Kobra cell 을 이용한 Aflatoxin 의 분석 식품약품분석과 나 환 식

목 차 Aflatoxin 의 특성 및 분류 Aflatoxin 의 체내 대사 각국의 규제 현황 Aflatoxin 의 분석법 Kobra cell 을 이용한 aflatoxin 분석법 Aflatoxin 이란 ?

1. Mycotoxin 이란 ? 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 ) ※첨 부 : 1. 보육확인서 ( 전 대상자 해당 ) 2. 보육시설 신고 및 인가증 사본 ( 신규신청시 해당 ) 3. 보육료 지급영수증 ( 전 대상자 해당 ) 위와 같이 보육수당 지원을 신청합니다 신청인 : 나 환 식 ( 서명 또는 날인 ) 전라남도지사 귀하  곰팡이가 생산하는 secondary metabolite  곰팡이가 생산하는 독소를 통틀어 곰팡이 독소 (mycotoxin) 라 하고  Aspergillus 속, Penicillium 속, Fusarium 속 등에 의해 생성된다.

2. Aflatoxin 이란 ? 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 )  곰팡이 중 Aspergillus 속에 의해 생성되는 독소 (A. flavus 와 A. parasiticus)  국제암연구소 (International Agency for Research on Cancer, IARC) 에서 발암물질로 분류되어 있다.  생성조건 : 완전히 건조되지 않은 농산물 등이 환기가 잘 되지 않 거나, 온도, 습도가 높은 장소에 장기간 저장되거나, 홍수, 우기 시 수확하였을 때, 건조단계까지 저장기간 이 길고, 환기가 불충분할 경우 더욱 잘 생성된다.

3. Aflatoxin 의 독성 및 특성 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 )  곰팡이 독소 중 가장 독성이 크다.  간장, 신장, 신경계, 내분비계 및 면역계 등에 영향을 미치며,  고농도의 aflatoxin 은 괴사, 간경변, 출혈을 동 반한 간암, 간손상, 부종 등을 초래한다.  Aflatoxin 은 열에 비교적 안정하여 조리 및 가 공 후에도 분해되지 않으며, 이때 오염된 식품 을 섭취한 사람이나 동물에게 여러 가지 장해 를 일으킨다.

4. Aflatoxin 의 분류 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 )  식품공전에서 Aflatoxin 은 B 1, B 2, G 1, G 2, M 1 등으로 분류되며,  이중 B 1 은 독성이 가장 강하여, 다른 독소보다 2~8 배의 독성을 나타낸다.  IARC 에서 B 1 과 B 1, G 1, M 1 이 혼합되어 있는 경우에는 Group 1( 발암 가능물질 ) 으로 분류되 어 있고, M 1, B 2 의 경우에는 Group 2B ( 발암가 능성이 있는 그룹 ) 로 분류되어 있다.

4. Aflatoxin 의 분류 Fig. 1. Structure of Aflatoxin

5. Aflatoxin 체내 대사 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 ) Aflatoxin B 1 Cytochrome Hydroxylated Metabolites : AFM 1, AFQ 1, AFP 1 → P450 Cytochrome- P450 Aflatoxin B 1 -8,9-epoxide (exo and endo) Protein Binding DNA adducts Glutathion S- tranferase Aflatoxin B 1 - glutathione conjugate ToxicityCancer Excretion

6. 각국의 aflatoxin 규제 현황 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 ) 국 가규 제 대 상규 제 대 상 규 제 기 준규 제 기 준 Aflatoxin B 1 총 aflatoxin (B 1 +B 2 +G 1 +G 2 ) 한국 식품 - 곡류 / 두류 / 견과류 및 그 단순가공품 - 된장 / 고추장 / 고춧가루 / 메주 / 찐쌀 등 10 생약 - 감초 등 9 품목 ( 입안예고 중 ) 10 일본식품 - 식품 ( 열매 / 종자 / 향신료 등 ) 10 중국 식품 - 옥수수 및 제품 / 땅콩 및 제품 20 - 쌀 / 식용유 10 생약 - 약용식물의 원료 - 추출물 및 그 제제 5 유럽연합 - 강황 ( 울금 )/ 건강 ( 생강 )/ 육두구 / 후추 - 땅콩 / 견과류 / 건조과일 및 단순가공품 - 어린이용 식품 / 영유아 식품 ( 곡류 ) 독일 - 생약제제를 포함하는 의약품의 원료 물질 ( 원생약 ) 24

