단백질의 정량 -Bradford 법 2017.05.24.

Slides:



Advertisements
Similar presentations
Western Blot Analysis using His-Tag Antibody 조교 : 최 혜 정 (s338)
Advertisements

Mini-prep, Restriction Enzyme 분자생물학실험 SUBJECT. Sequence blast Restriction enzyme Mini-prep E.coli transformation TA Ligation PCR DNA EXTRACTION 분자생물학실험.
2013 년 목 차 용어의 정의 위기경보 수준 국가 생물테러 대응 체계도 반 · 팀별 소방의 임무.
식품분석Ⅰ - 조단백정량 3.1 원리 - 단백질은 질소 (N) 를 함유한다. 즉, 식품 중의 단백질을 정량할 때에는 식품 중의 질소 양을 측정한 후, 그 값에 질소계수 를 곱하여 단백질 양을 산출한다. 질소계수 : 단백질 중의 질소 함량은 약 16% 질소계수 조단백질 (
시약 및 Buffer 의 농도 계산법과 Pipette 의 사용법 기초생명과학 및 실험 2 주차.
1. 전염병의 역 사 2. 현대의 새로운 감염병 3. 면역의 기능 4. 면역과 영양.
Tumor virology Laboratory
측정법에 따른 갑상선자극호르몬 결합억제면역글로블린의 임상적 유용성 검토
18. Real-time PCR을 이용한 HBV DNA의 정량
T.O.P. (Team of pharmacoproteomics research)
PIVKAII 검사의 유용성 면역혈청계 곽은민.
Rhodopsin.
BSA (bovine serum albumin)
Western Blot Analysis using His-Tag Antibody
3장 : 거대 분자 (Macromolecules).
1) 미생물의 배양법 미생물이란 LB배지 미생물 배양 방법 고체배양 : 사면배양/ 천자배양 …
Western blot.
SDS-PAGE analysis.
RNA analysis.
TLC (Thin Layer Chromatography)
Amplification and purification of BDNF-/NGF-adeno virus
∘ 체세포분열과 생식세포분열의 특징을 비교하시오.
Another Detection Methods
4-α-Glucanotransferase에 의해 백설기의 변형된 전분에 대한 구조적 특성
Spectrophotometer & Determination of Protein concentration
4.Mendelian segregation
Immunofluorescence Staining
Western blot.
종류와 크기가 다른 고체입자의 겉보기밀도 측정
Chapter 3: Enzymes Prof. Jung Hoe Kim.
신규 검사 소개 Free light chain
실험의 목적 산화-환원적정법의 원리 이해 산화-환원 반응식의 완결(산화수) 노르말 농도 및 당량 과망간산 용액의 제조법
Chapter 7. 흡광광도법 - Absorption spectrophotometry using spectrophotometer 기본 원리, 기기사용법 및 측정법 개요 및 원리 : 분광광도법 투광도 및 흡광도 Beer-Lambert Law Standard curve 1.
Western blot.
Expression of protein 2주간 실험.
2018-2학기 생명과학실험기법 Reverse transcription PCR & Real-Time PCR.
Feb NICS Co..
Fourier Transform Nuclear Magnetic Resonance Spectrometer
Macromolecule analysis Ⅱ-① Lipid Extraction from tissues
Macromolecule analysis Ⅱ-① Lipid Extraction from tissues
단백질의 정량 -Bradford 법
라디칼 소거활성 측정 DPPH assay.
핵산의 Quality Control DNA & RNA 정량 Agarose gel 을 이용한 DNA&RNA전기 영동
Western blot.
Protein.
Transfer trouble 10% gel Loading : 70V 2시간 10분, 100V 1시간 30분
밀도 (1) 부피가 같아도 질량은 달라요 ! 밀도의 측정 밀도의 특징.
효소를 이용한 간 기능 검사.
고체의 X선 회절 4조 강신형 권용욱 김미정 사공정.
단백질의 정량 -Bradford 법
무게법에 의한 강철 속의 니켈 정량 (Gravimetric Determination of Nickel in steel)
Western blot 생명과학 실험기법 (13주차).
Western blot 생명과학 실험기법 (12주차).
1-5 용해도.
1 영양소에는 어떤 것들이 있는가? 영양소 탄수화물 단백질.
LC-MS 단백질 분석을 위한 SDS-PAGE staining protocol 및 주의할 점
비열.
덴마크의 Herrzsprung과 Russell에 의해 고안된 태양 부근 별들의 표면온도와 절대등급 사이의 관계를 조사한 결과 별들이 몇개의 무리로 분류된다는 사실을 알았다. 후에 이것이 그들의 이름자를 딴 H-R도가 되었으며, 별의 분류와 그 특징을 알아보는 중요한.
DNA의 구조와 역할 (1) DNA : 이중 나선 구조로 수많은 뉴클레오타이드의 결합으로 이루어져 있다.
세계영화사 입문 3강 소련영화의 혁명 소비에트 몽타주.
Western blot.
가천대학교 생명과학과 생물학 및 실험 학기 생물학 및 실험 1 Exp 10. DNA의 구조.
지시약의 작용원리 실험방법 1. 지시약의 최대흡수파장 측정
아스피린(Aspirin)의 정량.
Immunofluorescence Staining
연습문제 풀이 #3.4 5조 임진묵 최지한 현종찬.
저온지구시스템화학 및 실험 Ch.6 용해도도 JYU.
박진우 Spectrophotometer.
사회복지협의회와 지역사회복지협의체.
고병원성 조류인플루엔자(HPAI) 검사과정
Presentation transcript:

