Mammalian cell culture Ⅰ
01 실험 목적 Cell culture 세포배양의 기본인 계대배양을 단계별로 숙지하고 직접 실험을 진행하면서 각 단계의 주의할 점을 알아본다.
02 Introduction Mammalian cell culture 계대배양 02 Introduction Mammalian cell culture 동물세포 배양이란 체외(in vitro)에서 인공적으로 체내(in vivo)와 유사한 조건을 제공하여 세포를 대량 증식시키는 방법이다. 이때 동물세포는 현탁(suspension)상태나 단층부착 (monolayer-attachment) 상태로 생장한다. ● 세포주 배양(cell line culture) ● 초대 배양(primary cell culture)
02 Introduction 계대배양 (subculture) 계대배양이란 동물세포를 대량으로 증식시키거나 세포의 대를 이어가기 위해서 dish와 배지를 옮겨주는 배양방식이다. 세포가 dish에 꽉 차기 전에 계대배양하는 것이 좋으며, 세포 종류에 따라 그 방법에 차이가 있다.
02 Introduction HEK 293 cells (Human embryonic kidney cells 293) 계대배양 02 Introduction HEK 293 cells는 인간 배아 신장에서 유래한 세포이다. 세포의 형태는 epithelial cell 타입이며 배양 방식은 부착하여 자라는 adhesion cell이다. HEK 293 cells (Human embryonic kidney cells 293)
02 Introduction DMEM (Dulbeco’s Modified Eagle’s Media) 계대배양 02 Introduction DMEM (Dulbeco’s Modified Eagle’s Media) DMEM은 가장 일반적으로 사용되는 animal cell culture용 media 이다. 즉, 동물 세포 배양용 배지이다. DMEM 배지의 조성 1. Bulk ions - Na, K, Ca, Mg, Cl, P, NaHCO3 2. Trace element – iron, zinc, selenium 3. Sugars – commonly Glucose 4. Amino acids 5. Vitamins 6.Serum[Fetal bovine serum(FBS)]: Neutralize, Healthy growth 7.Antibiotics : 세포 성장에 관여X, 박테리아, 곰팡이등의 오염방지
계대배양 03 Materials & Methods 1. 기존의 배지를 제거하고 PBS 4 ml을 조심스럽게 넣고 가볍게 흔들어준다 2. PBS를 제거한 후 Trypsin-EDTA 0.5 ml을 넣고 2분간 incubation 3. 배지 4 ml을 더한 후 cell을 모아15 ml tube로 옮긴다 4. Room Temperature, 1000 rpm에서 2분간 centrifuge 5. Cell pellet을 제외한 상층액을 제거하고 새로운 배지 1 ml을 넣어 재혼탁한다 6. 새 dish에 배지 3.5ml을 넣고 재혼탁시킨 세포 0.5ml을 골고루 분산시킨다 7. 잘 흔들어 준 후 현미경으로 관찰하고 Incubator에서 배양한다 Clean bench, 배양할 세포, 배지, 6cm dish, PBS, Trypsin-EDTA, Water bath, Pipette, Tip, 15 ml tube, Incubator, Centrifuge
계대배양 04 Result 세포 관찰 사진
세포 종류에 따른 계대배양 방법의 차이 (세포주, 초대배양, 부유, 부착….) 05 Discussion 세포 종류에 따른 계대배양 방법의 차이 (세포주, 초대배양, 부유, 부착….) 2주차+3주차 report -> 3월 23일 수업시간 제출
310호 507호 3:10 – 3:35 1조 5조 3:40 – 4:05 2조 6조 4:10 – 4:35 3조 7조 4:35 – 5:00 4조 8조