7. Aflatoxin 분석방법 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 )  식품의 곰팡이 독소 시험법은 Aflatoxin B 1 분 석법, Aflatoxin M 1 분석법, Patulin 분석법이 있 으며,  그 중 Aflatoxin B 1 분석법에는 박층크로마토 그래피법, 액체크로마토그래피에 의한 분석법 (TFA 를 이용한 유도체화법 ) 등이 있음.

7. Aflatoxin B 1 분석방법 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 ) Extraction ↓ Methanol : nuts, cereal and maize Acetonitrile : dried fruits and spices Chloroform : 잘 용해되는 특성이 있으나 유해성과 시간이 많이 걸리는 단점이 있음 Dilution and Filtration ↓ Capture of the aflatoxin Washing Purification Elution ↓ QuantificationBy HPLC using Kobra cell or UVE(254 nm)

8. Kobra cell 을 이용한 컬럼 후 유도체화 법 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 )  Aflatoxin B 1, G 1 을 전기적으로 유도체화 시켜 분석하 는 방법  B 1 및 G 1 구조의 이중결합에 Br 을 반응시켜 형광성을 더 강하게 만드는 유도체화 방법  column 에서 분리가 이루어지고 난 후 형광검출기로 분석하기 전에 Kobra cell 을 지나면서 유도체화가 진 행된다.  Kobra cell 을 통해서 aflatoxin 을 분석할 경우 2 ppb 수 준까지 검출이 가능하며,  S/N ratio(G 1 ) 의 경우 30 정도로 우수한 것으로 나타났 다.

9. Kobra cell 을 이용한 HPLC 분석 모식도 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 )

공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 )

10. Kobra cell 구조 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 )

11. Kobra cell 을 이용한 calibration 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 ) 1.0 ppm 0.5 ppm 0.2 ppm 0.5 ppm 1.0 ppm

12. Aflatoxin 분석 방법에 따른 비교 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 ) 시험방법장점단점 TFA(trifluoroacetic acid) 를 이용한 유도체화 ► 사용 용매계 및 반응조건이 제한되어 있지 않음 ► 반응과정이 복잡하다 ► 여러 단계의 반응과정으로 장시간 소요 및 회수율 감소 ► 반복실험 시 오차가 심함 Iodide 및 bromide 를 이 용한 Post-column 방법 ► TFA(trifluoroacetic acid) 를 이용한 방법보다 높은 회수율 ► 수작업이 감소 ► 고가의 pulseless pump 가 필요 ► 안정화 과정이 힘들다 Kobra cell 을 이용한 유도 체화 방법 ► 설치, 작동 및 유지가 간편 ► 상온에서 반응하며 ► 반응시간이 약 4 초 소요 ► 재사용이 가능하다 ► 필요에 따라 장치를 설치 ► 유도체화 시약을 이동상에 첨가해 주어야 함

13. UV 유도체화 법을 이용한 Aflatoxin 분석법 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 )  UV 254 nm 를 이용하여 Aflatoxin B 1 의 이중결합에 OH 를 붙여 분석하는 방법  이동상의 제조가 간단한 장점이 있다.  column 에서 분리가 이루어지고 난 후 형광검출기로 분석하기 전에 UV 유도체화 장치를 지나면서 유도 체화가 진행된다.  상대적으로 관리가 쉽다.  온도조건이 39 ℃ 를 유지하여야 한다.

공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 ) 14. UV 유도체화 법

15. 결론 공무원자녀 보육수당 지원 신청서 ( ‘ ~ 2 월분 )  Rapid : 유도체화에 소요되는 시간이 4 초  Sensitive : 0.5 ppb 정도까지 검출이 가능  Reliable : 검출한계가 요오드를 이용한 방법 과 동일하거나 그 이상이다.  Low cost : 추가적인 장비가 필요 없다.  Safe : 유도체화 시약이 해롭지 않다.  Easy to install