결핵균 동정방법의 비교 미생물계 류 희 정
배 경 결핵 : 국내현황 결핵균을 흡입함으로써 발생하는 만성 감염 질환. 1980년대 이후 감소 추세 배 경 결핵 : 결핵균을 흡입함으로써 발생하는 만성 감염 질환. 국내현황 1980년대 이후 감소 추세 선진국에 비해 높은 발병율 면역결핍 저하환자군 증가 내성결핵균 환자 증가 신속정확한 동정법이 요구됨
결핵균 검사법 항산균 염색법 : 배양법 : 균종동정 신속 , 감도 낮음 ( 배양 세균 30-40 %) 배양기간 필요 ( 6 - 8주) 약제감수성시험 소수 증식집락 : 균종동정 지연 균종동정 전통적 생화학적방법 : Niacin test (증식집락 많이 필요) 분자생물학적 방법 : PCR, LCR, Gen-Probe(소수 집락으 로 시험가능)
연구 목적 - 결핵균 배양시 30% 정도 소수의 집락 증식 - 분자생물학적 방법 (PCR, Gen-Probe) 의 유용성을 평가하 고자 하였음
재료 Niacin 양성 - 21주 2000년 6 - 8월에 임상검체에서 분리된 결핵균 - 25주 비결핵성 항산균 (표준균주) - 7주 M. intracellularae M. szulgai M. smegmatis M. asiaticum M. fortuitum M. kansassii M. phlei
방법 I (Niacin test) Culture media : 3% Ogawa Niacin test : 1) 배지에 Saline 2ml 첨가 2) saline 0.5ml + 4% aniline 0.5ml + 10% cyanogen bromide 0.5ml
방법 II (Multiplex PCR)
Sample Preparation Hybridization Detection 방법 III ( Gen Probe ) Sample Preparation Hybridization Detection
결 과 표1. 각 방법에 따른 항산균 시험결과
표2. 각 방법의 장단점 ------------------------------------------------------------------------------------------- Niacin S-1000 S-3000 Gen-Probe 소수증식세균 부정확 가능 가능 가능 술식 간단 간단 간단 간단 소요장비 불필요 PCR PCR Sonicator, machine machine Luminometer 소요시간 1일 - 4주 5시간 5시간 2시간 소요경비 25원 10,660원 10,660원 8,958원 FDA 공인 No No NO Yes
표 3. 항산균 배양건수 월평균 예상 시험 균주 89+6/3개월=31
결 론 1. PCR( S -1000, S-3000), Gen-Probe등의 분자생물학적 방법 : 항산균동정을 정확하게 하였음 결 론 1. PCR( S -1000, S-3000), Gen-Probe등의 분자생물학적 방법 : 항산균동정을 정확하게 하였음 2. 소수의 세균증식 : 분자생물학적 방법을 이용 신속, 정확한 보고 가능 3. PCR(S-1000, S-3000)은 아직 FDA 비공인 검사이므로 추후 더 많은 시험균주로 검토가 필요함