유세포 분석기를 이용한 혈소판 활성도 검사의 예비연구

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1 유세포 분석기를 이용한 혈소판 활성도 검사의 예비연구
유세포 분석기를 이용한 혈소판 활성도 검사의 예비연구 ( 항응고제 및 검사방법에 따른 혈소판 CD62항원 표현정도 비교 ) 혈액학계 안 미 숙

2 I. 서 론 Platelet activity study - Acute coronary syndrome
: discriminating cardiac VS non-cardiac origin from chest pain - platelet concentrate 보존의 질 평가 : relationship between platelet aging and membrain activation marker

3 Immune Thrombocytopenia 진단
-PASIG (Direct) -APA(Indirect) Platelete의 immunoglobulin 위치 -혈소판 표면 -alpha-granule 내 대다수 포함 : in vitro 에서 장기간 보관시 표면으로 노출되면서 platelet activation 되어 위양성 초래함

4 - 항응고제 EDTA Trisodium citrate Diatube-H: Sodium citrate, citric acid
Theophylline, Adenosine, Diphyridamole - 시약 혈소판 항원: CD41, CD42, CD61 활성도 측정 표지자: CD62, CD63 - Mody 등 (1999년): platelet 활성도측정시 Diatube-H 와 citrate tube간의 평가

5 연구 목적 시험관내 혈소판 활성도를 최소화하여,혈소판 측정시 검사전 과정의 오류를 감소시키고자함 - Diatube-H 와 EDTA tube의 비교 - WB와 PRP간의 platelet spontaneous activation 측정

6 II. 재료 및 방법 대상: 19명의 건강한 사람 채혈관 - Diatube-H 와 EDTA tubes
(Becton Dickinson, Rutherford, NJ, USA)

7 검사 방법 - WB & PRP를 0, 2, 5, 24, 48시간별로 검사 - 1:2 희석 WB & PRP - 1% PF 로 실온에서 10분 고정 - 1:5 희석검체 25ul + Mo Ab* 5 ul 첨가 * CD41a -FITC & CD62p -PE (Becton Dickinson, San Jose, NJ, USA) - 실온에서 30분 incubation - 1 ml PBS 넣고 Coulter EPICS XL로 5000개 acquired. cf) 양성대조: human thrombin(1 unit/ml) GPRP*(final conc. 2.5 mM) * Gly-Pro-Arg-Pro, sigma, St Louis, MO, USA)

8 III.결 과 Table. Percentage (M±2SD) of CD62 + Platelet
*통계: Wilcoxon Signed Ranks test **Thrombin induced platelet activation (as positive control): 75.8%

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11 P=0.005 P=0.005

12 IV. 고찰 1) 시험관내 혈소판의 활성도 측정결과 - PRP 보다 WB 의 사용이 적당함
- EDTA tube 보다 Diatube-H 의 사용이 적당함. 2) PRP의 경우 Diatube-H 의 사용을 권장함. 3) 검사시간및 비용측면 -WB사용시 검사시간 단축(PRP제조시간:30분) -Diatube-H사용시 비용상승,편이성감소 * Diatube-H; 280원/tube * EDTA tube; 111원/tube

13 V.결론 혈소판 활성도측정시 검사전과정의 오류를 감소시키기위하여WB와 Diatube-H의 사용이 적절한 것으로 사료됨.