단백질의 정량 -Bradford 법 2017.05.24

Central dogma

Protein structure Protein structure Primary structure - amino acid chain Secondary structure - a-helix , b-Sheet Tertiary structure - domain Quaternary structure - subunit

Principles of Bradford assay - Spectrophotometer를 이용, 흡광도를 측정하여 standard물질인 BSA(Bovine Serum Albumin)을 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측 정하는 것 Bradford 방법은 미량 정량 (microassay)을 사용하면 ~20mg의 단백질량 까지 측정할 수 있다. Bradford 방법은 빠를 뿐만 아니라 비단백질 성분들에 의 한 방해도 거의 없다.

Bradford method Free dye Bound dye (Cationic) (Anionic) 450 nm 590 nm Coomassie Brilliant Blue (CBB) G-250이 특정 아미노산과 결합시의 흡광도의 변화를 측정하는 방법. Arg, Lys – Electrostatic attraction Trp, Tyr, Phe, His - Hydrophobic interaction CBBG가 free dye의 형태로 있을 때 최대 흡광 파장은 450 nm (red) 이지만, amino acid와 결합하여 anionic form일 때의 최대 흡광은 590 nm (blue) 인 특징을 이용. Free dye (Cationic) 450 nm Bound dye (Anionic) 590 nm

Bradford method Bradford method의 장점 - 빠르고(10 분), 저렴 - 생체고분자 물질 중 단백질에 매우 특이적 (비단백질 성분들에 의한 방해도 거의 없음) - 높은 sensitivity (1~20ug) dye-complex는 약 1시간 동안 안정 Bradford method의 단점 각 단백질의 아미노산 조성에 따라 반응 정도가 달라짐. 따라서 standard의 선택이 중요함. - detergent (Triton X -100, SDS), 강염기 등에 의해 방해 받을 수 있음 (dye로 사용하는 Coomassie blue가 acidic하기 때문). - 일반적으로 3000Da 미만의 단백질은 Bradford assay로 정량을 신뢰하기 어려움

- Spectrophotometer - 원리

Materials 1. BSA (bovine serum albumin) 청에 녹아있는 단백질의 한 종류 - 이 단백질을 정제해서 용액속에 녹인 것이 BSA 용액으로 보통 단백질의 농 도를 알고 싶을 때 standard 로 사용

Bradford solution(마지막) Methods ① Bradford solution, D.W 그리고 BSA을 밑의 표와 같이 섞어 준다. BSA농도 0.625 1.25 2.5 5 10 20 BSA 400씩 2 D.W 400 998 Bradford solution(마지막) 100 200ul 버림 Total volume: 500ul ② 5분 정도 equilibrium을 시킨 후, spectrophotometer을 이용해서 O.D 값을 측정한다. (200ul씩 2군데 분주해서 평균값 사용) ③ 측정 값을 이용해서 standard curve을 그리고 우리가 측정하고자 하는 미지 시료의 값을 대입하여 protein양을 측정한다.

Results