Tissue freezing Instruction for use Preparation instructions CRYO-GOLD 제품이 사용되며 이 제품들은 Ready-to-use이며 다른 첨가 보조제 를 추가하지 않고 사용 합니다. 제품을 사용 하시기 전 70% 알코올로 제품 Bottle 바깥쪽 부분을 닦아 내시고, 제품을 open 할 때에는 멸균조건에서만 open해 주십시오. Storage / Sterility CRYO-GOLD 제품은 2-8ºC에서 냉장 보관 하십시오. Freezing Procedures for Tissue (동결 보존할 수 있는 조직의 크기: 최대 0.3 cm3 ) 동결보존 하고자 하는 Tissue를 saline에 1:10 v/v ratio 정도로 넣어서 (예:0.3 cm3 조직/5 mL Saline) 10분 정도 RT에서 incubation 하면서 조직내의 blood를 충분히 제거 합니다. 2. Washing된 조직을 1:10 v/v ratio로 (0.3 cm3 조직/3 mL CRYO-GOLD) 상온의(~20ºC) CRYO-GOLD와 혼합한 후 조직을 상온에서 (~20ºC) 에서 10분간 incubation 합니다. 3. Incubation후 다시 조직을 새로운 상온에서 (~20ºC) CRYO-GOLD과 혼합한 후 조직을 상 온에서 (~20ºC) 에서 20분간 incubation 합니다. 4. Incubation후 조직을 꺼내어 controlled rate freezer나 또는 isopropanol chamber 에 넣어 (-1ºC/분) -80ºC 냉장고에 동결합니다(slow freezing method). 5. 3~24 시간 후에-80ºC 의 조직을 액체질소탱크에 보관합니다. Thawing Procedures for Tissue 1. 동결보관중인 조직을 액체질소탱크나 -80ºC 초저온 냉장고에서 꺼냅니다. 2. 꺼낸 조직을 즉시 37ºC Water bath에 넣어서 최대한 빨리 해동 시킵니다. 3. Cryovial에서 ice가 거의 녹을 시점에서 Cryovial을 Water bath에서 빨리 꺼냅니다. 4 해동된 조직을 상온(~20ºC) saline 이나 조직배양용액과 1:10 v/v ratio로 혼합한 후 조직을 상온(~20ºC)에서 10분간 incubation 합니다. 이때 가끔씩 조직을 흔들어 CRYO-GOLD가 조직에서 완전하게 빠져 나오게 합니다. 5. Incubation이 끝난 후 조직을 다시 한번 상온(~20ºC) saline 이나 조직배양용액과 와 1:10 v/v ratio로 혼합한 후 조직을 상온(~20ºC) 에서 10분간 incubation 합니다. 6. Incubation이 끝난 후 조직을 꺼내서 20~37ºC로 데워진 조직배양용액과 1:10 v/v ratio로 섞어서 조직들을 사용 합니다. Revive Organtech, Inc Contact : lee.hyungtaek@gmail.com Website : www.reviveorgantech.com