFU 바이러스 역가감소 비교 124x20 음성 130x20 133.9 2.127 2184 143x20 179100 5.253 2 198x20 208x20 2563 3.409 114 223x20 58240 4.765 5 232x20 2212 3.345 132 274x20 344.2 2.537 850 297x20 431900 5.635 1 324x20 3582 3.554 82 325x20 734200 5.866 326x20 165600 5.219 cell positive control-1 292500 5.466